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文档简介

现代测量与实验室管理 年第 期 文章编号: () 微生物检测实验室间比对试验结果分析 陈 彬 郑 晶 黄晓蓉 吴 谦 林 杰 (福建出入境检验检疫局技术中心,福州 ) 摘 要:分析 年福建省辖区开展的两次比对活动的结果,找出参加实验室在检测能力和质量管理体系中存在 的问题。 通过对反馈的定量检测结果进行统计分析,定性结果与指定值的比较,识别出相当数量的食品生产企业在检验和质 量管理方面存在着严重的不足,影响了检测结果的准确性。 建议食品检测实验室通过参加比对试验,找出实验室质量管理体 系中存在的问题,促进实验室检测能力和水平整体提高。 关键词:实验室比对;食品;微生物;检测能力 引言 实验室间比对是按照预先规定的条件,由两个 或多个实验室对相同或类似检测物品进行检测的组 织、实施和评价 。 实验室间的比对实验可用于评 价实验室某些检测项目的检测能力及持续检测能 力,可对实验室的检测能力进行持续监控,确保实验 室检测准确性;有利于实验室检测能力的自我监控, 比对试验中发现的不足之处可及时制定相关的补救 措施改进;识别实验室间的差别;增强了实验室自信 心和信誉度等 。 实验室通过外部比对考核结果, 对内部质量活动进行监控,确保检测结果的质量。 因此越来越受到机构及企业实验室的重视,要求组 织实验室间比对的需求不断增加,我中心为了满足 机构及企业的需求,也为了持续提升福建出入境检 验检疫局辖区出口食品检测实验室的检测与技术能 力,连续两年开展食品中微生物项目的比对试验,评 价两次比对试验结果,分析不满意结果原因,确保食 品检测微生物实验室通过参加比对试验,能够找出 自身实验室质量管理体系中存在的问题,促进实验 室检测能力和水平整体提高。 实验室间比对概况 我中心组织实验室间比对试验活动是依照 畅 和 畅 ,程序 安排如下:制定比对试验方案,由组成专家确认比对 方案可行性,样品制备,制备样品均匀性及稳定性检 验,比对通知,参加实验室报名,发送样品,实验室进 行样品检验并出具检验结果报告,中心组织者进行 报告汇总、结果登记,数据统计分析,形成比对结果 报告,报告发送。 年比对试验考核项目共四项分别为:菌落 总数计数、大肠菌群计数、金黄色葡萄球菌(定性) 和沙门氏菌(定性),有 家实验室报名参加, 家 均完成了四个项目的检测,只有一家未开展致病菌 的检测。 年考核的项目除了以上四项,增加了 副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特氏菌定性检 测,共有 家实验室报名参加,与 年不同的是 参加实验室可以自由选择参加的项目。 参加实验室 包括本中心及下属检验机构共八个,其余均是企业 实验室,以出口水产品企业实验室居多, 年新 增加了一些产品以国内销售为主的食品加工企业实 验室,这些实验室也是第一次参加实验室间的比对 活动。 材料与方法 菌株 比对项目中添加的菌株均来源于美国标准菌种 保藏中心(),购自上海汉尼公司。 比对样品 发放的样品均为细菌的冻干奶粉,并采用玻璃 西林瓶包装。 样品发送前,依据 砄 枟能力验证样品均匀性和稳定性评价指南枠 进行 了均匀性和稳定性试验。 保证测试样品足够均匀, 且在运输期间样品中目标菌和背景菌的构成和数量 不会发生显著变化,在随后统计分析和评价中可以 忽略样品不均匀性和不稳定性的影响。 检测方法 采用国家标准、行业标准或其他等同的标准进 行检测。 比对试验结果 统计学的结果 依据 枟能力验证结果的统计处理和 能力评价指南枠 ,对参加实验室报告的菌落总数、 大肠菌群计数的检测结果及能力状况采用稳健统计 方法处理和评价,当比分数 时为满意结果, 时为可疑结果, 时为不满意结果。 年、 年菌落总数、大肠菌群计数比对结果 见表 。 表 、 年菌落总数、大肠菌群计数比对结果 年份 年 年 项目菌落总数( )大肠菌群( )菌落总数( )大肠菌群( ) 参加实验室数牋pa% 检测值范围 ? 怂 中位值屯噰n% 稳健 比分数 范围 妸 + 满意实验室数牋pa% 可疑实验室数墘z* 不满意实验室数墘p* 满意率d 邋 缮 定性检测的结果 年、 年参加实验室报告的致病菌定性检测结果值与指定值比较,结果见表 。 表 、 年致病菌定性检测比对结果 年份 年 年 项目 金黄色葡萄 球菌 沙门氏菌 金黄色葡萄 球菌 沙门氏菌副溶血性弧菌 单核细胞增生 李斯特氏菌 参加实验室数贩p*沣鞍 满意实验室数贩p*沣鞍 不满意实验室数珑牋z*屯殮 满意率 挝 噰 t 从、 年比对试验反馈结果来看,两年 参加比对试验的八个检验机构的结果均为满意,但 辖区内企业实验室的微生物项目比对结果良莠不 齐,暴露出不少食品生产企业检验方面存在着严重 的不足。 从表 、表 可以看出菌落总数测试满意 率最高,分别为 畅 、畅 ;大肠菌群测试满意 率 年为畅 , 年提高到畅 ;金黄色 葡萄球菌测试满意率 年为 畅 , 年下 降为 畅 ; 沙门氏菌测 试满意率 年为 畅 , 年下降为 畅 。 年金黄色葡 萄球菌和沙门氏菌测试满意率比 年都有较大 幅度的下降,这和 年参加这两个项目的大多数 企业实验室是第一次进行比对试验,对这样的比对 活动不了解,也缺乏经验,自身的能力不足等原因, 造成结果不准确。 年新增加两个项目:副溶血 性弧菌测试满意率为;单核细胞增生李斯特氏 菌测试满意率为畅 。 分析 对提交的检测记录和报告结果来看,辖区不少 实验室在质量体系管理中存在漏洞,影响了检验质 量。 主要存在以下几方面原因:一是个别实验室采 用作废标准;部分实验室未按标准方法的流程来检, 随意省略或减少操作步骤;二是实验室检测人员的 资历、专业经验、检验能力不足,检测知识培训不够, 对测试项目的各项特征掌握不到位;三是大部分实 验室对使用的培养基及试剂未做验证,提高了检测 失误率。 另外,还存在实验记录不规范,记录包含的 信息量少,如无细菌生长特征和生化特征描述、检测 步骤不全等,无法从反馈的结果报告中发现问题。 以下针对每一项比对项目在检测过程中可能造成错 误结果的原因进行详细分析。 畅 菌落总数计数结果分析 年和 年共有 家结果可疑, 家的结 果不满意。 个实验室结果偏低, 个实验室结果偏 高, 个实验室报告菌落计数结果为 个 , 该数据无法统计作为离群值处理。 造成不满意结果 可能存在以下几个方面的原因:)样品未完全混匀; )移液的量不准确;)实验操作过程未按无菌操作进 行;)所使用的培养基、试剂未经过验证;)倾注培养 基温度过高;)比对样品中添加蜡样芽胞杆菌,这类 细菌的菌落较大,容易相互掩盖,而且容易形成蔓延 菌落,如果不细心观察平板上菌落,也会导致数值偏 低;)报告菌落计数结果为 个 ,这和操作 上的错误有关,报告的单位也不正确。 畅 大肠菌群计数结果分析 年 家实验室参加大肠菌群测试,采用 大肠菌群 (最大可能数)计数法,其中 家实 验室结果报告 , 年 家实验室 参加大肠菌群测试,其中 个实验室结果报告分别 为 畅 、 、 、 或 , 个 实验室结果报告阴性,以上实验室给出的结果不是 具体数值无法进行统计,作为可疑或不满意结果处 理。 其余有两家结果偏低,一家结果偏高。 造成不 满意结果除了与菌落计数 ) )原因相同外可能 还存在以下几个方面的原因:)稀释倍数不够,检 测结果为 ,造成提供的结果无法统 计;)报告 ,可能在多步骤的稀释 中被污染造成;)查 检索表,报告每 ()大 肠菌群的最可能数,不能用阴性或阳性来表示结果。 畅 、 也是错误的报告方式。 畅 金黄色葡萄球菌测试结果分析 两次的比对结果共有 家实验室报告了假阴 性结果, 家实验室报告了假阳性结果。 造成不满 意结果可能存在以下几个方面的原因:)在金黄色 葡萄球菌分离平板上挑取可疑菌落时,没有选中正 确的菌落或挑取菌落的数量不够,造成漏检;) 畅 中规定对金黄色葡萄球菌进行筛 选时应采用 琼脂和血平板两种选择性 培养基,而有些实验室只使用了 平板, 也可能导致漏检;)判断血浆凝固酶试验结果的凝 固状态不好掌握导致假阴性或假阳性结果,因为 畅 规定将试管倾斜或倒置时,呈现凝块 或凝固体积大于原体积的一半,被判定为阳性结果。 而 规定以内容物完全凝固,使试 管倒置或倾斜时不流动者为阳性;)培养基、试剂 的质量好坏是关键的因素,比如血浆凝固酶质量的 好坏直接影响判定,各个公司生产的 琼脂质量差异也较大等。 )在进行金黄色葡萄球 菌血浆凝固酶试验时,有些实验室没有设阴性对照 和阳性对照,导致结果判断缺少对照依据而出现假 阳性或假阴性结果。 畅 沙门氏菌测试结果分析 两次的比对结果共有 家实验室报告了假阴 性结果, 家实验室报告了假阳性结果。 出现错误 结果可能是以下几个方面的原因造成:)报告假阴 性结果的实验室,大部分未做前增菌,由于提供的比 对样品是冻干奶粉,添加的细菌在冷冻干燥过程容 易受损,因此需要经过前增菌使其恢复,未经前增菌 容易造成假阴性的结果;)在检测的样品中添加了 一定种类和数量的干扰菌比如弗氏柠檬酸杆菌,这 些菌种的某些生化特征与目标菌较相似,造成部分 对目标菌的生化学、血清学等特性不熟悉的实验室, 出现将目标菌判为阴性,或将非目标菌判为阳性的 错误结果;)实验室使用的培养基和试剂的质量优 劣直接影响到检验结果的正确与否,比如尿素酶、分 离平板的质量好坏,直接影响实验结果。 有多个实 验室挑取可疑菌落后,经尿素酶反应的结果为阳性, 判定为未检出,造成了假阴性的结果;)个别实验 室由于在实验过程中未严格按照标准要求选用两种 及以上的选择性培养基进行分离,从而降低了发现 可疑菌落的概率,造成目标菌的漏检结果。 )个别 实验室在挑取可疑菌落时,挑取的菌落数量未按标 准要求,有的甚至仅挑了一个可疑菌落进行鉴定,明 显增加了漏检的概率。 )有些企业实验室为了节 约成本,在致病菌检测程序上进行省步骤,有的在增 菌或平板分离步骤就进行判定,未做进一步的生化 鉴定;有的只做了一些简单生化鉴定;大部分实验室 都没有进行血清学试验等原因,造成检测结果错误。 畅 副溶血性弧菌测试结果分析 个实验室报告了错误的结果,均为假阴性结 果。 有两个实验室在 上都有副溶血性弧菌典 型的菌落生长,但在进行生化鉴定时,有几个项目结 果与副溶血性弧菌典型的生化特征不符,可能是挑 取的菌落不纯所致,如无盐胰胨水为阳性等。 畅 单核细胞增生李斯特氏菌测试结果分析 个实验室报告了错误的结果,主要原因是没 有做溶血试验。 由于在发送的比对阴性样品中添加 了英诺克李斯特氏菌,李斯特氏菌属是小的革兰氏 阳性杆菌,生化反应现象非常相近,区分比较困难。 在科玛嘉显色培养基上,虽然只有单核细胞增生李 斯特氏菌会产生白色晕轮,但白色光环的出现受培 养基配制中增补剂的添加状态影响较大,因此需要 采用溶血试验来区分,因为英诺克李斯特氏菌无溶 血现象,通过溶血实验可将英诺克李斯特氏菌和单 核细胞增生李斯特氏菌区分开来,否则就会出现假 阳性或假阴性结果 结论 检验机构及企业实验室应该积极参加实验室间 比对,这样既能发现自身的不足,又能看出与同类实 验室之间的差距,从而找到了自身不足之处和差距 所在,有针对性的采取措施来纠正发现的问题,加强 实验室质量管理,使实验室不断丰富管理与检测经 验,提升检测能力和质量管理水平。 参加比对试验的实验室应认真对待实验室间比 对,从以下几个方面加强实验室内部质量管理,提高 检测水平,保证比对检测结果的准确、可靠。 建立 健全实验室质量管理体系,使实验室的全体人员都 了解建立质量管理体系的重要性,理解员工在建立 管理体系工作中的职责和作用,做好质量管理体系 的持续改进,提高质量管理水平。 企业检验人员 应该相对稳定,人员的经验会影响检测结果的准确 性,应加强对检验人员的技术培训,严格把握检测过 程中的关键点,熟悉各种目标菌的检验步骤及生化 学和血清学特征。 实验室新购买的菌种、培养 基、诊断血清、试剂等要索取合格证和检测报告,在 使用前,经验证合格才能使用;使用两种以上不同生 产商或不同批次的产品进行确认,避免因培养基或 试剂问题造成误判。 当需要采用 法进行计 数时,由于比对样品中可能添加大量的菌,不能再按 常规采用 稀释度,应该进一步稀释到可 选择的三个合适稀释度,最终给出的数据应是确定 的数值。 根据最新版本检测标准,选择正确增菌 步骤,两种以上分离平板分离目标菌,并选取多个可 疑菌落进行鉴定,在生化性质相近的干扰菌存在时 有效分离出目标菌。 在实验中设置阳性菌株对照 和阴性菌株对照,并对实验全过程进行质量监控。 实验室加强技术储备,可采用多种方法对可疑结 果进行确证。 参考文献 国家质检总局国家标准化管理委员会 利用实验室间比对的能力验证第一部分:能力 验证计划的建立和运作 北京:中国标准出版 社, 雷质文 食品微生物实验室质量管理手册 北京: 中国标准出版社, 国家质检总局国家标准化管理委员会 利用实验室间比对的能力验证第二部分:实验 室认可机构能力验证计划的选择和使用 北京:中 国标准出版社, : 能力验证样品均匀性和稳定性评价 指南 能力验证结果的统计处理和能力评价 指南 食品安全国家标准 食品微生物学 检验金黄色葡萄球菌检验 北京:中国标准出版 社, 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法 北京:中国标准出版社, (上接第 页)配合散点图及趋势线(指数函数 类型)如图 所示。 图 水中碘测定标准曲线散点图及趋势线 )获取相关指数 r 后,用图 计算表计算 类不确定度。 讨论 )本文由 散点图的趋势线直接给出相关 回归参数以及相关指数等统计参数,很方便的计算 分析结果的 类不确定度,并可以对不同的函数方 程的优劣进行优选。 )应用公式 l剩余 ( r ) l yy计算剩余平方 和,避免了一些复杂的运算,并且适用于线性、非线 性的多种函数方程关系。 )应用公式 urel(y)s y yi 计算相对不确定度,以 样品测定 y 值的均数为基础,这样可以避免将 y 值 标准不确定度 sy转化成相应的 x 值的麻烦,而且 s

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