（食品科学与工程专业论文）芪术药对抗氧化协同机制的研究.pdf

符号和缩略词说明 缩写 英文名称拉丁名称 中文名称 1 毛而f 一t r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ef o r m u l a 传统中草药复方 h p l c h i g h p e r f o r m a n c el i q u i d 高效液相色谱 c h r o m a t o g r a p h y d a d d i o d e a r r a yd e t e c t i o n 二极管阵列检测器 m s m a s ss p e c t r o m e t r y质谱 e s i e l a e c t r o s p r a yi o n i z a t i o n 电喷雾电离源 f r a p f e r r i cr e d u c i n g ，7 a n t i o x i d a n tp o w e r 总抗氧化能力 c r c o n c e n t r a t i o nr a t i o 浓度比率 s p l s p l i t 进样口 f i df l a m ei o n i z a t i o nd e t e c t i o n火焰离子化检测器 r t r e t e n t i o nt i m e保留时间 m m o l e c u l a rw e i g h t 分子量 p c ap r i n c i p l ec o m p o n e n ta n a l y s i s 主成分分析 p c r p r i n c i p l ec o m p o n e n tr e g r e s s i o n 主成分回归分析 p d a p o t a t od e x t r o s ea g a rm e d i u m 马铃薯葡萄糖培养基 b p ab e e fe x t r a c tp e p t o n ea g a rm e d i u m肉膏胨培养基 e c o l i e s c h e r i c h i ac o l i 大肠杆菌 ha n o m a l a h a n s e n u l aa n o m a l a 异常汉逊酵母 口u r e u s s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s 金黄色葡萄球菌 膨l u t e u s m i c r o c o c c u sl u t e u s 藤黄微球菌 c 口l b i c a n sc a n d i d aa l b i c a n s白色念珠菌 a n i g e ，a s p e r g i l l u sn i g e ， 黑曲霉 b s b f i l i s b a c i l l u ss u b f i l i s枯草芽孢杆菌 目录 摘要1 a b s t r a c t 3 1 引言5 1 1 药食兼用中草药在功能食品中的应用5 1 2 中草药抗氧化成分概述6 1 2 1 中草药抗氧化成分种类6 1 2 2 黄酮类化合物结构特征及分类7 1 2 3 黄酮类抗氧化剂构效关系8 1 3 药对配伍理论及芪术药对概述1 0 1 3 1 药对配伍理论概述1 0 1 3 2 芪术药对概述1 2 1 4 中药物质基础研究概述15 1 4 1 中药配伍对化学成分的影响1 5 1 4 2 中药化学成分常用检测方法17 1 5 本研究目的意义及研究内容1 9 1 5 1 研究目的意义1 9 1 5 2 主要研究内容2 0 2 材料与方法2 2 2 1 试验材料2 2 2 2 主要试剂及配制2 2 2 2 1 主要试剂药品2 2 2 2 2 主要试剂的配制2 3 2 3 主要仪器设备2 4 2 4 试验方法2 5 2 4 1 芪术药对及两味单药乙醇提取物提取方法一2 5 2 4 2 芪术药对及两味单药乙醇提取物抗氧化能力测定2 5 2 4 3 芪术药对及两味单药乙醇提取物物质基础鉴定2 6 2 4 4 芪术药对及两味单药乙醇提取物抗氧化组筛选方法2 6 2 4 5 芒柄花苷和芒柄花素含量测定2 7 2 4 6 芪术药对及两味单药挥发油提取方法。2 7 2 4 7 芪术药对及两味单药挥发油生物学活性测定2 8 2 4 8 芪术药对及两味单药挥发油物质基础分析鉴定条件2 9 2 4 9 芪术药对挥发油抗氧化组筛选3 0 2 4 1 0 数据统计分析3 0 3 结果与分析31 3 1 芪术药对乙醇提取物抗氧化活性研究31 3 1 1 总抗氧化能力( f 凡心) 3 1 3 1 2a b t s + 自由基清除能力3 1 3 2 芪术药对乙醇提取物物质基础分析3 2 3 2 1 高效液相色谱( h p l c ) 条件确定3 2 3 2 2 芪术药对乙醇提取物物质基础鉴定3 3 3 3 芪术药对乙醇提取物抗氧化组3 5 3 3 1h p l c d p p h 法分析芪术药对乙醇提取物抗氧化组3 5 3 3 2 芪术药对乙醇提取物抗氧化成分在配伍前后的变化3 7 3 4 芒柄花素和芒柄花苷的定量3 8 3 4 1 芒柄花素和芒柄花苷含量测定一3 8 3 4 2 精密度试验和回收率实验3 9 3 5 芪术药对挥发油生物学活性研究3 9 3 5 1 芪术药对挥发油及两味单药抗氧化活性研究3 9 3 5 2 芪术药对挥发油抑菌活性研究4 1 3 6 芪术药对挥发油物质基础分析4 2 3 6 1 气相色谱( g c ) 条件的确定4 2 3 6 2 芪术药对挥发油物质基础鉴定4 2 3 7 芪术药对挥发油抗氧化组4 6 3 7 1 主成分回归分析芪术药对挥发油抗氧化组4 6 3 7 2 配伍前后芪术药对挥发油抗氧化组变化4 8 4 讨论5 0 4 1 芪术药对乙醇提取物潜在抗氧化组分析5 0 4 2 芪术药对挥发油潜在抗氧化组分析5 0 4 3 芪术药对配伍前后成分变化的分析5 1 5 结论5 3 参考文献5 4 附录6 3 致谢6 5 硕士期间发表论文情况6 6 i l l 山东农业大学硕士学位论文 摘要 传统中草药是我国功能食品的重要组成原料之一，已有几千年的 使用历史。中草药常以方剂配伍的形式应用于功能食品中，很多中草 药在配伍使用时表现出比单独使用更好的药理功能。中药药对是复方 的最小单位，是相对固定的两味草药的配伍形式，通常表现出药效增 加、互助、减弱、拮抗等作用。 黄芪白术( 芪术) 药对是医家常用药食兼用经典药对之一，在 “芪术汤 和“补中益气汤”等方中均有体现，具有辅助治疗肾病、 糖尿病等慢性疾病的作用。本文主要研究了芪术药对配伍前后乙醇提 取物抗氧化能力和物质基础变化；研究了芪术药对配伍前后挥发油抗 氧化活性、抑菌能力和化学成分的变化。 芪术药对乙醇提取物体外抗氧化实验( 清除a b t s + 自由基能力和 总抗氧化能力f r a p ) 结果表明，芪术药对配伍之后乙醇提取物存在抗 氧化协同效应。芪术药对乙醇提取物物质基础的分析、鉴定采用 h p l c d a d m s m s 联用技术，通过h p l c 技术检测发现芪术药对乙醇 提取物中有3 1 个化合物，采用h p l c d a d m s m s 联用技术初步鉴定 了其中的1 6 个化合物。芪术药对乙醇提取物中潜在抗氧化成分的筛 选、鉴定采用h p l c d p p h 方法。结果表明，芪术药对乙醇提取物中潜 在抗氧化成分有1 1 个，根据其u v 九m a x ，m s ，和或m s m s 数据， 初步鉴定出8 个化合物，分别为：o n o m n ，9 ，1 0 一d i m e t h o x y - p t e r o c a r p a n 一 3 - 0 p d g l y c o s i d e ，c l a y c o s i n ，3 - h y d r o x y 一5 - m e t h o x y i s o f l a v o n e - 7 一o - p d g l u e o p y r a n o s i d e ，f o r m o n o n e t i n ，a t r a c t y l e n o l i d ei i ，a t r a c t y l e n o l i d e v i 和d a u c o s t e r o l 。芪术药对配伍之后潜在抗氧化成分相对浓度比率分 析显示，配伍之后o n o n i n 和c l a y c o s i n 相对浓度比率显著减小( p 0 0 5 ) ，而c o m p o n e n t6 ，f o r m o n o n e f i n 和a t r a c t y l e n o l i d ev i 相对浓度比 率显著增大( p 0 0 5 ) 。外标法对f o r m o n o n e t i n 和o n o n i n 的定量结果显 示，配伍之后f o r m o n o n e t i n 浓度显著增大( p 0 0 5 ) ，而o n o n i n 浓度显 著减小口 0 0 5 ) 。配伍之后这些潜在抗氧化成分浓度变化或许是引起芪 术药对乙醇提取物抗氧化活性增强的一个原因；另外，配伍过程中黄 酮苷的水解可能是引起抗氧化活性增强的另外一个原因。 能是配伍之后芪术药对挥发油抗氧化和抑菌能力升高的原因。 关键词：黄芪；白术；药对；抗氧化；协同作用；活性成分 2 山东农业大学硕士学位论文 a b s t r a c t a sa ni m p o n a n tm a t e r i a lo ff u n c t i o n a lf o o d t h ec h i n e s et h e r a p e u t i c h e r b sh a v eb e e nu s e dt h o u s a n d so fy e a r si nc h i n at oi m p r o v et h eh e a l t h yo f p e o p l e c h i n e s et h e r a p e u t i ch e r b sw i d e l yu s e di nf u n c t i o n a lf o o di nt h ef o r m o ff o r m u l a , a n dm a n yo ft h e ma r ed e m o n s t r a t e ds i g n i f i c a n t l yb e t t e rp h a r m a - c o l o g i c a le f f e c t sw h e nu s e di nt h ec o m b i n a t i o nt h a nw h e nu s e da l o n e t r a d j t i o n a lc h i n e s eh e r bp a i r s ( t c h p s ) ，w h i c ha r et h eb a s i cu n i t si n 仃a d i t i o n a l c h i n e s ep r e s c r i p t i o n s ，c o n s i s to ft w or e l a t i v e l ys t a n d a r dh e r b s u n i q u ec o r n b i n a t i o n so ft h o s eh e r bp a i r sa r ef r e q u e n t l yu s e dt oa c h i e v em u t u a le n h a n c e m e r i t ，a s s i s t a n c e ，r e s t r a i n t ，s u p p r e s s i o no ra n t a g o n i s m n l eh u a n g q i 口s t r a g a l u sm e m b r a n a c e u s ( f i s c h ) b g e v a r m o n g h o l i c u s ( b g e ) h s i a o ) - b a i z h u ( r h i z o m aa t r a c t y l o d i sm a c r o c e p h a l a e ) h e r bp a i r i so n eo ft h em o s tw i d e l yu s e dh e r bp a i r sa n dh a sa p p e a r e di nm a n yt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ef o r m u l a s ( t c m f ) ，i n c l u d i n gq i z h u t a n ga n db u z h o n g y i q i t a n g t h i sh e r bp a i rh a sb e e nw i d e l yu s e di nc h i n at oi m p r o v e d i a b e t i cn e p h r o p a t h ya n dl i v e rc i r r h o s i s i nt h i sp a p e r ，c h a n g e si nt h ec h e m i c a lc o m p o n e n t s ，a n t i o x i d a n ta n da n t i m i c r o b i a la c t i v i t i e sw e r ed e t e c t e di nt h e e s s e n t i a lo i la n de t h a n 0 1e x t r a c t so fh u a n g q iw h e nc o m b i n e dw i t hb a i z h u t h ea n t i o x i d a n ta s s a y ss u g g e s t e dt h a tas y n e r g i s t i ca n t i o x i d a n te f f e c t w a so b s e r v e di ne t h a n o le x t r a c t s t h ec o m p o n e n t si d e n t i f i c a t i o no fh e r bp a i r e t h a n o le x t r a c t sw e r eu s e dh p l c d a d m s ；m st e c h n i q u e a n dt h er e s u l t s s u g g e s t e dt h a tt h e r ea r e31c o m p o n e n t si nh e r bp a i re t h a n 0 1e x t r a c t sa n d16 o ft h e mw e r ei d e n t i f i e d ah i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y1 ，1 一d i p h e n y l 一2 一p i c r y l h y d r a z y lm e t h o d ( h p l c - d p p h 、c o u p l e d 、舫t 1 1a no n l i n e h p l c d i o d e a r r a yd e t e c t i o na n dm a s ss p e c t r o m e t r yt e c h n i q u e ( h p l c d a d m s m s ) w e r es u c c e s s f u l l yu s e dt oi d e n t i f yt h ep o t e n t i a la n t i o x i d a n tc o m p o - n e n t si nh u a n g q i b a i z h uh e r bp a i re x t r a c t s n er e s u l t si n d i c a t e dt h e r ew e r e 11p o t e n t i a la n t i o x i d a n tc o m p o n e n t si nh u a n g q i b a i z h uh e r bp a i re x t r a c t s ，8 o ft h e mw e r ei d e n t i f i e db yt h e i ru v 九m a x ，m s ，a n d o rm s m sd a t e s ： o n o n i n ，9 ，10 - d i m e t h o x y p t e r o c a r p a n 一3 - o p d - g l y c o s i d e ，c l a y c o s i n ，3 - h y d r o x y 一5 - m e t h o x y i s o f l a v o n e - 7 一o p - d - g l u e o p y r a n o s i d e ，f o r m o n o n e t i n ，a t r a c t y l e n o l i d ei i 。a t r a c t y l e n o l i d ev ia n dd a u c o s t e r 0 1 t h er e l a t i v ec o n c e r t t r a t i o nr a t i o ( c r ) a n a l y s i ss u g g e s t e dt h a tt h er e l a t i v ec ro fo n o n i na n d c l a y c o s i ns i g n i f i c a n tr e d u c e d ( p o 0 5 ) ，h o w e v e r ，t h e r e l a t i v ec ro f 芪术药对抗氧化协同机制的研究 c o m p o n e n t6 f o r m o n o n e t i n ，a n da t r a c t y l e n o l i d ev is i g n i f i c a n ti n c r e a s e d ( p 一般酚羟基 5 一羟基。7 羟基币1 ：1 4 - 羟基的存在对抗氧 化性质影响最大。在4 位或7 位引入羟基，因形成p 7 【共轭，延长了黄酮 环的共轭体系，促进了电子的离域化，有助于黄酮体在供氢后形成相 对稳定的自由基中间体，提高抗氧化能力( 邹耀洪等，2 0 0 1 ) 。 1 3 药对配伍理论及芪术药对概述 1 3 1 药对配伍理论概述 1 3 1 1 中药药对基本概念 “药对 又称“对药”是临床上常用的、相对固定的两味药物的 配伍形式，它是复方的最小单元。药对并非两味药物的随机组合，也 并非两种药效的单纯累积相加，而是历代医家积累临床用药经验的升 华。两味药物配伍，或增强药物功效，或减低药物毒副作用，可以提 高临床疗效( 聂惠民，2 0 0 3 ) 。 与复方相比，药对虽然组成相对简单，但它具有中药配伍的基本 特点，有其内在规律。某些药对曾是独立的小方，如芍药甘草汤，而 大部分药对则源于成方中的配伍，如麻黄汤中的麻黄和桂枝；芪术汤 中的黄芪和白术。药对作为方剂配伍中最小、最基本的单位和重要组 成部分，在方剂配伍中能起到相辅相成的作用( 王新国，2 0 0 7 ) 。 1 3 1 2 中药药对配伍原则及组成形式 药对配伍理论及其配伍规律是中药药对及方剂的核心内容。药对 正是以中医基本理论为原则，以中药的性能功用、治法为前提进行组 合配对的。根据前人的总结，药对的组成根据主要有治法、四气、五 味、升降沉浮、归经及药物毒性几大类( 胥庆华等，1 9 9 7 ) 。 山东农业大学硕士学位论文 药对的组成形式多种多样，根据不同的分类原则可以分为多种组 成形式。以七情和合为主可将其分为相须、相使、相畏、相杀、相 恶、相反；以药的性味来分，一般可分为寒凉配对、温热配对、寒热 配对、辛甘配对、辛苦配对、辛酸配对，酸甘配对，芳香配对，甘淡 配对等；以药对功效来分，一般可分为宣散配对、升降配对、消散配 对，补益配对、补泻配对、理气配对、理血配对、气血配对、除湿配 对，润燥配对等：另外，还有阴阳配对，刚柔配对，引经配对等几种 ( 胥庆华等，1 9 9 7 ) 。 1 3 1 3 中药药对的研究现状 随着中药临床应用的扩大和科技水平的提高，药对的研究已经从 传统的配伍理论分析发展为药理研究和药分研究上来。 通过药理研究分析药对的作用机制有利于阐明中药配伍的机理。 s u nwy 等( 2 0 0 7 ) 研究黄芪一自术药对抑制四氯化碳引起的肝纤维化 时发现，黄芪白术药对相对于单味药具有较好的抑制四氯化碳引起的 肝纤维化，从而增强肝的自我保护功能。研究四逆散的配伍规律发 现，柴胡芍药，芍药甘草和柴胡枳实三个药对及全方在体外有明显 的免疫抑制作用，其中柴胡芍药的作用最为显著( 孙祥，2 0 0 3 ) 。 在物质基础研究方面主要集中在药对总体药分的研究上。m ach 等( 2 0 0 8 ) 系统研究了黄柏一知母药对乙醇浸提液物质基础，分离并鉴 定了9 个化合物，分别是m a g n o f l o r i n e ，m e n i s p e r i n e ，p a l m a t i n e ， b e r b e r i n e ，t i m o s a p o n i ne1 ，t i m o s a p o n i nd ，t i m o s a p o n i nb i i i ， a n e m a r s a p o n i nc ，t i m o s a p o n i nb i i 和t i m o s a p o n i na i i i 。再如李晓如等 ( 2 0 0 6 ) 利用g c m s 法对川芎、赤芍和川芎赤芍药对中挥发油成分分 析得出，川芎赤芍药对的挥发性成分在数量上几乎是川芎和赤芍两个 单味药成分的加和，且基本由川芎的挥发油成分决定。他利用g c m s 法对川芎羌活药对的挥发油成分分析，得到了同样的结论( 李晓如 等，2 0 0 7 ) 。 复方在配伍过程中可能存在协同增效作用、新功能成分的产生、 药物毒性的降低等特点。随着科研技术和时代需求的发展，我们如果 仅仅停留在表面上的功效关系、剂量关系、物质基础鉴定研究的层次 芪术药对抗氧化协同机制的研究 上显然已经很难再深入下去。只有了解了配伍后有效成分发生的变化， 才能阐明复方中药物的配伍机理，有利于对药膳复方做更深入的剖析 和理解，以准确地将其应用于功能食品的开发。因此，除对单味药做 有效成分分析以外，还应做复方整体有效成分的分析，发现配伍有效 成分的变化以及由此引起的药效机理。这是中药能否走向世界，能否 实现现代化的关键，也是开发功能因子明确的中药源功能食品的基 础。 1 3 2 芪术药对概述 1 3 2 1 黄芪主要成分及其药理作用 黄芪又称绵黄芪，为豆科植物蒙古黄芪a s t r a g a l u sm e m b r a n a c e u s ( f i s c h ) b g e v a t m o n g h o l i c u s ( b g e ) h s i a o 或膜荚黄芪a s t r a g a l u s m e m b r a n a c e u s ( f i s c h ) b g e 的干燥根。主产内蒙古、山西及黑龙江；现 广为栽培。黄芪性微温，味甘；归经将其归为肺、脾经。黄芪素以 “补气诸药之最”著称，是一种名贵的中药材，也是一种最常用中药 材，有补气固表、止汗脱毒之功效。用于治疗气虚乏力，中气下陷， 表虚自汗，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病等( l e i h 等，2 0 0 7 ；吴发宝等，2 0 0 4 ) 。汤液本草言其“补肾脏元气”。 本草正义中赞其“能直达人之肤表肌肉，固护卫阳，充实表里， 是其专长，所以表虚诸病，最为神剂”。 自上世纪七十年代以来，国内外对黄芪的化学成分进行了大量研 究。黄芪主要成分是黄酮及其糖苷类、黄芪皂苷类、生物碱、多糖， 另外还含有多种氨基酸及棕榈酸、亚油酸等物质。皂苷类物质是黄芪 的主要功效成分，目前己从黄芪属植物中分离鉴定了将近4 0 种皂苷类 物质，主要包括黄芪皂苷i 、异黄芪皂苷i 、异黄芪皂苷i i 、异黄 芪皂苷、大豆皂苷i 、乙酰黄芪皂苷i 和荚膜黄芪皂苷等。这些皂 苷统称为黄芪皂苷( 卢彦琦，2 0 0 4 ) 。黄酮类物质是黄芪的重要成 分。研究表明黄芪中黄酮物质有3 0 多种，主要包括芒柄花苷、芒柄花 素、毛蕊异黄酮、2 ，4 二羟基基5 ，6 二甲基二氢异黄酮、山奈酚、槲 皮素、鼠李素、异鼠李素，及较多的紫檀烷类物质。并且黄芪中黄酮 及其苷类是其清除自由基的主要成分( b i a nyy 等，2 0 0 6 ；l ir 等， 1 2 山东农业大学硕士学位论文 2 0 0 5 ；l i nlz 等，2 0 0 0 ) 。多糖也是黄芪中非常重要的一类活性物 质，主要包括阿拉伯糖、葡糖酸、半乳糖醛酸、鼠李糖等的杂合糖类 ( f a n gsd 等，1 9 8 2 ；h u a n gqs 等，1 9 8 2 ) 。 黄芪药理作用主要包括以下几个方面：( 1 ) 抗衰老作用：黄芪中 起到抗衰老作用的物质主要是黄芪皂苷、黄芪多糖和黄酮类物质。黄 芪皂苷、黄芪多糖主要是起到提高体内s o d 酶活力，从而达到延缓衰 老的作用，而黄芪黄酮能直接清除体内体外自由基，阻断自由基链反 应，从而达到延缓机体衰老( 汪德清等，1 9 9 6 ；l i ux 等，1 9 9 3 ) 。 ( 2 ) 提高系统免疫力：黄芪对机体免疫功能有良好的调节作用，能增 强网状内皮系统吞噬细胞功能，促进淋巴细胞转化，对干扰素有明显 的刺激和诱生作用( 蔡瑛等，2 0 0 0 ) 。( 3 ) 促进机体正常代谢：黄芪 多糖可明显增加小鼠脾脏d n a 、r n a 和蛋白质的含量。黄芪多糖能使 小鼠肝脾细胞r n a 含量增加，使肝脾细胞中碱性r n a s e 活力呈显著性 下降。( 4 ) 保护心脑血管：黄芪皂苷能够通过改善心肌收缩舒张功 能，增加冠脉流量而保护心脑血管。而黄芪多糖对心血管系统的作用 表现在可以改善微循环，收缩心肌功能，缩小梗塞面积，减轻心肌损 伤等( 徐军等，2 0 0 4 ) 。 1 3 2 2 白术主要成分及其药理作用 白术又名于术、冬术，为菊科植物白术r h i z o m aa t r a c t y l o d i s m a c r o c e p h a l a e 的根茎。原生于山区丘陵地带，野生种在原产地几已绝 迹。现广为栽培，安徽、江苏、浙江、福建、江西、湖南、湖北、四 川1 、贵州等地均有，而以浙江栽培的数量最大。白术性温，味甘、 苦；入脾、胃经。具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎之功能( 张 印等，2 0 0 5 ；吕圭源，1 9 9 6 ) 。医学启源称其“除湿益燥，和中益 气，温中，去脾胃中湿，除胃热，强脾胃，进饮食，和胃”。药性 论言“主大风顽痹，多年气痢，心腹胀痛，破消宿食，开胃，去痰 诞，除寒热，止胃气虚冷痢。” 对于白术化学成分的研究最早从其挥发油开始，在白术根茎中大 约占到1 4 。白术挥发油物质成分有1 0 0 多种，研究表明主要为倍半 萜类化合物，例如苍术酮、揽香烯、萑草烯、石竹烯及其氧化物、芹 芪术药对抗氧化协同机制的研究 菜烯、茅术醇、姜黄烯，及倍半萜内酯化合物：白术内酯i 、白术内 酯i i 等( g u ofq 等，2 0 0 6 ) 。多糖在白术中也占到相当比重，研究表 明，白术多糖主要为果糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、木 糖等( 池玉梅等，2 0 0 1 ) 。对白术强极性成分的研究较少，白术乙醇 提取物中含有相对较多的是汉黄芩素、野菊花醇、白杨素、胡萝b 苷、滨蒿素，及多种甾醇类化合物。 白术药理作用主要包括下面几个方面：( 1 ) 抗衰老作用：研究表 明白术的抗衰老作用主要体现在能提高红细胞s o d 酶活性，抑制脑单 胺氧化酶b 的活性，对抗红细胞自氧化溶血( 吕圭源，1 9 9 6 ) 。白术 水煎液可显著提高老年小鼠全血谷胱甘肽过氧化物酶活力，显著降低 红细胞中丙二醛含量，有一定的抗衰老作用( 李怀荆，1 9 9 6 ) 。( 2 ) 提高机体免疫力：白术对机体的调节主要体现在能使t h 细胞明显增 加，提高t h t s 的比值，纠正t 细胞亚群分布紊乱状态，可使低下的 i l 2 水平显著提高，并能增加t 淋巴细胞表面i l z r 的表达。( 3 ) 促 进胃肠蠕动、增加吸收：研究表明白术煎剂有明显促进小鼠胃排空推 进功能，大剂量白术煎剂能促进小鼠的胃推进运动( 李岩等， 1 9 9 6 ) 。白术可通过增强小肠平滑肌的收缩强度，提高小肠平滑肌的 收缩频率，改善小肠平滑肌对抗缺氧的能力( 张印等，2 0 0 5 ) 。( 4 ) 抑制肿瘤细胞生长：研究表明，白术挥发油和白术多糖可显著降低人 肺癌p g 细胞的侵袭能力( 赵洪敏等，2 0 0 5 ) 。能够降低瘤细胞的增值 率，提高机体抗肿瘤反应能力及对瘤细胞的细胞毒作用，白术对小鼠 5 1 8 0 实体瘤有明显的抑瘤作用( 孙喜才等，1 9 8 8 ) 。 1 3 2 3 芪术药对概述 芪术药对由黄芪和白术组成，是历代名医所推崇的保健药对之 一。此药对在经典方剂“芪术汤”( 黄芪、白术、三七和茯苓) 、 “补中益气汤( 黄芪、党参、白术、陈皮、升麻、当归、柴胡、炙 甘草等) 、“健脾清化汤”( 黄芪、党参、白术、甘草等) 等方中均有 体现。金元医家刘完素素问病机气宜保命集泻痢论记载：“白 术黄芪汤：服前药( 指大黄汤和芍药汤) ，痢虽己除，犹宜此药和 之”。此处所述主要在除泻痢之后用于配合大黄汤、芍药汤，以达调 1 4 山东农业大学硕士学位论文 理脾胃、“和之”的目的，其类似于恢复期的辅助治疗( 李茹柳等， 2 0 0 7 ) 。 芪术药对是各个益气健脾方剂中最重要的、固定存在的经典药 对。黄芪甘温，能补脾益肺固表，为补气利水之药。白术辛苦，能泻 下焦血分湿热及疗风水要药。黄芪配白术主升偏于补，二药合用，有 “益气健脾，调理和胃”之功效。李秋霞( 2 0 0 6 ) 对益气健脾方剂的 总结概括出了益气健脾方药调理脾虚的作用机理有四个：改善胃肠道 功能；调节免疫；调节化学物质；组织修复作用。 1 4 中药物质基础研究概述 1 4 1 中药配伍对化学成分的影响 中药在配伍煎煮过程中会表现出减毒、增效甚至产生单味药不具 备的生理活性。这与在煎煮过程中某些成分发生溶出率改变、挥发、 水解、氧化、产生沉淀等物理和化学变化有关。引起这些变化的因素 较多，归纳起来有温度、p h 值、煎煮时间、配伍比例等。 1 4 1 1 配伍对有效成分溶出率的影响 中药配伍后，在煎煮环境或者某些成分的影响下会产生有效成分 增溶的现象。这些变化，大多有利于提高中药保健疗效，这是中药配 伍增效因素之一。已经有许多文献进行了这方面的报道，例如：袁久 荣等( 1 9 9 1 ) 测定了四物汤各药单煎、分煎和合煎液中的阿魏酸、8 种 微量元素、1 7 种氨基酸及水溶性煎出物的含量，结果表明在合煎时各 成分间具有增溶效应。李仙义等( 2 0 0 3 ) 采用h p l c 法测定了不同药物 配伍对大黄酸溶出率的影响，结果显示，全方配伍水煎液中结合型大 黄酸含量显著提高，说明全方水煎有利于结合型大黄酸溶出。曹佩雪 等( 2 0 0 1 ) 采用h p l c 法测定了麻黄汤分煎及合煎汤剂中甘草酸的含 量，结果显示，合煎液中甘草酸的含量高于分煎液，说明麻黄汤合煎 有利于甘草酸的溶出。赤堀昭等( 1 9 7 6 ) 发现柴胡与龙骨、牡蛎配伍 的汤剂中仅一柴胡皂苷的含量明显偏高，这是因为龙骨、牡蛎等碱性药物 中和了柴胡汤剂中的某些酸性成分，抑制了c 【柴胡皂苷的水解。曾惠芳 等( 1 9 9 9 ) 发现，虎杖分别配伍褫木、甘草后，总蒽醌含量较虎杖单 芪术药对抗氧化协同机制的研究 煎液中总葸醌含量高，推测枕木、甘草所含的皂苷类成分对虎杖蒽醌 类有增溶作用。 1 4 1 2 配伍对有毒物质溶出率的影响 中草药在配伍使用时常常表现出毒性降低，其中一个重要的原因 就是会使草药中的某些有毒成分显著降低。越皓等( 2 0 0 7 ) 考察了不 同药物与附子配伍对附子中生物碱的影响，结果表明，附子配伍炙甘 草、大黄、白芍、干姜后双酯型生物碱的含量降低，其中附子与炙甘 草、白芍、干姜配伍的解毒机制是使毒性较大的双酯型生物碱转化为 毒性小的酯型生物碱；与大黄配伍的解毒机制是某些成分与双酯型生 物碱络合生成难溶于水的复合物，使双酯型生物碱的含量降低。容蓉 等( 2 0 0 1 ) 对四物汤单煎与合煎提取液中有害物质苯甲酸的含量进行 了对比研究，结果显示合煎提取液中苯甲酸的含量明显低于单煎提取 液中苯甲酸的含量。张宇等( 1 9 9 6 ) 对附子与甘草配伍前后有效成分 进行了定性、定量研究，发现附子与甘草配伍使乌头碱类含量降低。 翟云凤( 1 9 6 3 ) 对由1 2 味药组成的复方天麻钩藤饮进行研究，发现复 方水煎剂中牛膝的皂苷类物质与和桑寄生的酚性物质有明显变化，导 致水煎剂既不具有皂苷的溶血现象，同时也改变了鞣质及酚性物质遇 三氯化铁所呈现的显色反应，这或许是复方毒性减小的原因之一。 1 4 1 - 3 配伍对金属离子的影响 严永清( 2 0 0 1 ) 分析了由黄芪、当归组成的当归补血汤中的微量 金属元素，结果发现，k 、c a 、z n 、m n 、f e 的煎出率明显高于单味 药，而非必需元素，如p b 则明显低于单味药，这提示药物配伍后的增 效作用可能与微量元素的增减有关。其实早在上世纪六十年代辜其纯 ( 1 9 6 4 ) 在研究由石膏组成的复方时就提出：石膏与含有生物碱盐、 鞣质、有机酸等的药物共煎时，可使钙含量增加，但与含有碱性物 质、淀粉、粘液质、胶质、蛋白质等的药物共煎时，则钙含量降低。“ sx 等( 2 0 0 4 ) 研究了桃仁和杏仁配伍所带来的f e 、m n 、z n 的变化， 结果显示，配伍后f e 、m n 、z n 无论在水煎液还是醇提物中含量都有显 著提高。 1 4 1 4 配伍使某些成分发生转化或产生新的化学成分 1 6 山东农业大学硕士学位论文 李秀玲等( 2 0 0 4 ) 用h p l c 法对柴胡和赤芍单煎液和合煎液的各色 谱峰进行检测和分析，发现柴胡和赤芍配伍后有六个化学成分含量发 生变化，并有一个新的物质峰产生。夏云等( 1 9 9 8 ) 对生脉散煎煮前 后的化学成分进行了研究，发现单味人参、麦冬、五味子在煎煮前均 不含5 - h m f ( 5 一羟甲基2 糠醛) ，单味五味子水煎后能产生少量的5 h m f ，人参、麦冬的水煎液中均未发现5 h m f 的存在，生脉散全方及 麦冬与五味子配伍的水煎液中5 - h m f 的含量显著增高，由此推断5 h m f 的形成可能与五味子的酸性有关，其含量主要受麦冬的影响。朱 永新等( 1 9 8 9 ) 发现生脉散水煎剂中人参皂苷r 9 3 和r h l 含量明显高于 单味人参水煎剂，由此推测在煎煮过程中人参皂苷发生了转化，使之 在复方中成为主要成分。 1 4 1 5 配伍后对化学成分基本无影响或影响甚微 中草药在配伍使用后化学成分并不发生明显的变化，而是几个中 药的加和。例如：谭洪根等( 1 9 9 5 ) 系统研究了芍药甘草汤的化学成 分，得到苯甲酸、甘草苷、芍药苷和甘草酸等1 1 个化合物，上述成分 与单味芍药和甘草所含化学成分基本一致。潘浪胜( 2 0 0 6 ) 采用h p l c 法对黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍后的各色谱峰进行检测和分析，结 果表明黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍后色谱峰具有加和性，各成分的 相对峰面积未见明显变化，说明黄连生物碱与吴茱萸黄酮配伍后没有 发生化学反应。涂瑶生等( 1 9 9 8 ) 采用咣药材分别制备了单煎与合 煎的三利降脂颗粒，对其脂溶性成分、有机酸类、生物碱类成分进行 了薄层色谱鉴别，结果表明二者无明显差异；对两种颗粒中的原儿茶 醛、大黄素成分进行了含量测定，结果显示二者无显著性差异。 1 4 2 中药化学成分常用检测方法 第三代功能食品要求功能因子结构清楚、含量及作用机理明确， 这需要有完善的检测技术与之配合。明确中药化学成分以及由配伍引 起的化学变化可为复方中药功能食品的开发提供数据和理论支持，为 功能食品基料和新产品开发奠定应用基础。目前国内外常见的中药化 学成分检测、鉴定方法主要有以下几种。 1 4 2 1 薄层色谱法( t l c ) 芪术药对抗氧化协同机制的研究 t l c 法常用于分析测定生物碱、黄酮类物质，方法简便、有效、回 收率高，分离效果较好。与h p l c 法相比，t l c 法具有成本低，流动相 选择与更换方便等优点。文欣欣等( 2 0 0 8 ) 用t l c 法结合荧光分光光度 法测定了黄连及香连丸中盐酸小檗碱的含量，结果显示，该方法可以 减少盐酸小檗碱衍生物等成分的干扰；秦学功( 2 0 0 2 ) 等采用该方法 测定了苦豆子s a p h a r aa l o p e c u r o i d e sl 中的生物碱，成功分离出了6 种已 知的生物碱。现阶段，随着操作的仪器化和仪器性能的改进，t l c 法检 测的灵敏度、结果精密度与准确度均大大提高。 1 4 2 2 气相色谱法( g c ) 中药挥发性成分的分析主要采用g c 法，它是复杂混合组分最重要 的分析工具之一。在分离分析方面具有高效、高速、高分辨率、高选 择性、高灵敏度等优点，能够与其他分析技术，如：i r 、m s 等实现较 好的联用。d a i s ell ( 2 0 0 8 ) 利用g c m s 技术从青蒿挥发油中鉴别出 了1 1 0 种挥发性物质，并对主要的抗氧化、抑菌物质进行了分析。s a n j a c ( 2 0 0 8 ) 利用g c m s 技术比较了两种不同品种薄荷挥发油成分，一共 鉴别出了1 1 2 种挥发性成分。m u s t a f ak ( 2 0 0 8 ) 利用g c m