出凝血功能的常用检测方法及其在心血管疾病中的临床应用讲稿.ppt

出凝血功能的常用检测方法及其在心血管疾病中的临床应用,中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管医院心血管病研究所心脏肺循环研究室,第一部分:出凝血的机理凝血系统抗凝系统纤溶系统,第二部分:,常用检测方法ptptainrctapttactbtbpc,第三部分,常用抗血小板药物，抗凝药物，溶拴药物的作用机制及其监测方法。抗血小板药物(阿司匹林、抵克力得、潘生丁)抗凝血药物(肝素、低分子肝素、华法令)抗血栓药物(尿激酶uk、链激酶sk、t-pa、rt-pa),凝血因子命名国际委员会于1959年8月召开专门会议对已发现的十二种凝血因子根据被发现的顺序以罗马数字予以命名,纤维蛋白凝血酶原组织因子钙离子易变因子稳定因子抗甲种血友病球蛋白抗血友病因子乙斯多特柏劳因子（stuart-prowerfactor)抗血友病因子丙接触因子纤维蛋白稳定因子是因子的活化形式，不是独立的因子,凝血瀑布,内源性通路,外源性通路,内源性凝血途径,外源性凝血途径,受损组织释放组织因子tf+viica2+,xav,ca2+pf3凝血酶原凝血酶a纤维蛋白原纤维蛋白a可溶性纤维蛋白聚合体不溶性纤维蛋白聚合体,共同通路,表面损伤xiixiixviiica2+pf3x,x,凝血系统,三个阶段(一)凝血活酶形成阶段(二)凝血酶形成阶段(三)纤维蛋白形成阶段,vii因子激活,x因子激活,凝血酶原转化为凝血酶,凝血酶原,凝血酶,磷脂,纤维蛋白原的转化,凝血酶,纤维蛋白原,纤维蛋白肽a和b,抗凝系统,（一）at-丝氨酸蛋白水解酶抑制物，对已激活以丝氨酸为活性中心的凝血因子有抑制物作用a、a、a、a、a、aat-64,000的糖蛋白，由单一多肽链组成，它可与丝氨酸蛋白水解酶的活性中心按1：1定量结合。使四种已被激活的凝血因子灭活。at-占血浆中总抗凝血酶活性的5067%,抗凝系统,（二）肝素肝素作用于at-的赖氨酸残基而使抗凝血酶作用增强1000倍at-肝素肝素at-复合物凝血酶凝血酶at-复合物肝素at-凝血酶复合物游离出的肝素可循环使用,纤维蛋白溶解系统,纤溶激活物(t-pa，uk，sk)纤溶酶原纤溶酶(pl)纤维蛋白(fg)纤维蛋白降解产物(fdp)fgpl片断xpl片断ypl片断e小分子多肽a.b.c片段d片断d纤维酶原（plasminogen,plg)纤溶酶（plasmin,pl）,凝血时间（clottingtime，ct）,原理：血液离体后接触带负电荷的表面（玻璃器材）时被激活，激活内凝系统正常值：412min本试验操作简便可以用手掌保温，在床旁由医师进行，既往最为常用。应用肝素后ct延长至正常2倍左右，2030min,活化部分凝血活酶时间(activatedpartialthromboplastintime，aptt）,原理：以白陶土等为激活剂充分激活之后，测定被检血浆的凝固时间正常值：3545s病人结果较正常延长，超过10s有意义意义：(1)参加凝血活酶形成的因子，如、，血友病甲、乙、丙。(2)凝血酶原，纤维蛋白严重(3)肝素抗凝治疗时其中肝素抗凝治疗期间要求aptt延长到正常值1.52.5，是监测肝素用量较理想的试验。常用范围75100s阜外医院(6080s)100s可导致出血,活化凝血时间（activatedclottingtime，act）,原理：同试管法全血凝固时间(ct)，但因试管内预先加入少量接触活化用凝血活酶混悬液，能充分激活血中，并为凝血反应提供丰富的催化表面，使凝固时间缩短，比ct更敏感，且节省临床医师床边监测的时间。正常值：59.2117s应用肝素后的预期值180300s,凝血酶原时间（prothrombin，pt）,原理：在被检血浆中加入过量的组织因子（兔脑或胎盘浸液）和钙离子使迅速生成外源性凝血酶原激活物，后者能使被检血浆迅速凝固，其所需时间称为pt，主试验主要检测外源性凝血系统。检测、含量和活性,凝血酶原时间（prothrombin，pt）,正常值：pt1114spta(%)80120%inr10.15(0.851.15)pr(凝血酶原时间比值)病人pt(s)/正常对照pt(s)pt延长至正常2倍时，pr值约增至2倍inrpr|s|s|国际标准化比值(internationalnormalizedratio，inr)pr凝血酶原时间比值|s|国际敏感指数(internationalsensitivityindex，|s|)inr与pt成正比华法令抗凝治疗要求与pta成反比pt1114s2030spta80-120%3050sinr0.851.1523,血小板的功能,血小板计数bpc1030万/mm3称为血小板减少常见于1.血小板生成：见于造血功能受到损害，如再障、急性白血病、急性放射病2.血小板破坏：见于原发性血小板减少性紫癜(itp)，脾功能亢进3.血小板消耗过多：如弥漫性血管内凝血(dic),血小板的功能,血小板粘附功能(pletletadhensivetest，padt)血小板所具有的能粘附于胶原纤维及其他带负电荷物质表面的特性，称为粘附功能。以粘附率表示，当一定量抗凝血液与一定表面积的异物表面(如玻璃珠或玻璃瓶内壁)接触一定时间后，即有一定数量的bpc粘附于异物表面，测定其粘附前、后bpc数值之差，便于计算出粘附率。正常值：男性34.95.95%女性39.45.19%,血小板黏附,内皮,胶原蛋白,血小板黏附,血小板的功能,血小板聚集功能(pletletaggregationtest，pagt)血小板之间相互粘着的特性称为血小板聚集聚集诱导剂：adp胶原、凝血酶、肾上腺素测定：血小板聚集仪、用诱导剂adp正常值：最大聚集率为：62.716.1%,有关纤溶亢进的检查,3p试验：血浆鱼精蛋白副凝试验(plasmaprotamineparacoagulationtest，3p试验)原理：检测fdp的存在抗凝血浆0.5ml1%鱼精蛋白溶液0.05ml，37水溶15min可见纤维蛋白丝阳性fdp与纤维蛋白单体结合(fm)+鱼精蛋白使fdp与fm分开fm自行聚合（副凝）正常：3p试验(一)临床意义：1.dic继发纤溶亢进期3p(+)阳性率68.178.9%2.溶拴治疗后3p可呈阳性(+),有关纤溶亢进的检查,fdp定量(fibrinogendegradationproduct，fdp)正常值：正常人血清中fdp含量5000ug/ml,抗血小板治疗（抑制血小板的粘附和聚集功能）,阿斯匹林：抑制环化加氧酶使txa2，抑制血小板聚集血小板膜磷脂阿斯匹林花生四烯酸()环化加氧酶环内过氧化物(pgg2、pgh2)txa2合成酶txa2血小板释放adp使环化加氧酶活化中心的丝氨酸乙酰化促进血小板聚集而失活，因而txa2，抑制血小板聚集,水杨酸,乙酰水杨酸,抗血小板治疗（抑制血小板的粘附和聚集功能）,潘生丁(persaritin，双嘧啶胺醇)使camp抑制血小板聚集，抑制磷酸二酯酶增加血小板内camp，抑制血小板聚集atp腺苷酸环化酶camp磷酸二酯酶5amp,抗血小板治疗（抑制血小板的粘附和聚集功能）,抵克力得(ticlopidine，噻氯匹定)抑制adp、胶原、凝血酶等诱生剂对bpc的聚集1.抑制胶原、adp、凝血酶和肾上腺素等诱发的血小板聚集2.腺苷酸化酶，使血小板内camp，抑制血小板聚集,c14h14clnshcl301.6,剂型250mg/1片10片/和剂量250mgqg副作用：wbcbpc胃肠道刺激,抗凝血药物,低分子量肝素(lowmolecularweightheparin，lmwh)以普通肝素为原料，通过层析、化学修饰和酶解等方法制成的普通肝素由两类分子组成：类和类(a、b)类与at-亲和力较弱a与at-亲和力极强，并具有抗a活性b与at-亲和力极强，具有抗a活性lmwh含有75类，25a，而b含量极少因此，lmwh有很强的抗a活性和at-亲和力，而抗a活性则较低,普通肝素与低分子肝素的比较,低分子肝素2:1-4:120001200024h高无需,抗xa:iia活性比值分子量作用持续时间与内皮细胞结合能力生物利用度需aptt监测致出血倾向对血小板抑制作用,普通肝素1:130005000045h低需要,antman1998,生产制造过程肝素的来源盐的性质平均分子量，分子量分布分子链末端的结构硫酸化程度抗xa:iia活性比值药代动力学，药效学特性临床循证,低分子肝素之间的不同点,克赛clexane,速碧林fraxiparine,法安明fragmin,不同低分子肝素的分子链末端结构不同,*来源为牛+猪肝素；其他均为猪肝素,不同低分子肝素的制备：降解方法和精确的制造过程决定不同的分子量分布,j.fareed,j.m.walenga,d.hoppensteadtetal.biochemicalandpharmacologicinequivalenceoflowmolecularweightheparins.annn.y.acad.sci.1989;556:333-353,nadroparin速碧林,enoxaparin克赛,dalteparin法安明,parnaparin栓复欣,ardeparin,tinzaparin,cy222,certoparin,heparin(pm)普通肝素,低分子肝素的分子量分布不同,r.j.linhardt,d.loganathan,a.al-hakimetaloligosaccharidemappingoflowmolecularweightheparins:structureandactivitydifferences.j.med.chem;1990;33;1639-1645,低分子肝素的平均分子量不同,低分子量肝素(lmwh),anti-xaanti-iia比率(iu/mg干质)(iu/mg干质)enoxaparin1依诺肝素(克赛)102.824.94.1nadroparin1那屈肝素(速碧林)103.629.93.5reviparin2瑞肝素127363.5dalteparin1达肝素(法安明)167.264.22.4certoparin1舍托肝素106.444.72.4tinzaparin1亭扎肝素99.653.71.9ufh3肝素1931931.0,1.europeanpharmacopeiacommission(march1994)2.knollpharma3.hirshj,etal.chest1998;114:489s-510s4.bergqvistd,etal.brjsurg1995;82:496-501,anti-xaactivitywasmeasuredusinganamidolyticassay(chromogenicsubstrates-2222).anti-iiaactivitywasmeasuredusingactivatedpartialthromboplastintime4,lmwh,low-molecular-weightheparinufh,unfractionatedheparin,低分子肝素治疗不稳定性心绞痛和非q波心梗,研究名称低分子肝素vs.对照组结果frisc法安明vs.安慰剂+/-frisc-ii法安明vs.安慰剂/介入vs.非介入-fric法安明vs.普通肝素+/-timi-11a克赛(1.0mgvs.1.25mg/kg)剂量范围研究fraxis速避凝vs.普通肝素-essence克赛vs.普通肝素+timi-11b克赛vs.普通肝素+,速避凝0.1ml/10kgq12h皮下,1-6天,速避凝0.1ml/10kgq12h皮下,速避凝0.1ml/10kgq12h皮下,7-14天,不稳定性心绞痛和非q波心梗,低分子肝素安慰剂,普通肝素静脉,fraxis,低分子肝素安慰剂,n=3,46817国家179中心,设计：随机，三盲，安慰剂对照，平行组，多中心主要临床终点:14天时的心因死亡，心梗和再梗/再发心绞痛,fraxis,有效性：死亡，心梗或再发心绞痛,18.1%,0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,0,4,8,12,16,90,14天速避凝,6天速避凝,20.0%,%,天,17.8%,普通肝素,26.2%,22.2%,22.3%,mce,fraxis(速避凝nadroparin)结果,主要临床终点(心因死亡，心梗，再发心绞痛)在6天和14天时，三个治疗组之间没有显著差异但是速避凝14天治疗组在第3个月时，明显较差延长至14天的速避凝治疗，非但没有取得附加的临床收益，而且增加病人出血的危险,试验设计,克赛1mg/kgq12h皮下+阿司匹林,普通肝素静脉，调整剂量+阿司匹林,14天,14天,30天,30天,不稳定性心绞痛和非q波心梗,治疗期至少48小时,最长8天,随访期,n=3,171,essence,1年,1年,mi,myocardialinfarctionasa,acetylsalicylicacidufh,unfractionatedhepariniv,intravenous,cohenm,etal.nengljmed1997;337:447-52goodmansg,etal.jamcollcardiol2000(inpress),25,20,15,10,5,0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26,28,30,30,普通肝素,克赛,入组后天数,发生心脏事件的病人%,14天,30天的事件累计：死亡，心梗或复发心绞痛,p=0.019,p=0.016,essence,cohenm,etal.nengljmed1997;337:447-52,结论,essence,克赛明显减少不稳定性心绞痛和非q波心肌梗塞患者14-天时三重终点事件(死亡,心肌梗塞,复发性心绞痛)发生率,并持续下降到第30天这种优越性是在没有增加严重出血事件发生率的前提下取得的,但轻微出血事件发生率增加了，主要是由于注射部位淤斑造成的,cohenm,etal.nengljmed1997;337:447-52,事件累积发生率(%),p=0.022,essence-1年随访,p=0.016,1年时的心脏事件的累计:死亡,心梗,再发心绞痛克赛的治疗优势在1年时依然存在,结论,在1年时,同普通肝素治疗组相比，克赛组患者死亡、心肌梗塞或复发性心绞痛事件发生风险明显下降(p=0.022)essence研究中克赛相对于普通肝素在第14天和30天的显现的早期治疗优势可保持到1年在1年时，同普通肝素组相比，克赛组患者医疗花费明显减少克赛组患者持续减少了住院时间、心脏手术率和30天住院治疗和占用医生时间花费美国对患者统计结果显示，克赛治疗组患者每人可节约超过us$1000,essence-1年随访,克赛固定剂量65kg40mg60mgq12h,试验设计,克赛30mg静注+1.0mg/kgq12h皮下,普通肝素70u/kg静注+15u/kg/h静脉,不稳定性心绞痛非q波心梗,急性期最短72h,最长8天,慢性期,固定剂量安慰剂皮下q12h,43天,n=3,910,timi-11b,延长35天,发生第一次事件的时间(三重终点):急性期克赛组48小时事件发生率明显下降,10,8,6,4,2,0,8,16,32,40,48,56,72,普通肝素,克赛,随机后小时,发生事件病人%,7.3%,5.5%,相对风险降低：23.8%p=0.029,tripleendpoint,death/myocardialinfarction/urgentrevascularizationufh,unfractionatedheparin,antmanem,etal.circulation1999;100:1593-1601,timi-11b,死亡，心梗或急诊血运重建,timi-11b,主要临床终点:43天死亡，心梗或急诊血运重建,timi-11b,结论：急性期,克赛在急性期治疗不稳定性心绞痛和非q波心梗，减少死亡和严重心脏缺血事件方面，明显优于普通肝素具有这样的优越性的同时，克赛并不增加严重出血timi11b研究的结果肯定了克赛治疗不稳定性心绞痛和非q波心肌梗塞患者的优越性与克赛初始的临床优势一直维持到第43天，可是并未观察到慢性期治疗有关的心脏事件的进一步降低慢性期治疗中，克赛组的主要出血（病人自发的和与治疗有关的）较安慰剂组有增加，但总数值仍然很低,timi-11b,结论：慢性期,抗凝血酶,抗血小板,低分子肝素-克赛,口服gpiibiiia,直接抗凝血酶药物,普通肝素,