实验十细菌生化实验-微生物实验.ppt

实验十细菌生化实验 一 实验目的1 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同 从而说明不同微生物有着不同的酶系统 2 掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法 3 了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用 4 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法 5 了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法 二 实验原理 1 微生物对生物大分子的分解利用 淀粉水解 淀粉酶油脂水解 脂肪酶明胶液化 蛋白酶石蕊牛乳试验 产酸 产碱 胨化 酸凝固等 2 糖发酵试验 产酸 溴甲酚紫指示剂大肠杆菌 产气肠杆菌 产气 杜氏小管检测大肠杆菌 产气肠杆菌 3 IMViC试验 IMViC试验 吲哚试验 甲基红试验 M R 试验 伏 普试验 乙酰甲基甲醇试验 柠檬酸盐试验 色氨酸酶 色氨酸 吲哚 对二甲基氨基苯甲醛 玫瑰吲哚 红色 大肠杆菌 产气肠杆菌 产酸能力 强 甲基红变红 弱 甲基红不变色大肠杆菌 阳性产气肠杆菌 阴性 葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2 3 丁二醇乙酰甲基甲醇 OH 二乙酰 精氨酸的胍基 红色化合物大肠杆菌 阳性产气肠杆菌 阴性 能否利用柠檬酸作为碳源大肠杆菌 阴性产气肠杆菌 阳性 三 实验材料 1 菌种 枯草芽孢杆菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 Pseudomonasaeruginosa 普通变形杆菌 Proteusvularis 产气肠杆菌 2 培养基 固体油脂培养基 固体淀粉培养基 明胶培养基试管 石蕊牛奶试管 尿素琼脂试管 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试管各3支 普通变形杆菌 内装有倒置的德汉氏小管 蛋白胨水培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基 柠檬酸盐斜面培养基 醋酸铅培养基 3 溶液或试剂 革兰氏染色用卢氏碘液 Lugol siodinesolution 甲基红指示剂 40 KOH 5 萘酚 乙醚 吲哚试剂等 4 仪器或其他用具 无菌平板 无菌试管 接种环 接种针 试管架 四 实验步骤 1 细菌水解大分子物质试验 淀粉水解试验 培养基 淀粉培养基平板菌种 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌方法 平板上划 十 字接种注意 接种前在平板底部作记号 十 字不要太大 油脂水解试验 培养基 油脂培养基平板菌种 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌方法 平板上划折线接种注意 接种前在平板底部作记号 明胶液化试验 培养基 试管明胶培养基菌种 大肠杆菌或产气肠杆菌方法 穿刺接种注意 20 培养 石蕊牛乳试验 培养基 试管石蕊牛乳培养基 2支 菌种 粘乳产碱菌或铜绿假单胞菌方法 斜面划线接种注意 观察结构注意牛乳产酸 产碱 凝固 胨化现象是连续出现的 四 实验步骤 1 细菌水解大分子物质试验2 糖发酵试验 培养基 葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基 内装杜氏小管 各3支 菌种 大肠杆菌和产气肠杆菌方法 分别接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基 四 实验步骤 1 细菌水解大分子物质试验2 糖发酵试验3 IMViC试验 IMViC试验 五 实验报告 1 分别记录试验菌种对淀粉水解 脂肪水解 明胶液化 石蕊牛奶及尿素试验的结果 以 表示阳性 表示阴性 2 记录大肠杆菌及普通变形杆菌对葡萄糖和乳糖的发酵试验结果 以 表示产酸或产气 表示不产酸或不产气 3 记录大肠杆菌和产气杆菌的吲哚试验 甲基红试验 伏 普试验 柠檬酸盐试验及硫化氢试验结果 以 表示阳性反应 表示阴性反应 4 不利用碘液 你怎样证明淀粉水解的存在 五 实验报告 5 假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖 发酵试验应该出现什么结果 6 为什么大肠杆