vitek使用培训

CONTROLYOURENVIRONMENT VITEK 新一代 全自动化的微生物分析仪独特试卡设计简单 标准化方法可靠结果完整的统计功能 新一代 VITEK 简单的操作流程操作人員重复性好不同实验室可获重复性高的结果符合质量保证体系 VITEK 检测流程 开机程序 1 顺序打开稳压器 不间断电源 打印机 显示器电源开关2 打开VITEK主机顶上的小门 启动箱内大开关 POWER 启动大开关旁的小开关 Battery 3 启动电脑主机开关 屏幕会出现 LOGIN 画面 这时输入 supv 回车 supv四字母为小写 屏幕出现 Password 键入 supv 回车 supv四字母为小写 且输入的supv四个英文字母不会显示在屏幕上 4 稍候出现主菜单 接着出现一红色警告视窗 点击红色视窗左下方的OK键将该视窗关闭 5 鼠标左键点击左上角主菜单的VITEK键 进入VITEK视窗 点击READER键 选择Status菜单 点击PROCERSSON6 鉴定仪状态由 NOTPROCESSING 变为 PROCESSING NEXTREADAATXX XX 表明开机成功 VITEK VITEK开机程序 关机程序 1 检查卡片状态 在VITEKSTATUS窗 查看A B C D架的所有位置卡片的状况 确定所有卡片的鉴定实验已完成 并已打印出结果 2 终止检测程序 在VITEKSTATUS视窗点击READER 选择Status 点击PROCESSOFF 留意检测仪状态由 Processing 变为 NotProcessing 表示已停止鉴定程序 切记 一定先执行PROCESSOFF程序 才可以执行关机程序 3 执行关机程序 退出到MainMenu 主菜单 点击SYSTEM 选择 SYSTEMMAINTENANCE 选择 STOPTHESYSTEM 点击左下方的EXECUTE键 系统完成关机程序后 关闭电脑主机开关 白色 4 按下列顺序关闭外围设备 1 VITEK孵育 检测箱 打开检测器顶上的小门 关闭Battery开关 关闭POWER开关 2 显示器 3 打印机 4 不间断电源 有圆圈标记的小按钮 5 稳压器 VITEK VITEK关机程序 GNI 卡片肠道杆菌非发酵菌NFC卡片非发酵菌ANI卡片梭菌属拟杆菌属 试卡种类 YBC卡片酵母菌 念珠菌 BAC卡片芽胞杆菌GPI卡片葡萄球菌链球菌李斯特菌 棒状杆菌 VITEK BIO卡片液体內的细菌计数 VITEK 其他试卡 定向试验 革兰氏染色 接触酶试验 氧化酶试验 革兰氏染色 原理 检查细菌细胞壁的渗透性 单层厚钛聚糖细胞壁 不紧密外壁层 透乙醇 薄内壁层钛聚糖 革兰氏阳性革兰氏阴性 在细菌学里最普遍的染色方法 革兰氏染色液 步骤 G G 染色前 所有细胞是透明的 结晶紫着色後用碘增加染料与菌体结合 乙醇从G 菌体洗脱结晶紫 用番红液复染 革兰氏阴性菌呈粉红色 革兰氏阳性菌呈兰紫色 COLORGRAM2革兰氏染色剂 ColorGram2革兰氏染色剂 即可用试剂 R1 草酸盐 结晶紫溶液 R2 稳定化卢哥氏 PVP液 R3 脱色剂 R4 番红液技术要点 使用新鲜培养细菌 24 48小时 ColorGram2染色剂 试剂组成R1 240mlx1R2 240mlx1R3 240mlx1R4 240mlx1所有试剂带喷咀於18 25 C储存 革兰氏染色液2 ColorGram2 特性稳定化的碘液PVP 聚氯乙烯吡咯烷酮 可以防止因碘挥发而变质 同时也增强了媒染效果 更容易分别G 及G 菌高质量的结晶紫和番红 无沉淀 接触酶试验 接触酶试验 用于分辨葡萄球菌及链球菌 葡萄球菌 革兰氏阳性球菌 链球菌 接触酶 接触酶 H2O2H2O O2 接触酶试验 传统方法 接触酶 接触酶 原理 试管法 玻片法 H2O2 O2 菌落 接触酶显色剂 玻片法 试管法 IDColorCatalase接触酶试剂 容许於平板 包括血平板 上作直接检测 组成 增稠剂 高粘度集中所产生的气泡 防止试剂扩散 Evans兰 兰色使结果更容易阅读 玻片法 直接在平板上测试 IDCOLORCATALASE接触酶试剂 玻片法 将待检菌落乳化於一滴试剂中直接平板测试 将一滴试剂直接滴於平板上的菌落 步骤 或 即时产生气泡 5秒内 代表阳性结果 鉴定用接触酶显色剂 接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应 由於传统方法的弱阳性结果 这个试验没有得到充分应用 IDColorCatalase 产品规格 氧化酶试验 氧化酶试验 用于分辨肠道杆菌及非发酶菌 氧化酶试验 原理 TMPD 氧化TMPD 氧化酶 TMPD 2甲基一对一苯撑二胺 货号 55922纸片 浸泡饱和TMPD储存 2 8 C於暗处有效期 1年组成 2x30片小瓶装 纸片 货号 70460储存 2 30 C於暗处组成 1个小瓶 液体试剂 深紫色 透明 氧化酶试验 氧化酶纸片法 VITEK方法 样本操作步骤及注意部分 选取纯菌落 选取纯的菌落 若不纯需二次分纯 不可用含抑制剂的培养基 取菌落时不要取到培养基 培养时间不要太长 以免菌落老化 18hr至24hr用0 45 盐水稀释 盐水用完后2 8 C冷藏 盐水不可重复杀菌超过二次以上 121 C 15分钟 盐水及工具最好每隔二至三日杀菌一次比浊测浓度 试管保持透明度 从冷藏取出试卡 要先放在室温一段 活菌浓度准确 尽量缩短活菌停留在盐水的时间时间 直到温度平衡才将包装拆开 填号码时要清晰 不要填出界限充填 吸管要弄紧 吸管接触样品部分尽量不要触及其他东西 防止污染 查看样本是否已经充填封口 封口后 查看各个小池内是否有气泡 检查所有要填在试卡上的资料是否完整放入培养箱 读数箱内 放入前 查看培养 读数箱是否正在工作之中 将试卡放入最快被读数的架子内 箱门不要开启太久 以免箱内之温度降低培养箱后的风扇及下面之隔尘网需经常清理以防影响其散温效果 使读数箱温度过高 革兰氏阴性杆菌鉴定 氧化酶 氧化酶 GNI 鉴定卡鉴定不了 GNI 卡预期应用 革兰氏阴性杆菌鉴定 肠杆菌科Enterobacteriaceae 非发酵革兰氏阴性杆菌鉴定氧化酶阳性 假单胞菌属Pseudomonas 发酵革兰氏阴性杆菌鉴定氧化酶阳性 弧菌科Vibrionaceae GNI 试剂卡说明 资料分析 GNI 卡放入读数器 孵育器后 在2 12小时可产生最后鉴定报告 在报告上提供每一生化反应结果 并列出二个最有可能的鉴定结果以及与之相应的标准化百分概率 在某些情况下系统不能正常地作出最后鉴定 这时在报告上会打印出一条解释或说明这一情况的信息 在GNI 卡中每一小时就测得一次读数并储存在VITEK计算机中直到最后报告产生 每一孔的百分变化值与其相应的阈值相比较 等于高于阈值为阳性反应 反之 低于阈值 则为阴性反应 到下一次读数后百分变化值再一次进行计算 并与阈值相比较 对于脱羧酶孔试验结果必须将测定孔变化百分率减去阴性对照孔变化百分率后才能确定 如果待测菌是一个不发酵葡萄的革兰氏阴性杆菌 乳糖反应孔要与两个临界值相比较 较低值用于确定1 乳糖反应 LAC 较高值用于确定10 乳糖反应 TLA 氧化酶反应作为一个独立试验孔 GNI 试剂卡说明 阳性 阴性反应确定 确定细菌最后鉴定可能在2 8h后 葡萄糖发酵菌 或4 12h后 葡萄糖不发酵菌 作出 不管怎样 如果葡萄糖孔在8h后变为阳性 均即可作出鉴定 GNI 试剂卡说明 确定细菌鉴定 GNI 试剂卡说明 确定细菌鉴定 有些葡萄糖发酵菌要在6h后才能作出鉴定 这些菌是 嗜水气单胞 豚鼠气单胞 维罗纳气单胞温和生物变种 克吕沃尔氏菌属 美人鱼发光杆菌 痢疾志贺氏菌 解藻朊酸弧菌 河流弧菌 创伤弧菌 小肠结肠炎耶尔森氏菌 弗氏耶尔森氏菌 克氏耶尔森氏菌和中间耶尔森氏菌 有些葡萄糖非发酵菌要在12h后才能作出鉴定 这些菌是 推测为鲁氏 琼氏不动杆菌 木糖氧化产碱杆菌木糖氧化亚种 支气管炎博德氏菌 鼻疽伯克霍尔德氏菌 假鼻疽伯克霍尔德氏菌 产吲哚黄杆菌 吲哚 泡囊短波单胞菌 吲哚 脑膜脓毒性金黄杆菌 吲哚 气味黄杆菌 非发酵革兰氏阴性杆菌 不分解糖的和分解糖的 人苍白杆菌 门多萨假单胞菌 施氏假单胞菌 多食鞘氨醇杆菌和解藻朊酸弧菌 注意 有些解藻朊酸弧菌的菌株在GNI 卡中不发酵葡萄糖 GNI 试剂卡说明 确定细菌鉴定 GNI 试剂卡说明 确定细菌鉴定 一旦首选细菌通过相似筛选 标准化百分概率需经检查是否大于或等于90 如果小于90 卡片应继续培养和鉴定 只有当首选细菌既通过相似值筛选 也通过了标准百分概率的检查 最后鉴定报告才可能产生 如果首选菌相似绝对值仍小于相似筛选值 则在报告单上会出现 unidentifiedorganism 不能鉴定的细菌 当首选菌的绝对相似值通过筛选 首选和次选菌菌名以及相应的标准化概率就会打印出来 GNI 试剂卡说明 特殊信息 几种典型的特殊信息可能会出现在GNI 卡的最后鉴定报告单上 这些特殊信息解释为什么鉴定不成功 或阐述合格鉴定的标准 GNI 试剂卡说明 特殊信息 由信息代替一个鉴定结果 包括下面二条 1 Non viableorganism 没有活的细菌 在GNI 卡中全部生化试验是阴性 可按如下步骤从卡第三孔中 3 吸出样本转种在血液琼脂平皿检查细菌的活性 a 异丙酵或70 酒清消毒卡片复盖膜 并使其自然干燥 b 用无菌加样头安装在加样器上 或Im1无菌注射器 穿过膜吸出0 1 0 2ml样品 c 样品加于血琼脂上划线 置35 37 24小时培养 GNI 试剂卡说明 特殊信息 2 UnidentifiedOrganism 不能鉴定的细菌 在GNI 卡中试验结果不能充分相似数据库中任何一个种或属 因此不能得到最后鉴定结果 在以下几种情况能产生这一信息 a 太多的阳性结果 通常出现在接种物是混合菌株或在试验孔中有气泡 可从卡片第3孔吸出样品于5 绵羊血液琼脂平皿或其他合适的培养基 b 太少阳性结果 这常常由于所配制菌悬液浓度低于接种所要求的浓度 不在VITEK比浊计的适当色区内 或由于培养物过于陈旧菌龄超过24小时而使降低或失去代谢活力 c 待检菌是罕见特殊生物型或种 不包括在现有数据库中 GNI 试剂卡说明 限定信息 GoodConfidence MarginalSeparation 好的可信性但难于区分 生化反应结果同时相似于数据库中两个菌 并且产生可接受的绝对相似值 但二者间难于区分 要外加一些试验进一步确定其最后鉴定 技术手册GNI 表4 Questionable可疑的生物型 Biopattern GNI 卡的生化试验结果不典型 勉强相似于数据库中两个种或属 分离鉴定结果可能是GNI 鉴定报告上未列出的第三种菌 taxon GNI 试剂卡说明 限定信息 SerologyConfirmationRequired 需要用血清学方法证实 生化鉴定结果需要血清学方法确认 当GNI 卡鉴定报告的首选菌 或次选菌概率百分值大于10 是下列细菌时 在最终报告中会出现这一信息 亚利桑那沙门氏菌 Salmonellaaerizonae 沙门氏菌某种 Salmonellaspecies 伤寒沙门氏菌 Salmonellatyphi 痢疾志贺氏菌 Shigelladysensteriae 宋内氏痢疾杆菌 Shigellasonnei 志贺氏菌属某种 Shigellaspecies 霍乱弧菌 Vibriocholerae GNI 试剂卡说明 限定信息 Confirmwith6 5 NaCl 6 5 NaCl证实试验 当GNI 卡中最后鉴定报告首选菌是河流弧菌 或次选菌标准化百分概率大于10 时 报告上会出现这条信息 某些气单胞菌属的菌种会被误鉴定为河流弧菌肯定的鉴别试验是用6 5 NaCl生长 河流弧菌6 5 NaCl生长阳性 而气单胞菌6 5 NaCl生长阴性 GNI 试剂卡说明 补充信息 在技术手册GNI 卡片资料的表4中 列出了出现GoodConfidence MarginalSeparation信息该部分中需要进行外加试验的名称和相应的结果 表中的数字为各菌种该生化试验的阳性百分率 GNI 试剂卡说明 补充信息 出现下列信息需参阅技术手册 按照手册提供的补充试验将它们区分开 Enterobactercloacae motility asburiae motility KlebsiellaPneumoniae indole osytoca indole Proteusvulgaris indole penneri indole Chryseobacteriumindologenes indole Brevundimonasvesicularis indole GNI 试剂卡说明 补充信息 GNI 鉴定报告中偶尔会出现如下的带有编号的注释 共18项 Note1Aeromonashydrophila caviae出现这些信息时 请参阅技术手册 如何处理GNI鉴定报告中的 UnidentifiedOrganism 什么情况下系统会打印出 unidentifiedorganism 造成 unidentifiedorganism 的原因细菌分类原理表现形式和处理方式GNI卡所能鉴定的主要属种双岐检索表GNI卡双岐检索表使用方法 什么情况下系统会打印出 unidentifiedorganism VITEK系统分类原理是采用数值分类法 其 相似性 即当待检细菌在鉴定卡上的反应结果所得出和生物数码与数据库内现存已知的资料无一相似的时候 系统就会打印出 unidentifiedorganism 造成 unidentifiedorganism 的原因 待检细菌不是单一菌株 反应卡生化小孔有气泡严重干扰比色 菌液浓度太淡或菌令太老 菌悬液不均匀 可能某些生化反应孔的阈值过高或过低 某些菌株在现有的30项生化试验用数值分类不能成功 罕见生物新种或不典型菌株 数据库缺乏资料 细菌分类原理 目前广泛采用的细菌分类方法有二种 即传统分类法和数值分类法 传统分类法是按生物的共性和特性进行分门别类 该法的基本原理是将生物的基本性质分为主要的和次要的 然后按主次顺序一级一级地分下去直到最小区分 双岐检索图表就是根据这一原理制成的 由于采用偏重性鉴定原则 因此在传统分类时所需的生化试验相对较少 但各项试验的鉴别力强 数值分类法以 等重要原则 为理论基础 认为细菌的基本特征要同等对待 全面分析 不分主次地做总体比较 进而判断各种间的亲远程度 应用数值分类时为了充分反映出细菌的基本特征 要研究多方面的生物学性质 一般需选择100 200项生理生化指标 逐一进行比较才有分类学意义 细菌分类原理 VITEK系统采用数值分类原理 选用30项生化试验 所以在某些情况下不能得到分类结果是可以理解的 在排除一切操作因素以外 在原有生化特征的基础上 根据传统分类原则选择主要生化特征进行传统分类是可行的 造成 unidentifiedorganism 的表现形式和处理方式 鉴定卡生化反应模式呈现太多的阳性反应或不规则的反应模式 这种情况常常由于待检菌株不纯或有严重气泡而造成 从第三孔生长对照中吸出菌悬液接种于血琼脂平皿上 分区划线分离出单个菌落后 待第二天再作鉴定 当气泡不严重时 但菌株是单一的情况下可采用目测的方法判断反应结果 然后根据TechnicalBulletins中生化鉴定表得出最后鉴定结果 造成 unidentifiedorganism 的表现形式和处理方式 鉴定卡内30项生化反应呈现太少的阳性结果 菌悬液太淡或菌令太老是造成这种状况的基本原因 遇此情况 首先从生长对照孔吸出菌悬液分离在血琼脂或中国兰培养基上 35 16 24小时再配制合适菌悬液重作鉴定 对葡萄糖氧化的或不分解的G阴性杆菌应配制2个麦氏单位菌悬液 造成 unidentifiedorganism 的表现形式和处理方式 菌悬液不均匀 常发生于待检菌为不易乳化的粗糙型细菌 对于这种类型细菌可配制3个麦氏单位菌悬液 然后低速离心1 2分钟1000转 分 然后取上清液比浊调节到所需的浓度 造成 unidentifiedorganism 的表现形式和处理方式 待检菌菌落形态特殊 涂片染色反应不定 在保证菌株单一 操作合格的前提下应考虑是一种新的生物型或一种不典型菌株 取新鲜分离菌落 常规手段加做必要生化试验用传统分类法作出分类 造成 unidentifiedorganism 的表现形式和处理方式 某些菌株反应模式非常典型的同某一分类单位相似 但是 系统仍会在报告中打出 unidentifiedorganism 遇此情况可不必增加任何生化试验 用传统分类法 参照双岐检索表作出分类 造成 unidentifiedorganism 的表现形式和处理方式 当同一种重复多次由于相同的某几项生化反应不符而导致 unidentifiedorganism 应考虑这几项生化试验的值是否偏高或偏低现象 应立即打印出raw和rpcts资料进行分析并提供给厂家作为改阈值的依据 GNI卡所能鉴定的主要属种双岐检索表 表I 氧化酶 葡萄糖发酵的革兰氏阴性杆菌双岐检索表 此表主要用于肠杆菌科的细菌 表II 氧化酶 葡萄糖发酵的革兰氏阴性杆菌双岐检索表 此表主要用于弧菌科各属细菌鉴定 表III 氧化酶 或 葡萄糖氧化或不分解革兰氏阴性杆菌双岐检索表 此表主要用于非发酵的革兰氏阴性杆菌的鉴定 GNI卡双岐检索表使用方法 首先从反应模式中OXI 氧化酶 OFG及GLU 葡萄糖O F 三孔反应确定应查哪一双岐检索表 根据原有生化反应表中找出检索表中箭头标出的生化反应 并按照符合的路线继续往下查阅直到分离最小区分单位 遇到同时用二项生化反应来鉴别的地方 如有一项不符合 可暂以一项为依据再往下进行 多处不能相符的细菌应查阅 raw 资料并用常规法重复该试验后再作决定 避免计算机读数错误 GNI卡接种方法 培养基 TSA 5 羊血MacConkey琼脂 EMB 1 8mlVitek溶液 1 比浊 1MacF 仪器兰色范围内 2 接种GNI 鉴定卡3 记录 氧化酶试验 涂黑小圆圈 Vitek培养箱在2 8h内出结果 非发酵革兰氏阴性菌4 12h GNI及GNS卡的操作步骤 样本 样本作划线培养分纯 培养时间18 24hr 不要超过 以防老化分纯菌落 革兰氏染色实验确定是革兰氏阴性菌 氧化酶试验稀释比浊 菌落放入1 8ml盐水内均匀 调浓度1McFarland 蓝色 最好用电子比浊仪量度鉴定试验药敏试验 从菌液抽取50 l放入使馆内 如氧化酶试验阳性 将卡片上圆圈涂黑 加入1 8ml盐水均匀 氧化酶试验阴性 则不用涂黑 卡片如GNI卡片一样涂黑充填封口放入培养箱 读数箱内 放入最快被读数的架子上 GNI及GNS要放在同一个架子上 接种前 如果测定菌类似非发酵杆菌 即生长缓慢 通常氧化酶阳性成极小菌落或需要48h才能得到可用菌落的话则接种量应增加至2McF 接种后 在接种和培养之间的时间不要超过20分钟 GNI卡注意事项 非发酵革兰氏阴性芽孢杆菌不能产生足够的阳性结果 未定位杆菌 其鉴定可用非发酵菌鉴卡 NFC 或用不发酵葡萄糖的革兰氏阴性杆菌所用的其它常规的生化测定 对于不能鉴定的菌 可查阅技术手册中的双歧检索表 GNI卡结果解释 NFC卡预期应用 鉴定非发酵革兰氏阴性杆菌根据对某些化学底物作为唯一碳源的的同化作用对GNI鉴定卡的主要补充测定可鉴定没有合适鉴定卡的菌或用GNI 鉴定卡鉴定不了的菌专门用于工业微生物的新产品包括环境菌株的数据库不只适用于临床有补充实验资料 SRF NFC卡接种方法 培养基 TSA 5 羊血 1 8mlVitek溶液 1 比浊 1MacF 仪兰色范围内 2 接种NFC鉴定卡 Vitek培养箱在6 8h内出结果 革兰氏阴性 氧化酶阳性的杆菌 革兰氏阳性菌 非芽孢杆菌 鉴定GPI 革兰氏阳性球菌接触酶阳性 葡萄球菌接触酶阴性 链球菌李斯特氏菌属 Listeria 和棒状杆菌 Corynebacterium 一些种 GPI卡接种方法 培养基 TSA 5 羊血 1 8mlVitek溶液 1 比浊 0 5MacF 红色范围内 2 记录 接触酶 凝固酶 溶血3 接种GPI鉴定卡 Vitek培养箱在2 15h内出结果 GPI及GPS卡的操作步骤 样本 样本作划线培养分纯 培养时间18 24hr分纯菌落 革兰氏染色确定是革兰氏阳性菌 接触酶试验 接触酶阳性 作凝固酶试验 接触酶阴性 作溶血酶试验稀释比浊 挑纯菌落放入1 8ml盐水 调浓度0 5McFarland 红色 最好用电子比色器量度鉴定试验药敏试验 从菌液取200 l放入试管内 如接触酶试验是阳性 将卡片上圆圈涂黑 加入1 8ml盐水均匀 如凝固酶阳性或溶血酶阳性 将卡片上椭圆涂黑 卡片与GPI卡一样涂黑充填封口放入培养 读数箱内 放入最快被读数的架子上 GPI及GPS要放在同一个架子上 GPI卡注意事项 接种前 对特别粘的菌 极小菌落或需48h才能用的菌 接种量应调至1McF 鉴定卡正确操作的关键是 所有外加试验必需在接种鉴定卡之前纪录在卡片上 通过键盘输入三个外加试验中的任何一个时 必须在已接种的鉴定卡开始读数后二个小时内输入 金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus 猪葡萄球菌 S hyicus 和中间葡萄球菌 S intermedius 的凝固酶是阳性 凝固酶试验应利用葡萄球菌凝固酶检测试剂盒 编号73112 进行 在试剂质量可疑的情况下 推荐以兔血浆试剂 编号55181 55182 予以确认 接种后 鉴定卡的接种后到上机培养之间的时间不能超过20分钟 如果凝固酶记录不正确 则鉴定结果也不会正确 例溶血葡萄球菌就变成了金黄色葡萄球菌 如果微球菌接种于GPI鉴定卡上 将会给予不能鉴定或耳葡萄球菌的结果 个别细菌的反应 用原始数据 应以杆菌素2 杯对照生长 如果与PB1 杯相比 菌不生长 氧化酶阳性 革兰氏染色观察时为四联形态 则应证明为微球菌 GPI卡结果的解释 芽孢杆菌鉴定卡BAC的预期应用 革兰氏阳性杆菌的鉴定中温和高温芽孢菌专门对工业微生物新发展的产品 有补充实验资料 BAC卡接种方法 培养基 TSA 1 8mlVitek溶液 1 比浊 0 5MacF 红色范围内 2 记录嗜温试验 1 嗜高温 在55 的额外培养箱培养 涂黑圆圈 2 嗜中温 在VITEK中培养 无须涂黑圆圈 3 接种BAC鉴定卡 Vitek培养箱培养 在6 15h内出结果2 其它培养箱 在18 24h内出结果 革兰氏阳性杆菌 氧化酶阳性 接种前 在TSA琼脂上 需要二次转管保证均匀的菌悬液 如果不均匀 在调0 5McF之前 让悬液沉淀 将均匀悬液倒入另一管内 如果需要不密闭的培养器 则应将鉴定卡放在不透气 保湿的容器中 以避免鉴定卡在550C损失水份 接种后 在按种和培养之间的时间不要超过30分钟 BAC卡注意事项 酵