（分析化学专业论文）十三种酚类化合物的高效液相色谱法研究.pdf

西北大学硕士学位论文摘要 十三种酚类化合物的高效液相色谱法研究 摘要 酚类物质是一类具有多种生物活性和药理活性的化合物，广泛分布于植物 中。高效液相色谱电化学检测技术( h p l c - e c d ) 在多组分样品分析中得到越来越 广泛地应用。本论文将液液萃取和固相萃取等方法用于样品处理，建立了中药制 剂和蜂蜜中十三种酚类化合物的h p l c - e c d 分析新方法。该研究对于药物和蜂 蜜中酚类化合物的质量控制及拓宽h p l c 的应用范围具有一定的意义。全文共分 四章，作者的主要工作有以下四方面： 1 、建立了抗感解毒颗粒中的绿原酸和黄芩苷的h p l c - e c d 分析新方法。实 验结果表明，绿原酸和黄芩苷在一定的浓度范围内与其各自的峰面积呈良好的线 性关系( r 0 9 9 9 5 ) ，平均回收率分别为9 8 2 和9 7 2 ，r s d ( n = 3 ) 分别为1 3 和 2 4 。该方法快速、灵敏、准确，可为抗感解毒颗粒的质量控制提供依据。 2 、采用液一液萃取的方法，建立了一种测定植物油与富含油脂食品中t b h q 、 b h a 和b h t 的h p l c e c d 分析新方法。研究表明，t b h q 、b h a 和b h t 在一 定的浓度范围内与其各自的峰面积呈线性关系( r 0 9 9 9 7 ) ，三种s p a s 的回收率在 9 5 0 , - - 1 0 4 i ( r s d _ 0 9 9 9 7 ) ，回收率均在9 7 4 1 0 1 6 ( r s d _ 0 9 9 9 5 ) t l l e a v e r a g er e c o v e r i e so fc h l o r o g e n i ca c i da n db a i c a l i na r e9 8 3 a n d9 7 2 ，a n dr e l a t i v e s t a n d a r dd e v i a t i o n sa r er e s p e c t i v e l y1 3 a n d2 4 t h em e t h o di sr a p i d ，s e n s i t i v e ， a c c u r a t e ，w h i c hc a np r o v i d ea b a s i sf o rq u a l i t yc o n t r o lo fk a n g g a nj i e d u g r a n u l e s 2 an e wm e t h o do fh p l c - e c du s i n gl i q u i d - l i q u i de x t r a c t i o ni se s t a b l i s h e df o r s i m u l t a n e o u ss e p a r a t i o na n dd e t e r m i n a t i o no ft h r e es y n t h e t i cp h e n o l i ca n t i o x i d a n t s ( s p a s ) ，i n c l u d i n gb u t y l a t e dh y d r o x y a n i s o l e ( b h a ) ，a n db u t y l a t e dh y d r o x y t o l u e n e ( b h t ) ，t e r t i a r yb u t y lh y d r o q u i n o n e ( t b h q ) i nf o o di t e m s 1 1 1 er e s u l t ss h o wt h a tt h e c a l i b r a t i o nc u r v e so fb h a ，b h ta n dt b h qs h o wg o o dl i n e a r i t y 、7 l ，i t l lt h e i rp e a ka r e a s i nt h ec e r t a i nc o n c e n t r a t i o nr a n g e s ( r 0 9 9 9 7 ) t h ea v e r a g er e c o v e r i e so ft h r e es p a s r a n g e df r o m9 5 0 一1 0 4 1 w i t hr s d _ o 9 9 9 7 ) t h ea v e r a g er e c o v e r i e so f a l lt h ef i v ec o m p o u n d sr a n g e df r o m9 7 4 t o1 0 1 6 w i t hr s d 0 9 9 9 8 ，平均加样回收率为9 8 0 1 0 4 0 ， 此方法简便快速、结果准确、重现性好，可作为自首乌药材质量控制的一个有效 方法。光电二极管阵列检测器已被普遍用于鉴别液相色谱的峰纯度和提高重叠峰 的定量准确度。 电化学检测器( e c d ) 【4 5 】：电化学检测器( e l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t o r ，e c d ) 是根 据电化学原理和物质的电化学性质进行检测的一种检测器。e c d 是一种灵敏的 检测器，主要用于具有氧化还原性质的化合物的检测。在液相色谱中，对那些没 有紫外吸收或不能发出荧光但具有电活性的物质，可采用直接电化学检测法。若 采用衍生、流动相添加剂和修饰电极等技术，还可将它扩展到电活性弱或者非电 活性物质的检测。电化学检测器可以分为伏安检测器和电导检测器。其中，伏安 检测器是以测量电解电流的大小为基础，主要包括安培、极谱和库仑检测器；电 导检测器以测量液体的电阻变化为根据。 安培检测器是电化学检测器中应用最广泛的一种检测器，常用的安培检测器 是由一个恒电位器和三个电极组成的电化学池构成。安培检测器要求在电解池内 有电解反应的发生，即在参比电极与工作电极之间施加的电压作用下，利用待测 物质在工作电极表面上发生氧化还原反应，从而引起电流的变化而进行测定的一 种方法。安培检测器具有选择性好、灵敏度高、线性范围宽等优点。根据施加电 位方式的不同，安培检测法可分成单安培检测法和方波及差示脉冲安培检测法。 根据电化学检测器的工作原理，原则上凡是具有氧化还原性质的化合物都可 以采用安培检测器来检测。色谱柱流出物的响应值随电位的变化而变化，在一定 的电位条件下，可得到不同保留时间的色谱图，灵敏度达到p g 水平。目前液相 4 西北大学硕士学位论文 色谱电化学检测器已广泛应用于生物医学、临床化学、食品卫生和环境等领域。 表1 1 列出了近年来利用h p l c 趣c d 法测定具有电活性物质的一些代表性的新 方法。此外，采用衍生技术，可以对某些电活性弱或没有电活性的化合物进行测 定。张鹏等m 】采用免疫亲和柱净化、以k o b r ac e l l 装置在线电化学衍生，反相高 效液相色谱法测定了花生中黄曲霉毒素( a f t ) b 1 ，b 2 ，g 1 和g 2 ，结果显示4 种 毒素的分离在1 3 m i n 内完成，检出限均达到0 1 上g k g 。l i u 等【47 】采用流动相添加 剂法，以十二烷基磺酸钠为流动相添加剂，对半枝莲、红花和密蒙花药材，及洋 葱和芹菜中芹菜素进行h p l c - e c d 检测。该研究为物质中芹菜素含量的测定提 供了一种有效的方法，同时也扩大了h p l c - e c d 的应用范围。 表1 1h p l c - e c d 法测定电活性物质 1 1 3 高效液相色谱法在酚类化合物中的研究 5 第一章绪论 1 、酚酸和黄酮类化合物 酚类化合物是一类具有大而复杂基团的化合物，是从天然植物中提取的多羟 基酚类衍生物的混合物。酚是芳香环上连有一个或多个羟基的化合物，而多酚物 质( p o l y p h e n o l s ) 贝j 是含有酚官能团的物质，广泛分布于植物体的叶、木、皮、壳 和果肉中，是构成植物固体部分的主要物质。按分子质量的大小，多酚物质可分 为单宁化合物和非单宁化合物。根据酚类物质结构形式的不同，一般将其分为酚 酸类、黄酮类和异黄酮类等化合物。其中，由于它们含有酚羟基或苯烯结构，酚 酸和黄酮类化合物都具有营养和抗氧化等显著的生物活性和药理活性。如抗氧 化、清除自由基、抗紫外线辐射、抑菌效应及抗病毒作用晦7 0 1 ，在医药、农药、 化妆品原料和食品添加剂等方面有着广泛的用途。近年来，酚类化合物的研究得 到了很大的发展。 酚酸类化合物( p h e n o l i ca c i d ) 是指同一苯环上含有若干个酚性羟基的一类化 合物。酚酸类化合物具有一个苯核，多为对羟基苯甲酸和对羟基苯丙烯酸( 肉桂 酸) 的衍生物，主要有对羟基苯甲酸、香草酸、咖啡酸和香豆酸、没食子酸、原 儿茶酸、阿魏酸、绿原酸、芥子酸等。酚酸类成分广泛分布在药用植物中，如忍 冬科忍冬属的金银花，菊科的蒲公英、灯盏花，蔷薇科的托盘根，橄榄科的方榄， 伞形科的当归、j 1 1 3 ，唇形科的鼠尾草等。这些植物中的各种酚酸类成分具有药 理学活性，如清除自由基、抗炎、抗病毒、免疫调节、抗凝血及抗肿瘤作用1 7 1 - 7 2 】， 已经被越来越多的人所重视。 黄酮类化合物( f l a v o n o i d s ) 是自然界存在的酚类化合物中最大的一类，是以 黄酮( 2 一苯基色原酮) 为母核而衍生的一类黄色色素，其中包括黄酮的同分异构 体及其氢化的还原产物，是一类具有c 6 3 誓6 母核的植物次生代谢产物。天然 黄酮类化合物母核上常含有羟基、甲氧基、烃氧基、异戊烯氧基等取代基。 在植物体内有游离状态的苷元，而大多数与糖结合以苷的形式存在。根据三碳 键( c 3 ) 结构的氧化程度和环的连接位置等结构特点，黄酮类化合物可分为黄 酮、黄酮醇、黄烷酮、黄烷酮醇、异黄酮、异黄烷酮、花青素、查耳酮、色原酮 等1 0 余个类别【7 3 】。到目前为止，已从植物中分离鉴定了8 0 0 0 多种黄酮类化合 物，它们广泛存在于芸香科、蔷薇科、禾本科等多种植物以及由它们制造的饮料 和食物中，如水果、蔬菜、葡萄酒、茶和可可等。黄酮类化合物是一类生物活 6 西北大学硕士学位论文 性很强的化合物，具有降低心肌耗氧量、扩张血管、降血糖、防治血管硬化等作 用f 7 4 。7 5 1 ；同时也是一种天然抗氧化剂，具有多种药理活性，包括抗氧化性、抗病 毒、抗炎、抗衰老、抗h i v 、抗辐射、抗肿瘤、增强机体免疫力、的功效陋7 7 1 ， 在医药、食品等领域具有广阔的应用前景。 表1 2 酚酸和黄酮类化合物的高效液相色谱法测定 注释：【l 】：高效液相色谱紫外检测；【2 】：高效液相色谱一荧光检测；【3 1 - 高效液相色 谱一二级管阵列检测； 4 1 ：高效液相色谱一二极管阵列一电喷雾质谱；【5 】：高效液相色谱一电 化学检测器；【6 】：高效液相色谱一多级质谱联用检测；【7 】：高效液相色谱一二级管阵列检测一 蒸发光射检测；【8 】：高效液相色谱一二极管阵列一电喷雾多级质谱联用；【9 】：高效液相色谱一 二级管阵列检测一电化学检测器：【1 0 】：超高效液相色谱光电二极管阵列检测器；【1l 】：高 效液相色谱一电喷雾质谱； 酚酸和黄酮类化合物均是良好的抗氧化剂。这是因为酚类化合物中的酚羟基 是优良的氢或中子的给予体，对能引起生物组织膜、蛋白质或d n a 因产生过氧 7 第一章绪论 化作用而导致生物体在结构和功能损伤的过氧化自f h 基( r 0 2 ) 、d p p h 自由基、 o h 自由基、a b t s 自由基等，有明显的清除作用【7 8 8 1 1 ，起到抗氧化作用。从而保 护到各器官的细胞膜结构，起到对生物组织的保护作用。由于酚类抗氧化性多来 源于苯环上的酚羟基，其抗氧化性随酚类聚合度增加而提高；且抗氧化活性与其 中大量抗氧化成分的含量有很大的关系，一般情况下，酚类含量越高，其抗氧化 能力越强。由于酚类物质特殊的生理作用，研究酚酸和黄酮类化合物的检测方法 及其抗氧化能力具有十分重要的意义。 近年来，有关酚酸和黄酮类化合物检测方法在医药、食品等领域的报道很多， 其中最常用的方法是高效液相色谱法。表1 2 列出了近些年来用h p l c 法及h p l c 与其他检测器联用法测定酚酸和黄酮类化合物的一些代表性的新方法。 2 、合成酚类抗氧化剂类化合物( s y n t h e t i cp h e n o l i ca n t i o x i d a n t s ，s p a s ) s p a s 又称食品抗氧化剂，是一类人工合成的食品添加剂。根据美国食品药 物管理局( f d a ) 的定义抗氧化剂是指“作为延滞因氧化所引起的劣变、酸化或变 色的物质 ，可防止腐败毒性物质的产生、营养成分的流失与食品外表色泽的改 变，能阻止和推迟食品氧化变质，提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。 目前常用的人工合成的酚类抗氧化剂有：叔丁基羟基茴香醚( b h a ) 、二丁基羟基 甲苯( b h t ) 、特丁基对苯二酚( t b h q ) 、没食子酸丙酯( p g ) 等1 0 5 1 ，其抗氧化剂的 效果比较为t b h q p g b h a b h t 。 合成酚类抗氧化剂抗氧化机理：酚类抗氧化剂属于自由基吸收剂，主要包括 多羟基酚和有空间位阻的酚类化合物及其衍生物。它们主要是作为电子或氢的提 供体，通过抽氢反应产生较稳定的苯氧自由基来终止链式反应。当活泼氢与自由 基结合，酚类抗氧化剂就可以起到清除自由基的作用，脱氢以后，酚变成自由基， 而且脱氢后体系比较稳定。酚类母体分子在抽氢后生成苯氧自由基，苯氧自由基 的活性越强，苯氧自由基越稳定，表明抗氧化剂清除自由基的活性越强1 0 6 1 。以 a h 代表酚类抗氧化剂，其作用过程可表示如下： r o o + a h _ 一一r o o h + a r + a h 卜一r h + a a h + r o 一r o h + a a + a ，a a 人工合成酚类抗氧化剂在食品及药品中有着广泛的应用。用于防止油脂及制 品、油炸食品、饼干、罐头等含油脂食品的酸败。b h a 和b h t 是使用较久的传 8 西北大学硕上学位论文 统抗氧化剂，特丁基对苯二酚( t b h q ) 则是一种较新使用的油溶性抗氧化剂【1 0 7 】， 它的主要特点是抗氧化能力强，油溶性好，添加于任何油脂中均不产生异味与异 臭，在铁离子存在下不着色，现在已较普遍使用并有取代b h a 和b h t 的趋势。 近年来研究发现，长期过量食用含该类氧化剂的食品，会对身体有较大的毒副作 用，对人体肝、脾等均有不利影响。因此，各国都规定了该类物质的使用限量。 合成酚类抗氧化剂的检测方法：目前，合成酚类抗氧化剂的检测方法主要有 比色法【1 0 引、分光光度法、伏安极谱法，薄层色谱法、液相色谱法【1 0 9 - 1 1 2 1 、气相 色谱法、毛细管电泳法【1 1 3 圳5 1 、气相色谱质谱法、液相色谱质谱法【1 1 由1 1 8 1 等。 1 1 4 展望 高效液相色谱法由于具有独特的分离分析能力而已经成为重要的分离分析 手段之一。而且，随着对高效液相色谱分离机理研究的不断深入、分离体系的不 断完善、电化学等检测技术的发展以及各种联用技术的发展，h p l c 的应用范围 将不断扩展。 1 2 本论文研究内容 本论文结合液液萃取和固相萃取等手段，以高效液相色谱一电化学检测器 ( h p l c - e c d ) 为主要检测方法，建立了中药制剂及蜂蜜食品中十三种酚类化合物 的分离和分析新方法。该研究对于完善和发展中药制剂及蜂蜜食品中酚类化合物 的分析方法，拓宽电化学检测器的应用范围具有重要的意义。全文共分四章： 在第一章中，综述了高效液相色谱检测器及高效液相色谱法在在酚类化合物 检测中的应用情况。 在第二章中，建立了抗感解毒颗粒中绿原酸和黄芩苷的h p l c - e c d 的分离、 分析新方法。 在第三章中，采用液液萃取法，建立了h p l c - e c d 技术同时分离测定植物 油和富含油脂食品中三种合成酚类抗氧化剂的新方法。 在第四章中，采用h p l c - e c d 法，测定了油菜蜜中五种酚酸和类黄酮化合 物，并分别建立了油菜蜜和枣花蜜中酚类化合物的指纹图谱。 参考文献 9 第一章绪论 【l 】王跃生，高速液相色谱法及其应用【m 】兵器工业出版社，北京，1 9 9 0 【2 】c 6 s a ri c ，n o g u e i r aeh a ，p i a n e t t ig a ，c o m p a r i s o no fh p l c ，u vs p e c t r o p h o t o m e t r y a n dp o t e n t i o m e t r i et i t r a t i o nm e t h o d sf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fl u m e f a n t r i n ei np h a r m a c e u t i c a l p r o d u c t s j j o u r n a lo fp h a r m a c e u t i c a la n db i o m e d i c a la n a l y s i s ，2 0 0 8 ，4 8 ( 1 ) ：2 2 3 - 2 2 6 【3 】a m i c ov ，c h i l l e m ir ，m a n g i a f i c os ，s p a t a f o r ac ，t r i n g a l ic ，p o l y p h e n o l e n r i c h e d f r a c t i o n sf l o r as i c i l i a ng r a p ep o m a c e ：h p l c d a da n a l y s i sa n da n t i o x i d a n ta c t i v i t y j 】 b i o r e s o u r c et e c h n o l o g y , 2 0 0 8 ，9 9 ( 1 3 ) ：5 9 6 0 5 9 6 6 【4 】k i ms h ，k i md h ，p a r kj h ，c h o ie j ，p a r ks ，l e ek y ，j e o nm j ，k i myc ，s u n g s h d i s c r i m i n a t i o no fs c r o p h u l a r i as p pa c c o r d i n gt og e o g r a p h i co r i g i nw i t hh p l c d a d c o m b i n e dw i t hm u l t i v a r i a t ea n a l y s i s j m i c r o c h e m i c a lj o u r n a l ，2 0 1 0 ，9 4 ( 2 ) ：1 1 8 - 1 2 4 【5 】l ix q ，j ic ，s u nyy ，y a n gm l ，c h ux g ，a n a l y s i so fs y n t h e t i ca n t i o x i d a n t sa n d p r e s e r v a t i v e si ne d i b l ev e g e t a b l eo i lb yh p l c 门r o f m s j f o o dc h e m i s t r y , 2 0 0 9 ，l1 3 ( 2 ) ： 6 9 2 7 0 0 【6 】k o j i m ah ，i n a g a k im ，t o m i t at ，w a t a n a b ez ，u c h i d as ，i m p r o v e ds e p a r a t i o na n d c h a r a c t e r i z a t i o no fl i p o p o l y s a c c h a r i d er e l a t e dc o m p o u n d sb yr e v e r s ep h a s ei o np a i r i n g h p l c e l e c t r o s p r a yi o n i z a t i o n - q u a d r u p o l e m a s ss p e c t r o m e t r y ( r p i p h p l c e s i - q - m s ) 【j 】 j o u r n a lo fc h r o m a t o g r a p h yb ，2 010 ，8 7 8 ( 3 - 4 ) ：4 4 2 4 4 8 阴y ej ，z h a n gx ，d a iw x ，y a ns k ，h u a n gh q ，l i a n gx ，l iys ，z h a n gw d ， c h e m i c a lf i n g e r p r i n t i n go fl i u w e id i h u a n gp i l la n ds i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fi t sm a j o r b i o a c t i v ec o n s t i t u e n t sb yh p l cc o u p l e dw i t hm u l t i p l ed e t e c t i o n so fd a d ，e l s da n d e s i m s j j o u r n a lo f p h a r m a c e u t i c a la n db i o m e d i c a la n a l y s i s ，2 0 0 9 ，4 9 ( 3 ) ：6 3 8 - 6 4 5 8 】f r a n c i s c om l ，r e s u r r e c c i o na va ，d e v e l o p m e n to far e v e r s e d - p h a s eh i g hp e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ( r p - h p l c ) p r o c e d u r ef o rt h es i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fp h e n o l i c c o m p o u n d si np e a n u ts k i ne x t r a c t s j f o o dc h e m i s t r y , 2 0 0 9 ，l1 7 ( 2 ) ：3 5 6 3 6 3 【9 】k o j i m ah ，i n a g a k im ，t o m i t at ，w a t a n a b et ，u c h i d as ，s e p a r a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no f l i p o p o l y s a c c h a r i d er e l a t e dc o m p o u n d sb yh p l c p o s t - e o l u m nf l u o r e s c e n c ed e r i v a t i z a t i o n ( h p l c f l d ) a n dc a p i l l a r yz o n ee l e c t r o p h o r e s i s m a s ss p e c t r o m e t r y ( c z e m s ) j j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h yb ，2 0 0 9 ，8 7 7 ( 1 4 一1 5 ) ：1 5 3 7 - l5 4 2 【1 0 】成都科学技术大学分析化学教研室，分析化学手册( 第四册，下册) 光谱分析【m 】北京：化 学工业出版社，1 9 8 4 【1 l 】邹汉法，张玉奎，卢佩章著，离子对高效液相色谱法【m 】河南科技出版社，1 9 9 4 【1 2 】t h eu n i t e ds t a t e sp h a r m a c o p e i a sc o n v e n t i o n ，i n c ，t h eu n i t e ds t a t e sp h a r m a c o p o e i ax xu i 【s 】a p p e n d i x , 1 7 7 4 - 1 7 7 7 【1 3 】b r i t i s hp h a r m a c o p o e i ac o m m i s s i o n ，b r i t i s hp h a r m a c o p e i a s s a p p e n d i x , 2 0 0 2 ，1 4 0 - 1 4 4 【1 4 】国家药典委员会中华人民共和国药典( 二部) 【s 】北京：化学工业出版社，2 0 0 0 ，附录 3 2 3 4 【1 5 】王俊德，商振华，郁蕴璐，高效液相色谱法 m 】北京：中国石化出版社，1 9 9 2 ，6 5 - 6 6 【16 - 1d e l m a sa ，g o r d i e nj b ，b e r n a d o uj m ，r o u d a u tm ，g r e s s e ra ，m a l k il ，s a u xm c ， b r e i l hd ，q u a n t i t a t i v ea n dq u a l i t a t i v ec o n t r o lo fc y t o t o x i cp r e p a r a t i o n sb yh p l c - u vi na c e n t r a l i z e d p a r e n t e r a lp r e p a r a t i o n su n i t j j o u r n a l o fp h a r m a c e u t i c a la n db i o m e d i c a l a n a l y s i s ，2 0 0 9 ，4 9 ( 5 ) ：1213 12 2 0 【17 c h i r i n o sr ，c a m p o sd ，c o s t an ，a r b i z uc ，p e d r e s c h ir ，l a r o n d e l l ey ，p h e n o l i cp r o f i l e s o fa n d e a nm a s h u a ( t r o p a e o l u mt u b e r o s u mr u i z & p a v 6 n ) t u b e r s ：i d e n t i f i c a t i o n b y 1 0 西北大学硕士学位论文 h p l c d a da n de v a l u a t i o n j f o o dc h e m i s t r y , 2 0 0 8 1 0 6 ( 3 ) ：1 2 8 5 - 1 2 9 8 【18 】u n c e t an ，u g a r t ea ，s f i n c h e za ，g 6 m e z - c a b a l l e r oa ，g o i e o l e am a ，b a r r i or j ， d e v e l o p m e n to fas t i rb a rs o r p t i v ee x t r a c t i o nb a s e dh p l c f l dm e t h o df o rt h eq u a n t i f i c a t i o n o fs e r o t o n i nr e u p t a k ei n h i b i t o r si np l a s m a , u r i n ea n db r a i nt i s s u es a m p l e s j j o u r n a lo f p h a r m a c e u t i c a la n db i o m e d i c a la n a l y s i s , 2 0 1 0 ，5 l ( 1 ) ：17 8 1 8 5 【1 9 g r a e v em ，j a n s s e nd ，i m p r o v e ds e p a r a t i o na n dq u a n t i f i c a t i o no fn e u t r a la n dp o l a rl i p i d c l a s s e sb yh p l c - e l s du s i n gam o n o l i t h i cs i l i c ap h a s e ：a p p l i c a t i o nt oe x c e p t i o n a lm a r i n e i i p i d s j j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h yb ，2 0 0 9 ，8 7 7 ( 2 0 2 1 ) ：1 8 1 5 一l8 1 9 【2 0 】l i a n gy ，c a ow ，c h e nw j ，x i a ox h ，z h e n gj b ，s i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no ff o u r p h e n o l i cc o m p o n e n t si n c i t r u sh o n e yb yh i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yu s i n g e l e c t r o c h e m i c a ld e t e c t i o n j f o o dc h e m i s t r y , 2 0 0 9 ，1 1 4 ( 4 ) ：1 5 3 7 - 1 5 4 1 【2 1 】k a m i f i s k im ，g i l g e n a s te ，p r z y j a z n ya ，r o m a n i kg ，p r o c e d u r ef o ra n dr e s u l t so f s i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fa r o m a t i ch y d r o c a r b o n sa n df a t t ya c i dm e t h y le s t e r si nd i e s e l f u e l sb yh i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y j j o u m a lo fc h r o m a t o g r a p h ya ，2 0 0 6 ， 1 1 2 2 ( 1 - 2 ) ：1 5 3 - 1 6 0 2 2 】常晓娟，彭敬东，刘绍璞，刘丽敏，代永矿，柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测法测 定大鼠血浆中的奈替米星【j 】色谱，2 0 0 9 ，2 7 ( 6 ) ：7 9 4 - 7 9 8 2 3 】m a d r e r ar r ，v a l l e sb s ，d e t e r m i n a t i o no fe t h y lc a r b a m a t e i ne i d e r s p i r i t sb y h p l c - f l d j f o o dc o n t r o l ，2 0 0 9 ，2 0 ( 2 ) ：l3 9 14 3 【2 4 】t o s c a n it ，m o s e r i t ia ，d o s s e n aa ，a s t ac d ，s i m o n c i n in ，v i r g i l ir ，d e t e r m i n a t i o no f o c h r a t o x i nai nd r y - c u r e dm e a tp r o d u c bb yah p l c - f l d q u a n t i t a t i v em e t h o d j j o u r n a lo f c h r o m a t o g r a p h yb ，2 0 0 7 ，8 5 5 ( 2 ) ：2 4 2 2 4 8 【2 5 】魏锋，钟敏，尼加提，林瑞超，h p l c e l s d 法同时测定牛胆粉中3 种胆酸类成分的含量 【j 】药物分析杂志，2 0 0 9 ，2 9 ( 1 ) ：2 1 2 4 【2 6 】k a u rp ，c h a u d h a r ya ，s i n g hb ，g o p i c h a n d ，o p t i m i z a t i o no fe x t r a c t i o nt e c h n i q u ea n d v a l i d a t i o no fd e v e l o p e dr p - h p l c - e l s dm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no ft e r p e n et r i l a c t o n e si n g i n k g ob i l o b al e a v e s j j o u r n a lo fp h a r m a c e u t i c a la n db i o m e d i c a la n a l y s i s ，2 0 0 9 ，5 0 ( 5 ) ： 1 0 6 0 1 0 6 4 【2 7 】s u nb s ，g ul j ，f a n gz m ，w a n gc y ，w a n gz ，l e em i l ，l iz ，l ij j ，s u n gc k ， s i m u l t a n e o u sq u a n t i f i c a t i o no f19g i n s e n o s i d e si nb l a c kg i n s e n gd e v e l o p e df r o mp a n a x g i n s e n gb yh p l c - e l s d j j o u m a lo f p h a r m a c e u t i c a la n db i o m e d i c a la n a l y s i s ，2 0 0 9 ，5 0 ( 1 ) ： 1 5 - 2 2 2 8 】l i uh x ，z h a n gs s ，y uj ，q ul b ，z h a oy f ，h u a n gh c ，l i j c ，s t u d i e so n i n t e s t i n a lp e r m e a b i l i t yo fc i r r h o t i cp a t i e n t sb ya n a l y s i sl a c t u l o s ea n dm a n n i t o li nu r i n ew i t h h p l c r 1 d m s j b i o o r g a n i c & m e d i c i n a lc h e m i s t r yl e r e r s ，2 0 0 4 ，14 ( 9 ) ：2 3 3 9 - 2 3 4 4 2 9 1l i ur x ，y em ，g u oh z ，b ik s ，g u od a ，l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y e l e c t r o s p r a y i o n i z a t i o nm a s ss p e c t r o m e t r yf o rt h ec h a r a c t e r i z a t i o no ft w e n t y t h r e ef l a v o n o i d si nt h e e x t r a c to f d a l b e r g i ao d o r i f e r a j r a p i dc o m m u n m a s ss p e c t r o m ，2 0 0 5 ，1 9 ( 11 ) ：1 5 5 7 - 1 5 6 5 【3 0 】b a oy ，l ic ，s h e nh ，n a ne ，d e t e r m i n a t i o no fs a i k o s a p o n i nd e r i v a t i v e si nr a d i xb u p l e u r i a n di np h a r m a c e u t i c a l so ft h ec h i n e s em u l t i h e r br e n e d yx i a o c h a i h u - t a n gu s i n gl i q u i d c h r o m a t o g r a p ht a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r y j a n a l y t i c a lc h e m i s t r y 2 0 0 4 ，7 6 ( 1 4 ) ：4 2 0 8 - 4 2 1 6 【3l 】y em ，g u od a ，a n a l y s i so fb u f a d i e n o l i d e si nt h ec h i n e s ed r u gc h a n s ub y h i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y d i o d ea r r a yd e t e c t i o n a t m o s p h e r i cp r e s s u r e l l 第一章绪论 c h e m i c a li o n i z a t i o n - t a n d e mm a s ss p e c t r o m e t r y j r a p i dc o m m u n m a s ss p e c t r o m ，2 0 0 5 ， 9 ( 1 3 ) ：1 8 8 1 - 1 8 9 2 【3 2 c h e ny ，f a ngr ，w uh l ，w uyt ，m i t c h e l la ，s e p a r a t i o n , i d e n t i f i c a t i o na n dr a p i d d e t e r m i n a t i o no fl i e n s i n e ，i s o l i e n s i n i n ea n dn e f e r i n ef r o me m b r y oo ft h es e e do fn e l u m b o n u c i f e r ag a e r t n b yl i q u i dc h r o m a t o g r a p h yc o u p l e dt od i o d ea r r a yd e t e c t o ra n d t a n d e mm a s s s p e c t r o m e t r y j j o u r n a lo fp h a r m a c e u t i c a la n db i o m e d i c a la n a l y s i s ，2 0 0 7 ，4 3 ( 1 ) ：9 9 - 10 4 【3 3 】冯玲玲，岳淑梅，万绍晖，康廷国，反相高效液相色谱柱前衍生化法测定大青叶中氨基 酸的含量 j 】中国药房，2 0 0 6 ，1 7 ( 9 ) ：6 9 4 - 6 9 5 【3 4 】胡晓娟，黄晓书，李卫华，苏惠，高效液相色谱法测定保健食品中的大豆异黄酮【j 】分 析实验室，2 0 0 8 ，2 7 ( 1 ) ：1 0 3 1 0 6 【3 5 】张晓彤，云自厚，液相色谱检测方法【l 川北京：化学工业出版社，1 9 9 9 ，1 9 5 8 【3 6 】c h i r i n o sr ，b e t a l l e l u z - p a l l a r d e li ，h u a m f i na ，a r b i z uc ，p e d r e s c h ir ，c a m p o sd ， h p l c d a dc h a r a c t e r i s a t i o no fp h e n o l i cc o m p o u n d sf r o ma n d e a no