（外科学专业论文）tp、vegf的表达与肝癌血管生成的关系.pdf

目录 一、摘要 中文论著摘要1 英文论著摘要：3 二、英文缩略语5 三、论文 前言6日c 舌6 材料与方法8 实验结果1 1 讨论”1 7 结论一2 1 四、本研究创新性的自我评价2 2 五、参考文献2 3 六、附录 综述2 5 在学期间科研成绩3 3 致谢”3 4 个人简介3 5 中文论著摘要 t p 、v e g f 的表达与肝癌血管生成的关系 目的 检测7 2 例肝癌组织及1 9 例正常肝组织中胸苷磷酸化酶( t p ) 、血管内皮细胞生 长因子( v e g f ) 及微血管密度( m v d ) 的不同表达水平，分析它们在肝癌组织和正 常肝组织中表达的差异性；对肝癌组织中t p 和v e g f 的表达与肝癌血管生成进行 相关性分析，探讨两者在肝癌血管生成中的协同作用，以及能否为临床治疗提供 新思路。 材料与方法 一、材料 1 、肝癌组：收集中国医科大学盛京医院2 0 0 8 年1 月_ 2 0 0 9 年3 月行肝癌根治 性切除术的肝细胞癌患者7 2 例，所有患者术前均未接受化疗及放疗，所有标本经 常规病理学检查证实为肝细胞癌。7 2 例h c c 中，男性5 0 例，女性2 2 例，年龄2 6 7 7 岁，平均( 5 5 6 + 7 2 ) 岁。 2 、对照组：收集肝脏良性肿瘤( 肝血管瘤、肝囊肿) 周围的j 下常肝组织1 9 例作为对照组。男性1 2 例，女性7 例，年龄2 3 5 9 岁，平均( 4 2 9 + 5 4 ) 岁。 二、方法 手术切除标本经福尔马林固定，石蜡包埋，厚4 9 r n 连续切片，选取肝癌组织 及正常肝组织进行免疫组织化学染色。检测肝癌组织及正常肝组织中的t p 、 v e g f 表达及m v d 均值( m v d 检测用c d 3 4 标记内皮细胞) 。以已知的阳性对照切 片为标准，判定结果。 结果 t p 在肝癌组织中，强阳性、弱阳性、阴性分别为2 8 例( 3 8 9 ) 、2 8 例( 3 8 9 ) 、 1 6 例( 2 2 2 ) ；t p 在正常肝组织中，强阳性、弱阳性、阴性分别为3 例( 1 5 8 1 、 6 例( 3 1 6 ) 、1 0 例( 5 2 6 ) 。v e g f 在肝癌组织中，强阳性、弱阳性、阴性 分别为3 3 例( 4 5 8 ) 、2 3 例( 3 1 9 ) 、1 6 例( 2 2 2 ) ；v e g f 在j 下常肝组织中， 强阳性、弱阳性、阴性分别为3 例( 1 5 8 ) 、5 例( 2 6 3 ) 、1 1 例( 5 7 9 ) 。肝 癌组织t p 、v e g f 阳性表达率明显高于正常肝组织，p 0 0 5 ，差异具有统计学意 义。 m v d 均值在肝癌组、对照组分别为1 9 3 4 + 1 2 14 2 3 + 1 6 6 ，t = 1 2 4 4 5 ，p 0 0 5 ，两 组差异具有统计学意义 肝癌组织中，t p 、v e g f 双阳性组m v d 均值为2 4 7 5 + 3 2 2 ，单阳性组m v d 均值分别为1 4 3 5 + 4 0 0 、11 6 5 4 - 3 1 4 ，双阴性组m v d 均值为4 4 7 + 2 6 0 。双阳性组 m v d 均值明显高于单阳性组和双阴性组，p 值均 0 0 5 ，m v d 值无统计学差异。 本研究中，t p 、v e g f 的表达与e d m o n d s o n 分级、肿瘤包膜是否完整、肿瘤 大小、有无门静脉癌栓明显相关( p 0 0 5 ) 。 结论耋口匕 t p 、v e g f 的表达与肝癌血管生成呈j 下相关，t p 、v e g f 在肝癌血管生成中 具有协同作用。 关键词 胸苷磷酸化酶；血管内皮生长因子；微血管密度；肝癌血管生成；协同作用。 2 英文论著摘要 r e l a t i o n s h i pb e t w e e nt p 、v e g f e x p r e s s i o na n d h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m aa n g i o g e n e s i s o b j e c t i v e b yd e t e c t i n g t h ed i f f e r e n t e x p r e s s i o nl e v e l so ft p 、v e g f 、m v di n p a r a f f i n e m b e d d e dc l i p so f7 2c a s e so fh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a ( h c c la n d19c a s e s o fn o r m a ll i v e rt i s s u e ，a n a l y s i st h ed i f f e r e n te x p r e s s i o nl e v e l so ft h e mi nh c c t i s s u e a n dn o r m a ll i v e rt i s s u e ；a n a l y s i st h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h e ma n de d m o n d s o n c l a s s 、 t u m o rs i z e 、i n t e g r i t yo ft u m o r e n v e l o p ea n dt t p v ；i n v e s t i g a t ew h e t h e rt pa n dv e g f h a v es y n e r g i s mi nh c c a n g i o g e n e s i s ，a n dw h e t h e rt h e yc a np r o v i d ean e ww a yt ot h e c l i n i c a l 饥a t m e n t 1 s a m p l e s m e t h o d ( 1 ) h c cg r o u p ：c o l l e c t7 2p a r a f f i n e m b e d d e dc l i p so fh c c ( w i t h o u tr a d i a t i o no r c h e m o t h e r a p yb e f o r eo p e r a t i o n s ) ，w h i c hw e r eo b t a i n e db yo p e r a t i o ni ns h e n g j i n g h o s p i t a lo f c h i n am e d i c a lu n i v e r s i t yf r o mj a n u a r y2 0 0 8t om a r c h2 0 0 9 a m o n gt h e h c c g r o u p ，i n c l u d e d5 0c a s e so fm a l e ，2 2c a s e so ff e m a l e ；a v e r a g ea g ei s5 5 6 士7 2 y e a r so l d ( 2 ) c o n t r o lg r o u p ：c o l l e c t19p a r a f f i n e m b e d d e dc l i p so fn o r m a ll i v e rt i s s u ei n h e p a t i cb e n i g nt u m o r , i n c l u d e d12c a s e so fm a l e ，7c a s e so ff e m a l e ，a v e r a g ea g ei s 4 2 9 4 - 5 4y e a r so l d 2 m e t h e d a p p l y i n g s pi m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n t e c h n i q u e ，d e t e c t t h e d i f f e r e n t e x p r e s s i o nl e v e l so ft p 、v e g f 、m v da l lo ft h es a m p l e s t od e t e r m i n et h er e s u i t a c c o r d i n gt op o s i t i v ec o n t r a c tc l i p s 3 r e s u l t t p 、v e g fa r em a i n l ye x p r e s s e di nc y t o p l a s mo ft h eh c cc e l l s ；c d 3 4 ，w h i c h m a r k e di nv e s s e l ，i sm a i n l ye x p r e s s e di ns t r o m a t pe x p r e s s i o ni nh c cg r o u p ，t h er a t e s o fs t r o n gp o s i t i v e 、w e a kp o s i t i v ea n dn e g a t i v ea r e2 8c a s e s ( 3 8 9 ) 、2 8e a s e s ( 3 8 9 ) a n d1 6c a s e s ( 2 2 2 ) ；i nb e n i g ng r o u p ，r a t e sa r e3c a s e s ( 1 5 8 ) 、6c a s e s ( 3 1 6 ) a n d 10c a s e s ( 5 2 6 ) w h a t 、sm o r e ，v e g fe x p r e s s i o ni nh c cg r o u p ，t h er a t e so fs t r o n g p o s i t i v e 、w e a kp o s i t i v ea n dn e g a t i v ea r e3 3c a s e s ( 4 5 8 ) 、2 3c a s e s ( 31 9 ) a n d1 6 c a s e s ( 2 2 2 ) ；i nb e n i g ng r o u p ，r a t e s a r e3c a s e s ( 1 5 8 ) 、5 c a s e s ( 2 6 3 ) a n d11 c a s e s ( 5 7 9 ) m v dm e a n i s19 3 4 + 1 21p i e c e s h p 、4 2 3 + 1 6 6p i e c e s h ps e p a r a t e l yi n h c cg r o u pa n db e n i g ng r o u p t h e r ea r ea p p a r e n tv a r i a b i l i t i e so ft p 、v e g f 、m v d e x p r e s s i o n sb e t w e e nh c cg r o u pa n db e n i g ng r o u p ( p 0 0 5 ) i nh c cg r o u p ，c a s e so fb o t ht pa n dv e g fe x p r e s s i o np o s i t i v e ，m v dm e a ni s 2 4 7 5 + 3 2 2 ；c a s e so fw h e t h e rt po rv e g fe x p r e s s i o np o s i t i v e ，m v dm e a n sa r e 1 4 3 5 + 4 0 0 、1 1 6 5 + 3 1 4 ；c a s e so f b o t ht pa n d v e g f e x p r e s s i o nn e g a t i v e ，m v dm e a n i s4 4 7 + 2 6 0 t h e r ea r ea p p a r e n tv a r i a b i l i t i e sb e t w e e nb o t hp o s i t i v eg r o u pa n ds i m p l e p o s i t i v eg r o u p ，a s s a m ea sb e t w e e nb o t h p o s i t i v eg r o u p a n d n e g a t i v e g r o u p ( p o 0 5 ) i nt h i sr e s e a r c h ，e x p r e s s i o n so ft p 、v e g fh a v ea p p a r e n tr e l a t i o n s h i p s 、) l ，i t l l e d m o n d s o nc l a s s 、t u m o rs i z e 、i n t e g r i t yo ft u m o re n v e l o p ea n dt t p v ( p 5 0 细胞染 色= 3 。若两者积分之和翌为阴性，2 4 为强阳性【l l 】。 m v d 计数：采用c d 3 4 的表达作为微血管标记，血管内皮细胞染色呈棕黄色。 采用w e i n d e r 微血管记数法，先后在低倍镜( 1 0 1 0 ) 下全面观察切片，以确定瘤内 血管密度最高处，再在高倍镜( 1 0 x 4 0 ) 下以与周围细胞和结缔组织成分明显区别 的任何一个棕色染色的内皮细胞或细胞丛作为一个血管计数。记录5 个视野的微 血管数，取其平均数作该病例的m v d 值【1 2 】。 1 0 ( 五) 统计学处理 使用s p s s l 3 0 软件作统计分析，单因素分析两样本均数用t 检验，多个样本 均数比较用方差分析，样本率的比较用x 2 检验，相关系数根据p e a r s o n 相关方法 计算。p 0 0 5 为有统计学意义。 实验结果 一、t p 在肝癌组和对照组的表达 t p 主要表达于肝癌细胞的细胞浆内，部分肝癌细胞的细胞膜也有表达，肝 癌组的阳性表达率显著高于对照组( 表1 ) 。 表1 ，t p 在肝癌组和对照组的表达 注：经x 2 检验，x 2 = 7 4 4 ，p 0 0 5 ，说明t p 在两组间的表达具有差异性。 二、v e g f 在肝癌组和对照组的表达 v e g f 主要表达于肝癌细胞的细胞浆内，部分肝癌细胞的细胞膜也有表达， 偶有在间质中表达，肝癌组的阳性表达率显著高于对照组( 表2 ) 。 表2 ，v e g f 在肝癌组和对照组的表达 注：经x 2 检验，x 2 = 1 0 0 3 ，p 0 0 5 ，说明v e g f 在两组问的表达具有差异性。 三、m v d 在肝癌组和对照组的表达 c d 3 4 抗体标记染色的微血管，主要表达于血管内皮细胞胞浆内，间质越丰 富的区域表达就越高，表现为内皮细胞染色呈棕黄色。根据w e i n d e r 微血管计数 法，m v d 均值在肝癌组和对照组分别为1 9 3 4 + 1 2 1 、4 2 3 + 1 6 6 ，t = 1 2 4 4 5 ，p 0 0 5 ， 两组差异具有统计学意义( 图1 ) 。 2 5 2 0 墨1 5 1 0 5 o 肝癌组 对照组 图1 ，m v d 在肝癌组和对照组中的表达 肝癌组m v d 均值1 9 3 4 4 - 1 2 1 ，对照组m v d 均值4 2 3 1 6 6 ，经t 检验，t = 1 2 4 4 5 ，p = 毫 1 0 1 2 图2 ，t p 和v e g f 在肝癌血管生成中的协同作用 1 ：t p ( + ) v e g f ( + ) 组m v d 均值2 4 7 5 3 2 2 ； 2 ：t p ( 一) v e g f ( + ) 组m ，d 均值1 4 3 5 4 0 0 ； 3 ：t p ( + ) v e g f ( 一) 组m v d 均值1 1 6 5 3 1 4 ； 4 ：t p ( 一) v e g f ( 一) 组m v d 均值4 4 7 2 6 0 。 组1 组2 ，t = 2 5 6 5 ，p 0 0 5 组1 组3 ，t = 3 2 4 3 ，p 0 0 5 ； 组1 组4 ，t = 5 0 2 8 ，p 0 0 5 ； 组3 组4 ，t = - 4 9 4 7 ，p = 0 0 0 。 五、t p 、v e g f 表达与临床病理资料的关系 本研究中，t p 、v e g f 的表达与e d m o n d s o n 分级、肿瘤包膜是否完整、肿瘤 大小、有无门静脉癌栓明显相关( p o 0 5 ) 。 表3 ，t p 、v e g f 表达与临床资料的关系 注：宰表示p 0 0 5 。 免疫组化图片 l o o 4 0 0 图3 ，t p 在肝癌组织巾的表达，可见癌细胞胞浆呈棕黄色，细胞核形态多样性。 l o o x 4 0 0 图4 ，t p 在正常肝组织中的表达，可见正常肝细胞胞浆无染色，细胞核形态正常。 1 4 1 0 0 4 0 0 图5 ，v e g f 在肝癌组织中的表达，可见癌细胞胞浆呈棕黄色，细胞核形态多样性。 1 0 0 4 0 0 图6 ，v e g f 在正常肝组织中的表达，可见正常肝细胞胞浆无染色，细胞核形态正常。 1 5 1 0 04 0 0 图7 ，m v d 在肝癌组织中的表达，可见大量微血管管腔，微血管内皮细胞被染 成棕色。 1 0 0 x 4 0 0 图8 ，m v d 在正常肝组织中的表达，可见极少量微血管管腔，微血管内皮细胞 呈淡黄色。 1 6 强箨一 曲， 謦 鲴 。ro 一0 。_ “ 争旷 。 r r善，h，一 v小，一一一q一一、 鸯。龟。f”r，、。0。m簟 k 0 志z r 讨论 侵袭和转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因之一。临床及病理研究发现，肿 瘤的无限性快速生长必然导致营养供给相对不足，如果不伴随新生血管形成，肿 瘤生长很难超过l 2i 姗，即肿瘤的形成发展是血管依赖性的【1 3 1 。肝癌的发生、 发展是多种因素共同作用的结果。肝癌血管生成在其中具有重要的作用，它不仅 可以实现瘤组织氧和养料的供给，而且为肿瘤细胞提供了播散转移的捷径，促进 血管形成是肝癌得以生存和发展的关键。肝癌作为典型的多血管肿瘤，其生长、 浸润和转移与血管生成密切相关。目前，已发现多种因子可以促进肝癌血管形成。 研究肝癌血管生成机制，可以进一步了解其生长、浸润和转移机制，为临床治疗 提供新的途径。 t p 和v e g f 在促进肝癌血管生成作用方面近来引起科研人员的关注。 t p 广泛存在于原核生物和真核生物的细胞中。人t p 主要来源于血小板，是 由两条多肽链所构成的同源二聚体。t p 的主要功能为：可逆性地催化胸苷去磷 酸化，维持体内胸苷的稳态水平；还可将脱氧核糖从脱氧核苷上转移给另外的碱 基，形成新的脱氧核苷。1 9 9 2 年，f u r u k a w a 等【4 】克隆了大肠杆菌t p 的e d n a ，发 现其中有1 2 0 个氨基酸序列与人血小板源内皮细胞生长因子( p l a t e l e t d e r i v e d e n d o t h e l i a lc e l lg r o w t hf a c t o r p d e c g f ) 的序列完全一致，这使人们开始关注t p 与p d e c g f 的关系。目前，人们普遍认为t p 和p d e c g f 是同一物质，不仅在胸 苷代谢中有重要作用，而且在体外可刺激内皮细胞趋化和3 h 标记的胸苷渗入， 在体内有促进血管生成活性。为了进一步探讨t p 促进血管生成的机制，s t e v e n s o n 等利用三维血管形成模型研究t p 及相关底物、产物在无血清的情况下对血管生 成的影响，发现高浓度的胸苷、5 磷酸胸苷、1 磷酸2 脱氧核糖均可抑制血管 形成，b 氨基异丁酸( 胸腺嘧啶的代谢产物) 、2 脱氧d 核糖( 1 磷酸2 脱氧核 糖去磷酸产物) 却可明显刺激血管形成和促进血管延长；加入t p 即可减弱胸苷 的抑制效应。因而，认为t p 是通过其酶活性产生相应的产物而发挥促血管生成 作用的。b r o w nn s 等认为t p 催化胸苷得到的次级产物2 脱氧d 核糖在代谢过程 中可产生大量的氧自由基，造成局部氧化应激状态并诱导v e g f 、i l 8 等血管活 性因子表达，最终通过各自的作用途径促进血管生成。但是，t p 及产物的具体 作用环节和机制仍有待于研究。 1 7 一、t p 与肝癌血管生成的关系 现已证明t p 与血小板源内皮细胞生长因子( p d e c g f ) 为同一种物质，是 近年来日益受到重视的肿瘤细胞生长因子之一，尤其在肝癌血管生成中起重要作 用。1 9 9 0 年y o s h i m u r a 等从人胎盘中提纯t p ，并检测了其在人体各种组织中的表 达情况，结果发现在胃、结肠、卵巢、乳腺等部位的癌组织中t p 明显高于相应 的正常组织，而且t 、b 细胞淋巴瘤也高表达t p 蛋白【1 4 1 。本研究中，检测肝癌组 织和正常肝组织中t p 的表达水平，经x 2 检验，x 2 = 7 4 4 p 0 0 5 ，说明t p 在肝癌组 织中的表达明显高于正常肝组织，t p 与肝癌微血管生成相关，在肝癌血管新生 化中起重要作用。t p 促进血管结构生成，主要是通过促进内皮细胞的迁移，而 不是诱导细胞分裂，在这一过程中，发挥主要作用的是t p 的代谢产物2 脱氧d 核糖，而且2 脱氧一d 核糖在两种细胞之间形成浓度梯度，诱导梯度依赖性的内 皮细胞迁移【1 5 】。也有研究认为t p 催化胸苷得到的次级产物2 脱氧d 核糖在代谢 过程中产生大量的氧自由基，造成局部氧化应激状态造成局部氧化应激状态并诱 导v e g f 、i l 8 等血管活性因子表达，最终通过各自的作用途径促进血管生成【9 】。 t p 的抑制剂可以通过抑带m j t p 的血管生成作用阻止肿瘤生长。 二、v e g f 与肝癌血管生成的关系 血管内皮生长因子( v e g f ) 是内皮细胞专一的促有丝分裂因子，主要通过 内皮细胞上f l k 1 、n t 1 、f l t 4 等3 个受体起作用。肿瘤细胞通过缺氧作为最初刺激 信号上调v e g f 的表达。v e g f 具有刺激内皮细胞增殖和增加微血管通透性的双 重功能，在血管生成中起关键作用【1 6 】。本研究中，检测肝癌组织和正常肝组织中 v e g f 的表达水平，经x 2 检验，x 2 = 1 0 0 3 p 0 0 5 ，说明了v e g f 在肝癌组织中的 表达明显高于正常肝组织。本研究中，7 2 例肝癌组织中有1 6 例v e g f 表达阴性， 这说明虽然v e g f 是肝癌血管生成中必需的因子，但其他血管生成因子也发挥着 重要作用。血管丰富的肝癌组织中v e g f 表达比较高，而且肝癌组织内皮细胞较 非肝癌组织有更多的v e g f ，均提示v e g f 在肝癌血管生成中的重要地位。v e g f 表达受肿瘤细胞内基因表达和细胞外环境因素的双重调节。缺氧是肿瘤血管生成 最重要的环境刺激因子，缺氧诱导因子可以刺激v e g f 表达。v o nm a r s c h a l l 的研 究发现，缺氧可通过v e g f 基因的转录和提高v e g fm r n a 的稳定性，从而增加 v e g f 的含量【1 7 】。另一方面，v e g f 的表达还受到肿瘤细胞内一些癌基因的调控， 如p 5 3 、s v 4 0 和w a s 。在肝癌、乙型肝炎病毒中h b x 基因也在确氧诱导的v e g f 表 达上调中起重要作用，这也是乙型肝炎病毒与肝癌发生的一个证据。 三、t p 禾 i v e g f 在肝癌血管生成中的协同作用 b r o w n 等认为t p 催化胸苷得到的次级产物2 脱氧d 一核糖在代谢过程中可产 生大量的氧自由基，造成局部氧化应激状态，并诱导v e g f 的表达，最终通过各 自的作用途径促进血管生成。t p 、v e g f 是目前体内、体外和临床肿瘤研究中非 常活跃的部分。但是，关于t p 、v e g f 相关性的研究报道甚少。用两者共同刺 激体外培养的微血管内皮细胞，在相同的条件下，其细胞数目要比单独用任何一 种时多2 8 倍0 0 ，但体内协同作用未见报道。 本研究进一步分析体内肝癌血管生成过程中，t p 和v e g f 的协同作用。通 过免疫组织化学方法，用微血管密度( m v d ) 间接表示肝癌血管生成程度，经 统计学分析，t p ( + ) v e g f ( + ) 组，m v d 均值2 4 7 5 士3 2 2 ；t p ( ) v e g f ( + ) 组，m v d 均值1 4 3 5 + 4 0 0 ；t p ( + ) v e g f ( ) 组，m v d 均值11 6 5 + 3 1 4 ；t p ( 一) v e g f ( 一) 组， m v d 均值4 4 7 j ：2 6 0 。t 检验单因素分析各组间m v d 均值，t p 、v e g f 双阳性 组m v d 显著高于单阳性组和双阴性组，而单阳性组和双阴性组之间m v d 无显著 性差异，这说明了t p 和v e g f 具有协同作用，在肝癌血管生成中相互协作促进， 共同诱导肝癌血管生成，关于t p 、v e g f 的具体作用机制及基因调控需要我们 进一步研究。 四、t p 、v e g f 表达与i 临床病理资料的关系 肝癌是典型的多血管肿瘤，丰富扭曲的血管是肝癌的重要特征。肝癌组织的 血管丰富程度可预测肝癌根治性切除术后的生存率，因此肝癌血管生成反映了肝 癌侵袭与转移能力。本实验研究分析了t p 、v e g f 作为肝癌血管生成因子，与临 床病理资料之间的关系。研究发现，t p 、v e g f 的表达与e d m o n d s o n 分级、肿瘤 包膜是否完整、肿瘤大小、有无门静脉癌栓明显相关；而与性别、年龄、a f p 、 是否肝硬化、c h i l d 肝功能分级无关。 病理分级采用e d m o n d s o n 法，共分为i 、i i 、四级，本研究发现t p 、 v e g f 的表达与e d m o n d s o n 分级显著相关( p o 0 5 ) ，提示肝癌血管生长因子诱 导促进肝癌血管生成，进而影响肝癌恶性程度，及肝癌的发生发展和转移复发。 本研究中，t p 、v e g f 在包膜欠完整和或无包膜组的表达均高于包膜完整组 1 9 ( p 5 c m ) 的表达均高于小肝癌组( 5 5 c m ) ， p 0 0 5 ，提示t p 、v e g f 作为肿瘤血管生长因子，通过促进肝癌血管生成，影响 了肿瘤的发生发展及生物学特征。小肝癌病理特点为：包膜多完整；癌栓发病率 低；合并肝硬化程度较轻；癌细胞分化较好，恶性程度低；癌周淋巴细胞浸润较 多，患者免疫状态好；单结节占5 9 7 一7 1 7 。已有研究表明t p 、v e g f 、p 1 6 突变、p 5 3 突变、p 2 1 、m d m 2 、e c f 受体等为肝癌侵袭性正相关因子；而转移抑制 基因n m 2 3 h 1 、k a l l 、钙粘连素、整合素等是负相关因子【1 引。这些因子的表达 提示小肝癌的生物学特征略好于大肝癌，但差别不太大，说明小肝癌仍具有肿瘤 的生物学特征。肝癌血管生成在小肝癌发展为大肝癌过程中，起到关键作用，关 于t p 、v e g f 在这一过程中的具体作用机制及基因调控需要我们进一步研究。 肝癌合并门静脉癌栓、肝门或腹腔淋巴结转移的患者，普遍被认为是高侵袭、 易复发、预后差。本研究中，t p 、v e g f 在合并门静脉癌栓组的表达均高于无门 静脉癌栓组( p 0 0 5 ) ，说明了t p 、v e g f 的表达和肝癌的侵袭转移程度呈正相 关，t p 、v e g f 在转移过程中的作用是通过促进肿瘤血管生成而实现的：新生的 血管发育不良且无序，毛细血管基底膜不连续，肿瘤细胞非常容易穿过基底膜上 的空隙进入血液循环，实现肿瘤的血行转移。 本研究没有发现t p 、v e g f 与性别、年龄、a f p 、是否肝硬化、c h i l d 肝功能 分级的相关性，提示肝癌血管生成过程可能不受到这些因素的影响，或者影响很 小。 血、刖景 从肝动脉栓塞治疗肝癌取得肯定疗效的病例来看，抑制肿瘤血供及新生血管 形成的方法，极有可能成为今后肝癌治疗的突破口。 同时，肝癌是一血管依赖性肿瘤，肿瘤血管生成对其发展具有重要作用，因 此更深入地研究其机制对于肿瘤血管生成的靶向治疗具有积极的指导意义。本研 究发现t p 、v e g f 在肝癌血管生成中具有协同作用，联合抑隹j l j t p 、v e g f 的活性， 减少肝癌血管生成，或许能抑制肿瘤的复发转移，改善患者预后。 2 0 结论 t p 、v e g f 的表达与肝癌血管生成呈正相关，t p 、v e g f 在肝癌血管生成中 具有协同作用。 2 1 本研究创新性的自我评价 本研究发现，t p 、v e g f 的表达与肝癌血管生成呈正相关，t p 、v e g f 在肝 癌血管生成中具有协同作用。抑带1 t p 、v e g f 的活性，减少肝癌血管生成，为肝 癌的靶向治疗提供新思路。 参考文献 1 陈孝平，陈汉主编肝胆外科学北京人民卫生出版社2 0 0 5 4 4 9 。 2s u z u k ik ，h a y a s h in ，m i y a m o t oy ，e ta 1 e x p r e s s i o no fv a s c u l a rp e r m e a b i l i t yf a c t o r v a s c u l a r e n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o ri nh u m a nh e p a t o e e l l u l a rc a r c i n o m a c a n c e rr e s ，19 96 , 5 6 ( 3 ) ：30 04 3 0 0 9 3 y o s h i j ih ，k u l i y a m as , h i c k l i nd j ，e ta 1 t h ev a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r k d r f i k - 1i sam a j o rr e g u l a t o ro fm a l i g n a n ta s c i t e sf o r m a t i o ni nt h em o u s eh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m am o d e l h e p a t o l o g y ，2 0 01 ，3 3 ( 4 ) ：8 41 - 8 4 7 4 f u r u k a w a t ，y o s h i m u r a a ，s u m i z a w a t ，e t a l a n g i o g e n i cf a c t o r n a t u r e ，1 9 9 2 ，3 5 6 ( 6 3 7 1 ) ：6 6 8 5s u m i z a w at ，f u r u k a w at ，h a r a g u c h i mm ，e t a 1 t h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s ea c t i v i t yw i t h p l a t e l e t - d e r i v e de n d o t h e l i a lc e l lg r o w t hf a c t o r jb i o lc h e m ，1 9 9 3 ，11 4 ( 1 ) ：9 1 4 6 m i y a d e r ak ，d o h m a en ，t a k i ok ，e ta 1 s t r u c t u r a lo fc h a r a c t e r i z a t i o nt h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s e p u r l e df r o mh u m a np l a c e n t a b i o c h e mb i o p h y sr e s c o m m u n ，19 9 5 ，212 ( 3 ) ：10 4 0 10 4 5 7 t a k e b a y a s h iy ，m i y a d e r ak ，a k i y a m as ，e ta 1 e x p r e s s i o no ft h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s ei n h u m a n g a s t r i cc a r c i n o m a j p njc a n c e rr e s ，19 9 6 ，8 7 ( 3 ) ：2 8 8 - 2 9 5 8s t e v e n s o nd p ，m i l l i g a ns r , c o l l i n sw p e f f e c t so fp l a t e l e t d e r i v e de n d o t h e l i a lc e l lg r o w th f a c t o r | t h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s e ，s u b s t r a t e ，a n dp r o d u c t si nat h r e e d i m e n s i o n a lm o d e lo f a n g i o g e n e s i s a mjp a t h o l ，2 0 0 5 ，15 2 ( 6 ) ：16 41 - 16 4 6 9 b r o w nn s ，j o n e sa ，f u j i y a m ac ，e ta 1 t h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s ei n d u c e sc a r c i n o m ac e l l o x i d a t i v es t r e s sa n dp r o m o t e ss e c r e t i o no fa n g i o g e n i cf a c t o r s c a n c e rr e s e a r c h ，2 0 0 7 ，6 0 ( 2 2 ) ：6 2 9 8 6 3 0 2 10 y a m a g u c h ir ，y a n oh ，i e m u r aa ，e ta 1 e x p r e s s i o no fv a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o ri n h u m a n h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a h e p a t o l o g y ，19 9 8 ，2 8 ：6 8 7 7 11v a s i l i s k a r a v a s i l i s ，v a s i l i k i m a l a m o u m i t s i ，e v a n g e l o sb r i a s o u l i s ，e ta 1 a n g i o g e n e s i s i n c a n c e ro fu n k n o w np r i m a r y ：c l i n i c o p a t h o l o g i c a l s t u d yo fc d 3 4 ，v e g fa n dt s p 1 b m c c a n e e r ，2 0 0 5 ，1 3 5 ( 5 ) ：2 5 12w e i d n e rn i n t r a t u m o rm i e r o v e s s e ld e n s i t ya sp r o g n o s t i ef a c t o ri nc a n c e r a mj p a t h o l ，19 9 5 ( 1 4 7 ) ：9 - 1 9 f o l k m a nj w h a ti st h ee v i d e n c et h a tt u m o r sa r ea n g i o g e n e s i sd e p e n d e n t ? jn a i lc a n c e r i n s t , 1 9 9 0 8 2 ( 1 ) ：4 - 6 14y o s h i m u r aa ，k u w a u r uy ，f u r u k a w at ，e ta 1 p u r i f i c m i o na n dt i s s u ed i s t r i b u t i o no fh u m a n t h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s e ：h i g he x p r e s s i o ni nl y m p h o e y t e sa n dt u m o r s b i a c h e mb i o p h y a c t , a , 1 9 9 0 ，1 0 3 4 ( 1 ) ：1 0 7 - 11 3 15 h o t c h k i s sk a ，a s h t o na w ，k l e i nr s ，e ta 1 m e c h a m i s m sb yw h i c h t u m o rc e l l sa n dm o n o c y t e s e x p r e s s i n gt h ea n g i o g e n i cf a c t o rt h y m i d i n ep h o s p h o r y l a s em e d i a t eh u m a ne n d o t h e l i a lc e l l m i g r a t i o n c a n c e rr e r e a c h ，2 0 0 3 ，6 3 ( 2 ) ：5 2 7 1 6p o l v e r i o na ，c o x o na ，s t a t u e sc ，e ta 1 a m g7 0 6 ，a no r a l ，m u l t i k i n a s ei n h i b i t o rt h a ts e l e c t i v e l y t a r g e t s v a s c u l a re n d o t h e l i a l g r o w t hf a c t o r , p l a t e l e t - d e r i v e dg r o w t h f a c t o r ，a n d k i t r e c e p t o r s ，p o t e n t l yi n h i b i t sa n g i o g e n e s i sa n di n d u c e sr e g r e s s i o ni nt u m o rx e n o g r a f t s c a n c e r r e s e a c h , 2 0 0 6 ，6 6 ( 1 7 ) ：8 7 1 5 8 7 2 1 17v o nm a r s c h a l lz ，c r a m e rt ，h o c k e rm ，e ta 1 d u a lm e c h a n i s mo fv a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t h f a c t o ru p r e g u l a t i o nb yh y p o x i ai nh u m a nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a g u t ，2 0 01j a n ，4 8 ( 1 ) ：8 7 9 6 18h a n h s ，h w a n gt s a