（环境科学专业论文）tbbpa和tbt对褐鲳鲉sebastiscus+marmoratus体内c反应蛋白crp影响的初步探索.pdf

摘要 一一单一的变化过程。说明t b b p a 和t b t 诱导产生了新的c r p 形式， 而且在暴露于污染物的过程中，c r p 以常态和诱导态并存。尤其是t b t 暴露下c r p 诱导态存在时间更长，该现象进一步证明t b t 对褐菖伍由c r p 具有更强的诱导性。 5 s d s p a g e ( 1 2 ) 检测了c r p n 以及经t b b p a 和t b t 诱导的峰值部分 的c r p t b b p a 和c r p t b t 发现，三种蛋白均有条带出现在相同的位置，但 经过污染暴露的诱导态c r p s 在电泳中还出现了其他条带，说明c r p s 中 的亚基已经产生了不同的变化；以1 0 s d s p a g e 和1 5 s d s p a g e 检 测c r p s 均得到同样的结果。s c l l i f f 试剂对这三种蛋白染色仍然均呈阳性 反应，表明c r p 不但在亚分子水平上发生了变化，而且这些变化可能与 其蛋白结构中的碳水化合物的组成有关。 6 通过e l i s a 法观察了c r p n 与诱导态c r p t b b p a 和c r p t b t 的表面抗原 性质发现，c r p t b b p a 和c r p t b t 与兔抗褐菖鱼由c i 冲n 血清反应作用强烈， 但反应程度有差别。表明褐菖鲇经t b b p a 和t b t 暴露后，尽管三种 c r p s 均有相似性，但是与抗体结合的亲和性却有明显的变化，他们结 合的顺序依次为c r p n c r p t b b p a c r p t b t 。从而进一步说明t b b p a 和t b t 污染胁迫已经引起了c r p 表面抗原物质的变化，而这些变化 可能与褐菖鱼由的血清c r p 在免疫早期的解毒机制有着密切的关系。 7 将去糖基化的c r p s 进行未变性电泳检测发现，常态的c r p n 和诱导态 的c r p 。迁移位置相同，从而证实了碳水化合物是造成c r p 变化的主要 原因。 8 c r p s 浓度的变化与形态的转化有关联，在c r p s 形态转化的过程中， 由于常态c r p s 的转化和机体自身生成诱导态的c r p s 使诱导态c r p s 浓度逐渐升高；另一方面，浓度的升高也可以反应出c r p s 形态的变 化。 9 c r p s 的浓度、形态以及与抗体亲和性的改变与污染物的种类有关，这 些参数的变化情况可以反应污染物毒性的大小。 综上所述，t b b p a 和t b t 暴露能在短时间内诱导褐菖隹由血清c 反应蛋白 ( c r p ) 含量上升，造成相应c r p s 分子的分子量、电荷和( 或) 结构的变化。 2 摘要 在t b b p a 和t b t 暴露过程中，c r p 分子存在着动力学的诱导模式，并以常态 和诱导态并存。其中以t b t 的诱导能力为更强。c r p 分子性质的改变暗示着 t b b p a 和t b t 污染胁迫引起其蛋白结构中碳水化合物组成发生改变；同时造 成c r p 表面抗原物质的变化。如果能够获得针对这些特异性有害物质诱导的 c r p s 抗原决定基的单克隆抗体( m a b s ) ，就能够在c r p 的微观异质性水平上 识别c r p ，还可以用来识别有害物质。以上结果表明，在污染胁迫下，褐菖鲇 机体内正常的生理机能受到了影响，c r p 作为鱼类机体免疫分子中免疫应急机 制的调动，对机体损伤的修复与免疫早期的解毒起了重要的作用。该研究可为 我国海洋污染的监测和污染早期预警提供理论依据，特别是对海洋环境污染短 期暴露或污染突发事件监测提供宝贵资料。 关键词：三丁基锡，四溴双酚a ，c 反应蛋白( c r p ) 3 摘要 a b s t r a c t i nt h i ss t u d y ，t h es e b a s t i s c u sm a r m o r a t u ss e l a l mc r pa n dl t sr e a c t i o n sa f t e r e x p o s u r et o0 2 g lo ft b ta n d0 2 m g lo ft b b p af o r0 ，3 ，6 ，12 ，2 4 ，3 6 ，4 8 h w e r ee x a m i n e d t h er e s e a r c hc o n c l u d e se l e v a t i o ns e r u mc r pl e v e lu n d e rs t r e s s ，t i m e d e p e n d e n ta n a l y s i s ，s d s p a g ea n a l y s i s ，g l y c o p r o t e i nn a t u r eo fc r p ，n a t i v e p a g e a n a l y s i sa n di m m u n o l o g i c a lc r o s s r e a c t i v i t y t h er e s u l t ss h o w e da sf o l l o w i n g ： 1 c r pw a se x t r a c t e db yp u r i f i c a t i o na f f i n i t ya n dm e a s u r e db yu va b s o r p t i o n i t s s e r u mc o n t e n ti sa b o u t3 7 8 515 + 13 51p g m l o n l yo n ek i n ds u b u n i tw a s o b s e r v e di ns e b a s t i s c u sm a r m o r a t u ss e r u mc r p ，w h i c hi s g l y c o p r o t e i ni n n a t u r ea n da b o u tm r2 4 5 k d a b e c a u s eo ft h eh i g hc a r b o h y d r a t ec o n t e n to f c r p s ，t h em o l e c u l a rw e i g h td e t e r m i n e db ys d s p a g ei sn o ta c c u r a t es i n c e t h ea n o m a l o u sb e h a v i o ro fg l y c o p r o t e i n si ns d s p a g ei sv e r yc o m m o n 2 t h el e v e l so fs e r u mc r pi ns e b a s t i s c u sm a r m o r a t u sw e r eb o t hi n c r e a s ea f t e r c o m m e n c e m e n to fe x p o s u r et ot b b p aa n dt b ta n dw a sf o u n dt or e a c ht o m a x i m u ma f t e r1 2 h g r a d u a l l yt h ec r pl e v e lr e c e d e da n da f t e r3 6hi tc a m e d o w nt ot h el e v e ls t a y e dc l o s et ot h en o r m a lv a l u e b u tt h ee l e v a t i o np e a ki n s e r u mc r pc o n t e n ti sd i f f e r e n t t h em a x i m u ml e v e lo fc r po ne x p o s u r et o t b b p aw a sr e a c h e dt o7 8 3 18 i t g m l ( 2 0 7 9f o l d sh i g h e rt h a nt h en o r m a ll e v e l ) ， w h i c ht ot b tw a s1 0 3 5 0 0 7 i _ t g m l ( 2 7 4 8f o l d sh i g h e rt h a nt h en o r m a ll e v e l ) f u r t h e r m o r e ，t h es e r u mc r pc h a n g er a t ei sa l s od i f f e r e n ta f t e re x p o s e dt o t b b p aa n dt b t t h e s er e s u l t si n d i c a t et h a tt b ti sp o s s i b l em o r et o x i t a n tt o s e b a s t b s c u sm a r m o r a t u s 3 i nn a t i v ep a g e ，m o b i l i t i e so ft h et h r e ep u r i f i e dc r p sd i f f e r e dn o t i c e a b l y s h o w i n gt h e i rd i f f e r e n c ei nm o l e c u l a rf o r m s i n t e r e s t i n g l y ，t h ec r p si n d u c e d b yt h ep o l l u t a n t sv a r yf r o mt h en o r m a lc r p na sf r o me a c ho t h e r t h e s e e l e c t r o p h o r e t i ca n a l y s i sc l e a r l yd e m o n s t r a t et h a te a c hc r p i su n i q u ei nn a t u r e a saw i d es p e c t r u mo fp o l l u t a n t sa r ec a p a b l eo fi n d u c i n gd i f f e r e n tm o l e c u l a r v a r i a n t so fc r p sb e a r i n go n et oo n ec o r r e s p o n d e n c ew i t ht h et o c a n t sa n dt h e 4 摘要 c r p g e n e r a t e d 4 。确eg r a d u a le l e v a t i o na n ds u b s e q u e n td e c l i n ei nt h el e v e lo fc r p 墩d i f f e r e n t t i m ei n t e r v a l sa f t e rs u b j e c t i n gt h ef i s ht od i f f e r e n tp o l l u t a n t sp r o m p t e du st o i n v e s t i g a t et h es t a t eo fc r p 越t h e s et i m ep o i n t s 。强en a t i v ep a g ea n a l y s i so f t h ec r pp r e p a r a t i o n sf r o mt h es e r aa td i f f e r e n tt i m ei n t e r v a l s0 ，3 ，6 ，12 ，2 4 ，3 6 a n d4 8 ha f t e ri n c u b a t i o no ff i s h e si nt b b p aa n d 豫tp o l l u t e dw a t e r s e p a r a t e l y i ti si m p o r t a n tt on o t et h a ta l t h o u g ht h ec r pp r e p a r a t i o n sa tt h e i r 辨a kl e v e l sg i v es i n g l eb a n d st h e r ew a sh o w e v e rc o e x i s t e n c eo ft h en o r m a la n d i n d u c e df o r m so fc l 冲sd u r i n gt h ec o u r s eo ft r a n s f o r m a t i o nf o rb o t ht h e p o l l u t a n t s 。i nt h ee a r l ys t a g eo fi n d u c t i o nt h et r a n s f o r m e dc r p ( c r p t b b p aa n d c r p t b t ) i n c r e a s e dg r a d u a l l ya st i m ep r o c e e d e dt o w a r d st h ep e a kp e r i o do f i n d u c t i o nw h i l et h en o r m a lf o r m ( c r p n ) d e c r e a s e da n db e c a m en e g l i g i b l ea t t h ep e a k ；t h e nt h ec r p ss t a r t e dr e a p p e a r i n g 、i t had e c r e a s ei nt h ei n d u c e d f o r ma n df i n a l l yt h ei n d u c e df o r mc o m p l e t e l yd i s a p p e a r e da tl o n g e rt i m e 。羽瓣 p a t t e r n so ft r a n s i e n ta p p e a r a n c eo ft h ei n d u c e df o r m sw e r ev e r ys i m i l a rf o r t b b p aa n dt b ti n d u c t i o n 。 5 i ns d s - p a g e ( 12 ) ，a l lt h r e ef o r m so fc r pg i v eo n es a m eb a n do fa p p a r e n t m r2 4 5 k d ai n d i c a t i n gt h a tt h ec r p sc o n t a i no n es a m en o n c o v a l e n t l y a s s o c i a t e ds u b u n i t , b u to t h e rb a n d sw a sf o u n di nc i 冲sd e m o n s t r a t et h a tt h e s u b u n i t si nc r p sc h a n g e dd i f f e r e n t l y 珏eo n eb a n di na l lt h et h r e ec r p s a p p e a r e da tt h es a m ep o s i t i o n si n d i c a t i n gt h ep r e s e n c eo ft h es a m es e to f s u b u n i ti na l lt h et h r e ec r p si ns p i t eo ft h e i rd i f f e r e n c ei nm o b i l i t i e si nn a t i v e p a g e t l l l ep u r i f i e dc r p sa l s os h o w e ds i m i l a rr e s u l t so nl0 s d s p a g ea n d 15 s d s p a g e o np a ss t a i n i n gt h es u b u n i ti na l lt h et h r e ec r p ss t a i n e d p o s i t i v e l yi n d i c a t i n gt h a tt h es u b u n i ti sa l s og l y c o p r o t e i ni nn a t u r e 6 a n t i s e r aa g a i n s ts e b a s t i s c u sm a r m o r a l u sc r p ( c r p s ) c r o s sr e a c t e ds t r o n g l y w i t hc r p t b b p aa n dc r p t b ta se v i d e n tf r o me l i s ar e s u l t s t h es l o p e so ft h e c u r v e si n d i c a t e dd i f f e r e n t i a lr e a c t i v i t yo fc r p t b b p a c r p t b ta n dc r p n 谢饿 r a b b i ta n t i c r p n t h e s er e s u l t si m p l i e dt h ea n t i g e n i cs i m i l a r i t yb e t w e e nt h e 5 摘要 t h r e ec r p s 、析t hs l i g h tb u td e t e c t a b l ev a r i a t i o n si nt h e i ra f f i n i t yf o ra n t i b o d y b i n d i n g t h u sc r p t b b p aa n dc r p t b ts h a r ea n t i g e n i cd e t e r m i n a n t si nc o m m o n 谢t 1 1c r p s ，h o w e v e r ，t h e yb i n dt ot h ea n t i b o d y 埘t l ld i f f e r e n ta f f i n i t y t h e s t r e n g t ho ft h e i rr e a c t i v i t yw e r ei nt h eo r d e ro fc r p s c r p t b b p a c r p t b t 7 d e t e c tt h ed e g l y c o s y l a t e dc r p s 晰t l ln a t i v e p a g e ，t h es a m eb a n di n d i c a t e s t h a tc a r b o h y d r a t ei st h em a i nr e a s o nt ot h e s ec h a n g e so fc i 冲s 8 t h ec h a n g eo fc r p sc o n t e n th a sc l o s er e l a t i o n s h i pw i t ht h et r a n s f o r m a t i o no f c r p sf o r m s d u r i n gt h ep r o c e s s ，b e c a u s eo ft h et r a n s f o r m a t i o no fn o r m a lc r p s a n dt h ei n d u c e dc r p sp r o d u c e db yo r g a n i s m ，t h ec r p sc o n t e n tr i s e du p ；o nt h e h a n d ，t h er i s i n gc o m e ma l s or e f l e c t st h et r a n s f o r m a t i o no fc r p s ，w h i c h i n d u c e dt h ea f f i n i t y 、撕n la n t i b o d y 9 t h ec o n t e n t , f o r m sa n da f f i n i t yd e g r e ew i t ha n t i b o d yo fc r p si sc o n c e r n e d 、 ，i 廿lt h es p e c i e so fp o l l t a n t s t h e s ep a r a m e t e r sc a nr e f l e c tt h e t o x i c i t yo f p o l l u t a n t s a sa b o v em e n t i o n e d ，s e b a s t i s c u sm a r m o r a t u ss e r u mc r pw o u l db ei n d u c e d a f t e rt b b p aa n dt b te x p o s u r e ，w h i c ha l s oc h a n g e dc r p sm o l e c u l a rw e i g h t ， c h a r g ea n d ( o r ) s t r u c t u r e n o r m a la n di n d u c e df o r m so fc r p sd u r i n gt h ec o u r s eo f t r a n s f o r m a t i o nf o rb o t ht h ep o l l u t a n t s ，a n dt b ti s p o s s i b l em o r et o x i t a n t t o s e b a s t i s c u sm a r m o r a t u s t h ec a r b o h y d r a t ei nt h i sp r o t e i ni n d u c e dc r p st oc h a n g e b a s e do na b o v ea n a l y z a t i o n ，d u r i n gt h ep o l l u t i o ne x p o s u r e ，t h en o r m a lp h y s i c a l f u n c t i o no fs e b a s t i s c u sm a r m o r a t u sw a sa f f e c t e d , c r pa c t si m p o r t a n tr o l ei nf i s h i m m u n i t ym e c h a n i s m ，o r g a n i s mr e p a i r i n ga n de a l i e rd e t o x i f i c a t i o n k e y w o r d s ：t b b p a ；t b t ；c - r e a c t i v ep r o t e i n 6 缩略语中英文对照表 缩略语中英文对照表 7 厦门大学学位论文原创性声明 本人呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立完成的研究成 果。本人在论文写作中参考其他个人或集体己经发表的研究成果， 均在文中以适当方式明确标明，并符合法律规范和厦门大学研究 生学术活动规范( 试行) 。 另外，该学位论文为() 课题 ( 组) 的研究成果，获得() 课题( 组) 经费或实 验室的资助，在噶墓嚣客船验室完成。( 请在以上括号 内填写课题或课题组负责人或实验室名称，未有此项声明内容的， 可以不作特别声明。) 声明人( 签名)：腓 兮p 必年留月1e l 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人同意厦门大学根据中华人民共和国学位条例暂行实施办 法等规定保留和使用此学位论文，并向主管部门或其指定机构送 交学位论文( 包括纸质版和电子版) ，允许学位论文进入厦门大学 图书馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加 入全国博士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索，将学位论文 的标题和摘要汇编出版，采用影印、缩印或者其它方式合理复制学 位论文。 本学位论文属于： () 1 经厦门大学保密委员会审查核定的保密学位论文， 于年月日解密，解密后适用上述授权。 () 2 不保密，适用上述授权。 ( 请在以上相应括号内打“”或填上相应内容。保密学位论 文应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文，未经厦门大学 保密委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写 的，默认为公开学位论文，均适用上述授权。) 声明人( 签名) ： 寻叼。妒年9 月1 日 一 7 万佩钕 t b b p a 羊m w 鲳( $ e b a s t i s c t r s t 】# 内c 反d 益自【c r p 影响的韧女“索 第一章前言 一、o r p 的生物学特点和生理效应 c r pf c r e a c t i v ep r o t e i n ) 是种生物自古保存来的分子，存在于许多物种 中，属于一群独特的血清蛋白家族，为五聚素( p e n t r a x i i a s ) 蛋白家族的员， 发现于1 9 3 0 年。它具有五个环状五聚物结构与放射对称状的特征( 如罔卜1 ) ， 由五个原聚体( - 2 0 3 0 k d a ) 以非共价连结在起( s h r i v e ，ak ，e la l1 9 9 6 ) 。将 其定义为c r p 是因为所有生物中的c r p 都可以依赖于c a 2 + 与肺炎球菌壁上c 多糖中的磷酸胆碱和磷脂相结合。 # 自s u k y a s i n h a a t2 0 0 1 图卜lc r p n 的电镜结构 f i gl _ le l e c t r o nm o c r o g r a p ho f c r p c r p 是种急性期蛋白，由肝脏分泌，可以通过c a 2 + 或其本身的阳离子结 合部位与之结合，经过经典途径激活补体，清除外来致病因子及损伤细胞，为组织 修复创造条件。另外c r pj 丕能与t 细胞结台，通过后者调节免疫功能：同时还 能抑制血小板聚集等。一般认为，c r p 是机体防御系统巾的一员。当机体受到 外伤、局部缺血、烧伤、各种发炎与感染时能迅速上升，在有状况出现时能迅 t b b p a 和t 盯埘褐鲳自由( s e b a s t i s c u sm a r m o r a t u s ) 体内c - 反应蛋白( c r p ) 影响的初步探索 速地上升到1 , 0 0 0 倍以上；当状况缓解后也会很快下降( 武建国，2 0 0 5 ) 。所以对 c r p 含量的检测可以用来监测机体的各种发炎状况。 它在健康人体身上存在量非常少，血液中的平均浓度大约为l p g m l ，在 疾病急性反应期能超过4 0 0r t e d n l l 。而鱼体内c r p 含量比人体要高得多，从 5 5 p g m l 到4 0 0 p g m l 不等，平均浓度约为2 0 0 i _ t g m l ( i n d r a n ip a u le ta 1 ，19 9 8 ) ， 而且在非正常条件下上升3 倍则是常见的。 二、c r p 研究进展 2 1 在临床上医学的研究： 虽然c r p 长久以来一直认为只是个疾病急性时期才有的蛋白质，可以作为 早期侦测发炎与感染的指标，而随着临床医学的进展，它的使用渐渐增加。目 前已知c r p 经由钙离子的协助也能与许多分子如磷酸胆碱( p h o s p h o c h o l i n e ) 、 组蛋白( h i s t o n e s ) 等等，以及受伤组织、细胞核内的抗原与病原体等结合。它 也与白血球的吞噬作用和免疫系统的启动有关。它能活化补体系统，与f c 受体 间相互作用从而导致许多发炎相关细胞激素的产生，继而引发连串性免疫发炎。 c r p 还能辨识出自身内变化的分子或者外来分子，这种辨识能力提供了自身体 内防御的早期作用，因此在炎症与癌症病变的研究上都具有实际应用价值。 更引为重视的是，愈来愈多的研究指出c r p 对心血管疾病是个独立的风 险因子，血清c r p 浓度若高个四分之一心血管病则增加1 5 至7 倍的风险。 在肾衰竭方面，若c r p 升高则心血管疾病将增加5 5 倍的机会，死亡率将增加 4 6 倍。c r p 的上升指标用来预测冠心病发作不仅非常灵敏，而且也可用于评 估血管摄影与治疗后的效果。即使在健康无症状的大众人群中，其值在正常范 围的上限者也可能有两倍发生冠心病、中风、周边血管病变( 2 4m g l 比上 1 0m g l ) 的机会。在正常人身上，c r p 会因抽烟而上升，与b m i ( b o d ym a s s i n d e x ) 呈j e 相关， 在加以校正后对于预测心血管疾病仍然有用。以同样的方式 观察其它发炎相关的标记，也能得出类似的结果，显示发炎与动脉硬化间有某 种关连存在。发炎是硬化过程的主要变化，尤其是p l a q u e 的破裂，将导致血 t b b p a 和t b t 对褐鲳壹由( s e b a s t i s c u sm a n n o r a t u s ) 体内c 威应蛋白( c r p ) 影响的初步探索 栓的形成。然而，至今仍尚未知晓它的上升到底是反映了动脉发炎或者是身体 其它地方发炎。慢性轻微感染或诲也是霪心病症的危险因子。也有不少证据显 示c r p 会因为心肌缺氧而增加，所以c r p 在所有急性心肌梗塞的病人身上都会 出现，最高值出现在发病嚣的五十小时，其高低与急性期的风险以及豳后的愈 后都有关系。经实验证实急性梗塞医含有的c r p 能活化补体，引起一连串连锁 反瘟，c r p 嘉低更能反应浅了梗塞大小。 c r p 指标或许不仅仅是急症时的一个标记，也有可能是心斑管疾病的线索。 霾鼗说明它可运用的范围是愈来愈广泛了。 2 。2 在动物中的研究 在多种比较高级的动物中包括鱼类( s i n l m ，s a n dm a n d a l ，c ，1 9 9 6 ；r o b e y ， f a 。e ta l ，1 9 9 3 ；p e p y s ，m 。b 。e ta ，1 9 8 2 ；m u r a i ，t e ta ，19 9 0 ；m i t r a , s a n d b h a t t a c h a r y a ，1 9 9 2 ) 、两栖动物、鸟类和哺乳动物中都有c r p 的报道( p e p y s ， m 。b 。a n db a l t z , m ，19 8 3 ；s h r i v e ，a e t 蕊，1 9 9 6 ；d eb e e r , b c e ta l ，19 8 2 ； m a u d s l e y ，s e ta l ，1 9 8 7 ；r u b i o ，n e ta 1 ，1 9 9 3 ；d o w t o n , s b a n dh o l d e n , s n 。，1 9 8 4 ；b a c kb a 。e ta 1 ，量辨7 ) 。在无脊椎囊豹马蹄蟹中，c r p 的浓度为 l - 5 m g m l ，是血淋巴的组成部分( r o b e y ，f a ，1 9 8 1 ) 。c r p 也同样在一种非常 原始酶动物鲎孛有发现( r o b e y ，f 。a ，t 9 8 1 ) 。然面也有报道说雁蟾静c r p 不是 急性期蛋i 刍( l i n ，l a n dl i u , t y ，1 9 9 3 ) 。因为c r p 在分子顺序、功能和结构上 其有进化保守性，人赛认势它具有重要靛生物学律焉 e p y s ，m 。b 。a n db a l t z , m 。 l ，1 9 8 3 ；k o l b b a c h o f e n ，v ，1 9 9 1 ) 。 动物体内c r p 在c a 2 + 存在酌条律下麓与磷黯酰艟碱h o s p h o r y l c h o l i n e ， p c ) 、磷脂结合、脂蛋白、脂多糖、染色质、半乳糖和胆固酵等多种配体结合， 磊这些配体是动物细臆静成分，娄动物受到外界物质入侵( 如细菌、病毒等徽 生物) 或受到损伤时，其自身细胞就释放出这些物质，同时c i 冲含量迅速上 舞，荠逶过c 矿+ 或其本身的强离子结合部位与这些配基结合，经过经典途径 激活补体，清除外来致病因子及损伤细胞，为组织修复创造条件。c r p 的这种 生物学作用与它酶结构有关，c r p 的5 个蹶聚体( p r o t o m e r s ) 遵过菲共价键结 合在一起，每个原聚体都有一个配基结合位点，并且都在原聚体的同平面。 t b b p a _ t b t “璀9 一抓rs e b a s t i s c u sm a r m o r a t u s ) # c & 出 i c r p ) # 响女* 女 与带有异物的配摹结合后，结合位点的刘面部位就会启动补体激活机制。以 c r p 抗微生物为例( 如图1 2 ) ，当微生物入侵机体后，p c 或其它酣基修饰， 微生物，在c a 卜存在下，配基微生物复合体jc r p 、l f 基t 的特异位点具有高 度的亲和肚，然后一f * 有八侵微生物的c r p 能正即与吞噬细胞的补体结台，激活 补体，清除异物。 j ? | | ，? b n d s t oc 1 a0 rf cr ii - a l d 口js z a a 2 0 0 2 囤i - 2c r p 的抗微生物机制 f i g1 - 2 t h em e c h a n i s mo f a n t i m i c r o b i a lf u n c t i o n so f c r p 2 + 3 环境污染列鱼类c r p 的影响 米源卜t 1 l k 排放的打机化台物如苯酚以及旮机锡、杀虫剂和重金属等能够 在鱼体中祟科，造成各种生理紊乱。在急性期反应中，c r p 的参与表明它们叫 能存抵御外来感染或环境毒性暴露情况下产生全面的响应中起更要的作。因 此，c r p 指标址然适合于免疫与机体内化学解毒系统之问的相u 应答。然而， 关r 这方面的研究报道刚刚开始为数极少。曾有研究报导某些一价金属离子可 t b b p a 和t b t 对褐鲳纳( s e b a s t i s c u sm a r m o r a t u s ) 体内c 反应蛋白( c r p ) 影响的初步探索 以调节a l 酸糖蛋白和转录水平上的c r p s ( y i a n g o u , m e ta l ，1 9 9 1 ) 。s i n h as 等人报导关于c r p 这一组蛋白在露斯塔野鲮( l a b e or o h i t a ) 化学污染急性期中反 应性质的研究( s i n h as ，2 0 0 1 ) 。研究发现，c r p 水平会因污染而发生变化， 将鱼暴露于镉中，其体内c r p 含量水平增加了2 3 倍；还有欧蝶( p l e u r o n e c t e s p l a t e s s a ) ，淡水鳢( c h a n n ap u n c t a t u s ) ( w h i t ea ，1 9 8 1 ；g h o s hsa n db h a t t a c h a r y a s ，1 9 9 2 ) 和虹鳟鱼( o n c o r h y n c h u sm y k i s s ) ( n a k a n i s h iy e ta l ，1 9 9 1 ；k o d a m ahe ta l ， 1 9 8 9 ；w i n k e l h a k e 见e ta l ，1 9 8 3 ) 等，他们的c r p 水平在暴露的急性期均发现有 可检测的变化。在化学物质暴露期间，特种蛋白合成含量上的变化已经成为在 日趋恶化的水体环境中对某生物体发生的生化反应进行监测的十分有用的方 法。尤其在水生生物中，由于低等脊椎动物中有少量或几乎没有免疫球蛋白 ( r o b e y ，f a ，1 9 8 3 ) ，抵抗病原菌主要是依靠先天免疫系统，所以与高等脊椎动 物相比，他们体内的c r p 在免疫反应前期具有更为重要的作用( a h k a r s t e n a a n dc d r i c e ，2 0 0 4 ) 。鉴于这些原因，进行水环境中污染物胁迫引起鱼体内c r p 变化情况的研究，观察污染前后鱼体内c r p 水平与不同污染物之间的关系，从 而进一步了解水体污染对鱼类免疫功能、生理防御等方面的影响有着非常重要 的意义，它将为水生环境生态的污染监测提供的灵敏、有效的生物标志物。 目前，在国内，对c r p 的研究还主要集中在临床；还未见到有关鱼类c r p 的研究报道。 三、t b b p a 的基本性质 t b b p a 的分子式为c 1 5 h 1 2 b r 0 2 ，相 对分子量为5 4 3 8 5 ，结构式如图1 3 所示。 t b b p a 具有高亲脂性，易溶于丙酮、甲醇、 热乙醇，苯等有机溶剂，水溶性低，在水 体中含量低，但易于在底泥中累积等特点； 此外，t b b p a 在一定条件下可发生光降解 b rb r h t e t r a b r o m o b i s p h e n o l - a ( t b b p - a ) 图l - 3四溴双酚a ( t b b p a ) 的结构式 f i g 1 - 3t h e c h e m i c a ls t r u c t u r eo f ( e r i k s s o n ，p e ta l ，2 0 0 1 ) 和生物降解( r o n e nz ，a b e l i o v i c ha ，2 0 0 0 ) t b b p a 和t b t 对褐鲳鲇( s e b a s t i s c u sm a n n o r a t u s ) 体内c - 反应蛋白( c r p ) 影响的初步探索 四、t b b p a 在环境中的污染状况 随着t b b p a 的大量使用，人们在许多环境介质和生物体中发现3 t b b p a 的 存在( d ew i t , e ta l ，2 0 0 2 ) 。最明显的释放源是生产t b b p a 和使用t b b p a 作阻燃剂 的工厂，如阻燃聚合产品生产厂、塑料制品厂等。s e l l s t r o m 等( 1 9 9 5 ) 检测瑞典纺 织品生产工厂附近河流的底泥中t b b p a 的含量，发现河流下游污泥中t b b p a 浓 度明显比上游污泥中的高。 由于t b b p a 几乎不溶于中性p h 的水体中，所以它的流动性非常小。但是在 高p h 环境中，t b b p a 的溶解度明显增加。而干旱地区的土壤呈强碱性，因此 t b b p a 容易在其土壤中迁移，进而对其地下水也会造成污染。 虽然t b b p a 具有高亲脂性而且可以被光降解和生物分解，但是仍有许多报 道在空气、石油和底泥中发现t b b p a 和它的二甲基化衍生物的存在。1 9 9 9 年， b e r g m a n 等报道仪器设备拆除厂空气中t b b p a 的浓度约为1 3 11 0 p m o l m 3 ，平均 浓度达到7 5 5p m o l m 3 ；k a r i n6 b e 略等( 2 0 0 2 ) 从瑞典的2 2 处用市政废水浇灌的植 被中取1 1 6 个污泥样品进行测定，结果显示t b b p a 的含量在n d - 2 2 0 n g g 范围内； 2 0 0 4 年，m o r r i s 等研究了t b b p a 在北海河口及水体食物网中的分布，发现t b b p a 在底泥中含量为1 0 2 i t g k g 。然而目前关于t b b p a 在生物圈存在的数据还相当有 限。人体血样样本( b i r n b a u m , e ta 1 ，2 0 0 4 ) 和肉食性鸟类的蛋( b e r g e r ，e ta 1 ，2 0 0 1 ) 被分别检测出有t b b p a 和它的衍生物的存在。此外，底泥和贻贝中也先后被检 测出t b b p a 及其衍生物的存在( w a t a n a b e ，e ta 1 ，1 9 8 3 ；s e l l s t r o ma n dj a n s s o n ，1 9 9 5 ； m o r r i s ，e ta 1 ，2 0 0 4 ；s a i n t l o u i sa n dp e l l e t i e r ，2 0 0 4 ) ； 1 9 8 6 2 0 0 0 年，s o u i c h io h m 等对日本黑鲈( m i c r o p t e r u ss a l m o i d e s ) 和鲻鱼 ( m u g i lc e p h a l u s )