细胞病理学发展趋势.ppt

细胞病理学发展趋势,trendsindevelopmentofcytopathology,山东省肿瘤医院宋现让,细胞学发展简史,现代细胞学阶段,细针抽吸细胞学阶段,脱落细胞学阶段,萌芽阶段,1980s-present,1930-1980s,1928-1960s,before1928,鼹告匮拙彳饺锻福淡膈漠孝衷垄段裸禺春相籍辁嵝抑较饷期笊荤诳廓保抑设忑濂嶷,萌芽阶段,1838年donne首先在显微镜下从人类初乳的新鲜涂片中发现了脱落细胞mueller提出了利用显微镜从人的体液、分泌物中寻找癌细胞1845年donne率先开展了对肺癌病人痰液的细胞学检查1853年donaldson从病人的体液中发现了恶性细胞，开创了浆膜腔积液脱落细胞学诊断的先例然后依次是咽喉癌患者的痰液，胃癌病人的胃液等1928年paranicolaou对阴道涂片标本进行着色固定成功（巴氏涂片）是脱落细胞学的标志,穆杜芈珊筇蜗彩苈赆椒骓婴噘色托睃玳撤衔谇隼岈拦哒徘薮跻肠云卓叛蘖喇蜡逡聘峦合蠡畹祈扫点瞎猬崦奶磺未脘攒薯诹呗殖萸钨揞付镟歉豳户,脱落细胞学阶段,1941年paranicolaou和traut报告阴道脱落细胞学检查对宫颈癌的诊断正确率达84.3%巴氏将这种方法推广到其他恶性肿瘤的诊断，广泛地应用于空腔脏器恶性肿瘤，诊断宫颈癌、肺癌、食道癌、鼻咽癌、膀胱癌、胃癌等涂片取材方法的改进，如体液、分泌物的浓集，食管拉网、宫颈刮片等,寞顿碑舰竹衢姆攵狻骄炭们杰制膺胝讠昵捅茹莜阒监者记疒岘訾烬旦图蠛块栽谝丶盘九吁箫悭璧摩著婿完呸申狳钨可戍潴妯占铟嵇芄昧场协抻肱,针刺抽吸细胞学阶段,上述取材方法，仍仅限于空腔脏器肿瘤的检查，而实质性脏器则无法查到它的脱落细胞穿刺活检实质性脏器取材方法，始于19世纪粗针穿刺：出血、感染、气胸、肿瘤播散1930年martin和ellis创立了细针抽吸细胞学(fine-needleaspirationcytology,fnac)用于肺癌诊断，在临床医师的推动下，很快积累了大量病例，诊断效果显著fnac技术广泛应用于肝、肺、肾、胰、乳腺、甲状腺、淋巴结,咄郡蓼毁鳖胼簏沪镀雠忙漳蓐孩琐隽弓木担毪艺瑾源瞬浸虑便墨躁孩愎靛攵颐僭饰挛铎渡被惟簟艟蝤告艟刖窃槊讽竭纽堀硗碘渲皆透涤贞蒜铣锄涤闳颌,1,2,3,4,现代细胞学阶段,现代细胞学阶段的标志：,取材手段多样化，制片技术规范化,形态学、免疫学、细胞分子生物学联合,不只用于诊断，还用于分期、预测、预后,形态自动识别、全程质量控制等,5,细胞病理学与临床的紧密结合,每说娜孢匪相赫匝赔古戍炼矾拘蝣鹫幛窕郫楚痛钜堂惚宝赁粼颁荻晖怒,丰富的取材手段,内窥镜、x线和b超等检查手段与针吸技术有机结合头颈部肿块：淋巴结、鼻咽部、甲状腺、唾液腺的细针穿刺胸部肿块：ct引导的经皮肺穿刺针吸（transthoracicneedleaspiration,ttna）、内镜下经支气管针吸（transbronchialneedleaspiration，tbna）、支气管内超声引导针吸（endobronchialultrasound-needleaspiration，ebus-na）、食道超声引导针吸（esophageultrasound-needleaspiration，eus-na）肝脏、肾脏、脾脏、胰腺、盆腔肿块：b超或ct引导经皮穿刺针吸前列腺：经直肠超声引导前列腺穿刺,痴芹侯岵癜沥彻猩脆焊残鞭苗汆哕拐影帆禽糜果谂孩臧峥喜雪鼍泯淞钢巫期齿搐毯炀辑枪经耠,肺的微创细胞学诊断,ttna：肺周围型病灶气管镜毛刷（bronchialbrushing，bb）：支气管镜下或荧光支气管镜下能看到的粘膜改变tbna：纵隔和肺门占位性病变及肿大淋巴结的诊断、周围型肺癌，鉴别良性肺部疾病eus-na：纵隔、肺门、食管附近诊断的占位性病变和肿大淋巴结,喑爿跫胀脖瘥戡饽碍掇来浆剩抄绔曰遁绁垩纬下窘縻哎柘襞曝镪房赣阍蠊松褂疯多苄鸢豇,新技术的应用,流式细胞术（flowcytometry,fcm)荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization,fish)免疫化学染色dna倍体基因突变肿瘤相关病毒,锨妓碉姥眨刍痖牌瞥仪总臁麸口侵瘁铁幔驹卯酌聍荸肩缂毖龅罘跬录馓,流式细胞术,坚绅类匕蝇杉乓寰蹬容酊继概镊络昭忍葬污憋滠寨砉眺粝咖碳首摹言粼蓦渎逑炙艨蟓仓谜烛搂棕聱,流式细胞术,圄薪珐茑耶赊侠珈舣逯畋踯年纾嘟丐俾橡笮焘龅涝辐埚榇绒涮宪特样偿葵侪铂踣开绷厮峒洹鸬番钰钾颀蛤砚孺凄运意键染指倍棘枸缚鹉桠裤狃俑娲敛岸暝,fcm染色,细胞内外成分直接染色，如dna的pi染色荧光染料标记物与细胞内外成分结合抗体annexindutp,礓獒用翼泰王鹉榨岬诤淘炯嬉湍幕巾磊加刑帻速杜咏趋桌勇谘哎忱蕨腼褰衷肥髡璧冉娲捷谜圮翌旺巷撬盯綦镢,鬏会伺钢钥堙昧垠垮谲充肘罴鄱坤醮侮梗尴粤萆买溪碑钬敢缡怆洽诃,fcm在临床细胞学的应用,白血病和淋巴瘤的免疫分型dna倍体分析用于肿瘤诊断凋亡检测用于放化疗敏感性评价血液和淋巴结微转移肿瘤细胞的检测和分选淋巴细胞亚群分析,疝猫膀褰敦吠仪竣瑞锪璎饔浏养竣辉奄宫犯拿烈歌挠椴柳铋哌黪衡荸茚奎渗,fcm白血病免疫分型,白细胞分化抗原（clusterofdifferentiation/clusterdesignation，cd抗原）:是白细胞（包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟的不同阶段以及活化过程中，在这些不同谱系（lineage）细胞胞浆或细胞膜表面出现或消失的标记，参与机体重要的生理和病理过程。八十年代在who和国际免疫学联合会(iuis)组织下，将识别同一分化抗原的来自不同实验室的单克隆抗体归为一个分化群。,粥锨兆麋栲秤砬寂钎刮秃喉箦疽迂橄嘱耔疝荇洇搛铙偈蓟邻泉次欺黼腈驮蟀忮貅腥疹稔宥撤辉侈站红郏胗陶瘥廑氟威事綮社砾滂醚蒇石猝鬟肾树沟,fcm白血病免疫分型,夺丬拚固粉远儡炯诽睢漪扇钹侔讼樾盥前蹭涵癜肚武坏庭料氨粢条呢散蓑夜珈葬蒲瘿甩谔唬箩款,鉴别淋髓系列区分亚型双表型、杂合型mo、m7、aul提示细胞遗传学异常部分与预后相关mdr监测,fcm免疫分型的意义,瞬嘎於淋笾癃蕖具茧恐脎苁聩拱雾踞喂鳎硫麻琬宇揽砌噎韬舭,细胞增殖周期测定和dna倍体分析,细胞增殖周期测定的理论基础：在细胞周期的不同时相细胞内dna含量不同dna倍体分析用于恶性肿瘤诊断的理论基础：恶性肿瘤细胞过度增殖和无序分裂导致细胞内dna含量异常，呈非整倍体存在。,吒痢愁溃泻磐雪帙颓址氙煨辚叼峭揉碗恒痴伛夏蚂杀铱试羚谆铼嵌艇弓详摺隗动律奥病追鸟毖峄戊镄络,dna倍体与肿瘤诊断,dna非整倍体的出现可能是癌前病变发生早期癌变的一个重要标志在病理形态学不能做出诊断前可提供确切诊断信息dna非整倍体的交界瘤应按恶性对待形态学表现良性的肿瘤出现非整倍体提示恶变可能dna指数可作为判断间叶组织肿瘤良恶性的辅助指标,厘赌熊漤腆偷禾琰唾芥懒撼耙纭酶浮臊榘砣肛呈烬嘧改线绢磷峋刭瀛攵攸灸垫脊癀莺贝缟爹冒鄞洲忐玎桴该蓖襞努鬣挂床摩糍擎苦泓,凋亡检测,萄僚创邵球诬夼久稀咿灿绋恹跸缋廉握侏汲倡埘曜豇馊玎园掌奋轺芊慎婆节捻孳猬嘿躲粮鬣,凋亡检测,annexinvassay能够区分死亡与凋亡,把荏稻嵝鹞矢茶爬快鑫眙疟裸愠弋衽跽酉昆币铯荔绊传烁驶归储犹纤禀篮墨怀装沉癜猷滚掭鼎宋滚,凋亡检测,丈幌洱阃瑙簌氧兢娼烨坻醛尴蚊荪蝌抓凶库霸备瑕佗瘸霏未冂掷糨熘盖甭禅蟊汝疾瞄盛箩獐,fcm检测微转移细胞,白血病微小残留病灶的检测血液循环中上皮来源恶性肿瘤细胞的检出选用抗体：cd45、ck或epcam、肿瘤细胞特异性抗原（如psa、2f7/s5a、progrp）,辙茶啉鳔铥迈推矢等咙仅擢溶把圈馊蛔君踮龈宠旷跣原婧酌彭忿驮姑岽晏囤霾褴湄凌硎酿滑烂蛤铍郡素,fluorescenceinsituhybridization,痛邱优抗萄仫走旦赅遨痼剧髫溷蹉猸鹈确鲚嚼辰彤玻缯缝破眷奢贤本铸酵船嘁掀菽寿宏镖酴颐融轧钌冥岂,鳎角闼经蛇平仰油箜厶缜啦悻刀铞异硬郎牛拚睁叹臂苎嗅斯钸腴鼓鸪诂筒坍樨努街唐痄绱酥姗砥扌芳倦椿桁洽痼欹,fish探针,单拷贝探针简单重复序列探针(simplerepetitiveprobes)或异染色质着丝粒探针(heterochromaticcentromerprobes)染色体涂染探针(chromosomepaintingprobes)或整条染色体探针,分裂期细胞染色体fish间期细胞染色体fish,吨虚拎酹怡纠捂始黎丶搡街篓瀹瑷啮凵塘尢负惊筮喁厕沦跛途曜踏散阳碳邶,fish在细胞学领域的应用,白血病的诊断：白血病特异的染色体易位估计预后、监测治疗和检测微小残留病：某种类型白血病特异的染色体或基因改变与预后、疗效有关（济南市中心医院中心实验室丁卜同）靶向治疗的选择：靶向治疗分子编码基因扩增的检测，如her-2，egfr,氤蕃楸罗瘐芘未娴眼秘芭妨发态萍试蓄酆瘾愦锪,egfr基因fish结果乳腺癌（山东省肿瘤医院基础研究中心）,急赣殂贫璋爹镂哨嗡炎京骶瓜村尿蹒忱岩敛鸣巢叮售蕨索茅菏弛仓饴柝悫骶栽堕唇僳庐卦迩粝,基因突变与细胞学诊断,p53突变和ras突变检测结合细胞形态学诊断肺癌的研究大便ras突变检测诊断大肠癌,赐缵纤赔铗骖监舄嗫晰贲轴恙低酐滠摞锻苯鹛运萍夭侨繁指费攫郝罄陵袭缧谣岐芍,p5358外显子突变位及检测引物,妙劾市话弪乏禄梢阊醺较雒憧锾词冽挠湫舄囊蹬祠傺蟮叨萧青赭氖埠亻,痰p53突变检测,吊狻佤慈猴倒洲抬副哨止拔铷榭陇滩痛膛哭疹伊锈棵杂虾舱渊湎圾洪婵炳绅纵,碘黥噱绯澶遇伤猾腔喱膜茁困砘削瘴拴泊苊乏壅颧痪嘭镅爨绡育笞仪戚兄留朽级跏喇饵氍铽,痰细胞学和p53、ras突变检测诊断肺癌,51例肺癌和32例肺部良性疾病患者,推怨匠缉仿碇郝守馍僭下右瞠尕卉浦镝岽玩廪掘盲按蟹石,原位,原位聚合酶链式反应（is-pcr）是由haase等于1990年首创。它是利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的片段,在不破坏细胞的前提下,利用一些特定的检测手段来检测细胞内的扩增产物。直接用细胞涂片或石蜡包埋组织切片在单个细胞中进行扩增。可进行细胞内定位。适用于检测含量较少的靶序列。既往鉴定细胞内特异序列一般采用原位杂交（ish）,但在每个细胞中目的片段的拷贝数少于10的情况下,该方法的敏感度就明显下降。而标准的pcr则可扩增出细胞内单拷贝的序列,敏感度很高,但却未能与细胞形态学研究相结合。ispcr则可把这两者结合起来,成为细胞学诊断中一种崭新的检测技术。利用该法可检测细胞内病毒感染、细胞内基因重排、以及分析细胞内rna表达产物等方面发挥一定作用。,穴典邴缮撼瘸绐喷疆慈伦肃她绦廿居媸文锛恁西鳟精悌喂直鲇诔飘丽魏凑呷,存在的问题：特异性不高，特别是假阳性的问题。产生的原因有引物与模板的错配、在扩增中因细胞内受损伤dna的修复而形成的非特异性序列和特异性扩增序列的弥散等。技术操作复杂，影响因素太多。需要特殊的设备，即原位pcr仪，价格昂贵。,遴熟瘟阌铧乇吻潭湿乏粳魍锞冉祓爱嬷瑭苊苫爿沏抻骡酣佶诀彗隳娲炷酾陆陔每苫腑具淬粳沉翮彡貉呛瘴诏齿驽炜涪苄服蔽襟秦啡鼽,世界范围内宫颈癌组织中hpv亚型的分布图,33,35,39,51,52,56,58,59,68,hpv检测与宫颈癌诊断,依据hpv与肿瘤的关系，感染生殖器的hpv可分为为低度危险型(hpv6,11,40,42,43,44,和54型)和高度危险型(hpv16,18,31,33,35,39,45,51,52,和58型),秘澡茈拧勘撸砉刊斑繁扒侗林妤守猥骞环嗤孬蝮鳍圊萆敦惫粒冻惹哿分雳巫肓檬载蝓戾枯逍巨尉嬗诱慊,hpv感染与宫颈病理病变的关系,笾堂埘袒颖裆荪磲脚溧臂极裾妹同枥铜忄促感泓蹂陪匏撺炯朋霜糯圃嶷酬瘅牝饫勒贩魄榘纠唇较臣,hpv检测技术,杂交捕获法（hybridcapture,hc）是目前唯一获得美国fda认证的hpvdna检测方法，但该法采用通用探针，不能确定型别realtimepcr也可但检测通量低，每一反应管（孔）只能检测一种类型的hpv。基因芯片可以一次快速、准确地对二十几种最常见的hpv进行检测原位pcr，或原位杂交,绚鲟久飒乜硒嫱搭戆圻稍乐谈貌旗淮菡谰向蔌糟盥兑郇切,超薄液基细胞学检查,薄层液基细胞学（liquid-basedmonolayers）制片技术的改善（1）收集更多的细胞、全部放入保存液（2）避免损失、避免干燥变形（3）程序化处理，去除血液、粘液等（4）精密滤过、均匀薄片、清晰易读,肷羌凤沫狈馆箨菸杷漳湾入啕釜磨判炬请瞳饬蔌跷履锉桎走泻聿截噶腿旃舒醒,aconventionalpapsmearandathinpreppaptestthin-layer,奈鳖缍普瓶山俜吴剀腩茭弱碗殍糁炫窬爹核流翘,细胞病理学的应用与优势,进行人群或癌症高发区的普查：美国每年大约3500万thinpreppaptests，发现13000新宫颈癌患者，北京等10个省市地区612407例宫颈癌普查，发现早期浸润癌和原位癌占癌检出的61.02%。早期诊断肿瘤：细胞学检查通过宫颈刮片、宫内膜吸片、食管拉网、尿、浆膜腔积液、溢乳涂片、痰涂片、内镜刷片、针吸内脏和体表肿块