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课题2 多聚酶链式反应 PCR 扩增DNA片段 2019 12 20 1 温故知新1 组成DNA分子的基本单位是什么 这些基本单位是如何连接成DNA分子的 DNA分子结构有什么特点 2019 12 20 2 脱氧核苷酸 脱氧核糖 含氮碱基 嘌呤 嘧啶 腺嘌呤 A 鸟嘌呤 G 胞嘧啶 C 胸腺嘧啶 T 2019 12 20 3 2019 12 20 4 2019 12 20 5 脱氧核苷酸链结构简图 磷酸二酯键 2019 12 20 6 5 5 3 3 2019 12 20 7 DNA分子的复制需要哪些条件 DNA分子的复制过程是怎样的 温故知新2 2019 12 20 8 DNA母链 提供复制的模板解旋酶 打开DNA双链4种脱氧核苷酸 合成子链的原料DNA聚合酶 催化合成DNA子链ATP 为复制过程提供能量引物 使DNA聚合酶从引物的3 端开始连接脱氧核苷酸 DNA复制的条件 2019 12 20 9 2019 12 20 10 一 PCR原理 PCR 多聚酶链式反应 技术是一种体外迅速扩增DNA片段的技术 它能以极少量的DNA为模板 在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝 利用了DNA的热变性原理 通过控制温度来控制双链的解聚与结合 2019 12 20 11 DNA母链 提供复制的模板解旋酶 打开DNA双链4种脱氧核苷酸 合成子链的原料DNA聚合酶 催化合成DNA子链ATP 为复制过程提供能量引物 使DNA聚合酶从引物的3 端开始连接脱氧核苷酸 PCR反应的条件 80 100 耐热的DNA聚合酶 缓冲溶液 维持反应的pH值不变 2019 12 20 12 二 PCR反应的过程 1 变性 温度上升到90 以上时 双链DNA解聚成为单链 2 复性 退火 温度下降到50 左右 引物与模板DNA单链的互补序列配对结合 3 延伸 温度上升到72 左右 溶液中的4种脱氧核苷酸在TaqDNA聚合酶的作用下 根据碱基互补配对的原则合成新的DNA链 2019 12 20
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