草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究.doc

草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究项目总结报 告主持完成单位：商丘市农林科学研究所二0一0年十二月目 录一、项目来源 1二、项目实施的意义和依据1（一）品种来源 1 1、丰香草莓1 2、特征特性13、脱毒丰香草莓2（二）项目实施的目的 3 1、总体目标32、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展3（三）项目实施的意义 31、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 4 2、生产无公害果品，促农民致富 43、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整 4（四）项目实施依据41、研究与实施的理论依据 42、“丰香草莓”组织培养技术路线53、草莓组织培养的优点 5三、丰香-草莓的组织培养技术研究 6（一）草莓-“丰香”脱毒技术研究 61、研究目的62、供试材料63、组织培养环境条件 64、材料的选择与处理 65、生长点的剥取76、诱导方法77、病毒的检测 88、无病毒原种的保存和繁殖8（二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究81、研究目的 82、试验材料 83、试验方法 94、验结果分析 95、结论与讨论 13（三）组培草莓驯苗基质的研究141、材料与方法142、试验结果分析 153、综合评述 164、结论 17（四）抗菌素减少组培草莓苗污染的研究 171、污染来源与防治措施 172、草莓组织培养过程中造成污染的原因173、试验方法204、结果分析21（五）草莓高产栽培试验研究211、温棚种植试验目的 212、参试品种 213、试验时间与地点 214、试验概况及田间管理 215、试验结果与分析 236、综合评定 257、结论 25四、脱毒草莓高产技术规程与规范 26（一）组织培养基本设施技术规程 261、实验室建立26 2、仪器与器材配备 263、化学药品、试剂购置 284、其他物品的配制 28（二）草莓组织培养技术操作规程与规范 281、培养条件282、培养基配制 293、无菌材料的获得 314、接种315、室内组织培养 326、瓶苗驯化与移栽33（三）脱毒草莓栽培技术规程与规范 341、组织培养瓶苗的栽培技术规程342、脱毒丰香草莓苗圃繁殖栽培技术规程 353、脱毒“丰香-草莓”的特征特性与栽培技术规程 364、脱毒草莓大棚无公害高产栽培技术规程395、脱毒草莓“丰香”大田高产栽培技术规程42五、脱毒草莓无公害高产技术的推广应用 44（一）发展脱毒丰香草莓的意义 441、发挥品种优势，保持种质资源 442、生产绿色果品，提高农民就业率 443、促进农民增收农业增效，利国利民 44（二）推广方法与措施 441、建立组织，联合攻关442、建立基地，示范带动453、宣传培训，普及推广45（三）组培红香椿一号示范推广概况 461、推广应用情况 462、示范种植情况46六、科学技术创新 48（一）、脱毒、快繁技术体系研究的创新 481、组织培养条件482、选材与处理 48 3、接种与 诱导培养 494、检测与继代增值培养 495、生根培养 496、炼苗与移栽 49（二）、运用抗菌素降低污染研究的创新50（三）、扦插基质的研究创新51（四）、脱毒草莓高产机制研究创新52（五）、栽培技术体系研究创新 53（六）、品种示范、推广体系研究创新 54七、经济效益和社会效益分析 56（一）经济效益分析 561、脱毒草莓温棚 562、脱毒草莓大田 573、脱毒草莓每亩新增效益 57（二）社会效益 581、生态效益582、社会效益58八、脱毒草莓的推广前景 60草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究一、项目来源“草莓脱毒快繁与应用技术研究”是20042008年商丘市农林科学研究所自选项目，2007年申报商丘市科技攻关计划项目，项目编号为NO:2008 。由商丘市农林科学研究所、商丘市农业局技术推广站等单位协作联合实施，建立了科技攻关协作组（项目组），下设两个课题组，一是技术开发研究执行组，负责科研攻关，制定了丰香草莓脱毒快繁技术与操作规程；二是技术推广应用执行组，负责无公害草莓的推广应用。经过几年的实施，完成了项目计划任务。最近两年着力进行了脱毒草莓无公害高产栽培技术的推广。本项目的研究以商丘市梁园区双八镇代庄草莓基地为基础，以商丘市农科所组培室为依托，并联合有关部门和单位，进行联合攻关，实施产业化生产，初步形成了当地的特色产业。二、项目实施的意义和依据（一）品种来源1. 丰香-草莓丰香-草莓原产于日本，由绯美纯香杂交选育而成。1985年引进我国。目前在我国种植面积很广，已成为我国设施主栽品种之一。“丰香-草莓”它味美色艳，品质优、营养用价值高 ，食用口感好。特别是通过现代科学技术进行植物脱毒培养后，它生长整齐一致，汁多，香味浓郁纯正，味甜可口，为餐桌上的美味佳肴。再加上配套的栽培技术，深受果农欢迎。鲜果及加工制品畅销国内外，草莓已成为农户致富的短、平、快作物，尤其是反季节栽培，提早上市1-2个月，产量在3000/667左右。对丰富城乡人民的菜篮子，改善人民的膳食结构，促进农村经济发展，引导农民奔小康具有重大意义。2、 特征特性草莓是多年生草本果树，植株矮小。植株高25-35通过匍匐茎进行繁殖再生，化和果实着生在新茎顶芽所萌生的花茎上。2.1产量与品质 脱毒“丰香-草莓” 果肉细，白色，髓心实，果汁多，酸甜适中，香味浓。果实含可溶性固形物9-11%，总糖量8.7%，总酸0.89%，每100果肉含维生素C68.8，果皮韧性强，最大果重55,平均果重16 ，耐储运。花芽分化早，温室栽培中能连续发生花序，采收期长达3个月。冷温需求量50-70冷温单位，为早熟品种，适合温室大棚等保护地栽培种植，也可以露地种植。平均单株产量136.5 ，商品果率77.5%。 脱毒快繁后，冬季温室栽培产量比对照增产35.5%。比一般产量提高47.%左右，产值提高15%以上。2.2性状与特点 “丰香-草莓”， 该品种生长势强，株态较开展。叶大、圆形、叶绿色。花为两性花，每株有花序3个，每序9-10朵花，低于或平于叶面。果实圆锥形，美观，果面平整无棱，鲜红色，有光泽。作为草本植物的草莓，既是一种蔬菜，又是一种水果，果实汁多味香、行美色艳、酸甜可口。它营养丰富，含有多种维生素和17种氨基酸，维生素C 的含量比柑橘高3倍，同时还含有磷、钙、镁、铁、锌等矿物质，属于高档营养水果。2.3生育期 草莓-丰香开花期4月上旬，果实成熟始期5月上旬，摘收末期6月初，匍匐茎发生期4月初。3、脱毒丰香草莓3.1特征特性长势强,植株高(比丰香高25%以上),抽生匍匍茎能力强（可同时抽生4-5个）, 叶片比丰香小厚.与丰香不同的是,属多级花序品种,属多级花序品种,可连续结果6-7个月，无间歇性结果。温室栽植产量达 4000kg/667以上,比原丰香增产30%-50%，甚至更高。一级花序的果平均重4Og,最大果重110g。果实成熟比丰香早5-10d特抗白粉病,与丰香隔一栽一,丰香感病,而该品种不感病。果实品质同于丰香果实刷贮运性能超过现有的日本品种。 脱毒丰香草莓露地栽培的亩产值为0.5-1.5万元不等，而大棚草莓效益较好，亩产值高达1.0-2.3万元。3.2注意事项3.2.1脱毒后的丰香草莓苗，在生产可连续种植2-3年增产幅度大，但随着种植时间的延长，病毒积累而影响产量。3.2.2脱毒后的草莓苗不要与其他品种混合种植要设置保护区，严防病毒的传回，无保护措施的要及时防治蚜虫2-3次。3.2.3无病毒原种可利用隔离法进行保存。无病毒原种的繁殖，要建立一套严格的良种繁育制度，生产场所做好土壤消毒和防昆虫工作，保持无病毒原种材料质量。（二）项目实施的目的1、总体目标项目实施的总体目标是：对丰香草莓进行脱毒快繁技术研究，并快速推广应用，提高草莓的高产性能，发挥草莓的增产潜力，让农民取得更大的经济效益，有效地推动草莓种植业在我区的迅速发展，在一定程度上解决农村富余劳动力就业问题。2、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展草莓是果、菜兼用，酸甜可口，果质佳，营养和保健价值高，植株矮小，生长周期短、适应性强、栽培管理易、产量高、见效快和经济价值高等特点。草莓既可大规模集约化生产，也可小面积庭院栽培，还可与其他作物间作、套种和轮作，是较佳的物种，增加复种指数以及改良土壤结构，其他作物无法比拟。为加快草莓的迅速发展，我们研究出一套完备的无性快速繁殖技术体系，为生产提供优质种苗及配套新技术。在快繁之前，我们首先对草莓快繁所需培养基进行认真筛选，选出适于丰香草莓生根、长叶的最佳培养基及配套技术，快速繁殖出粗壮幼苗，然后加以示范推广，以最快的速度投入市场。首先是筛选出适宜丰香草莓无性繁殖的最佳培养基，即基本培养基、有机物、无机物和微量元素的配置比例，以及植物生长调节剂含量的多少以及所需的浓度等。其次，是探索出丰香草莓在无性繁殖过程中所需要的最佳外界环境条件如光照、温度等。最后，通过建立完善的技术推广体系迅速扩大新技术的应用面积，增加农民收入，促进农村经济发展。（三）项目实施的意义作为多年生草本的草莓，过去常规的栽培方法是，用分枝进行繁殖，育苗率较低，发展迟缓。以种子繁育幼苗。利用种子繁殖，后代出现严重的分离现象，其外部形状品质营养含量以及生长速度等都存在着不一致性。草莓在我国的种植面积居世界之首。但产量和总体生产水平与发达国家相比还存在着一定差距，表现为：无病毒苗繁殖体系建立不完善，农民自繁自育，反复留种，致使种苗退化，病害滋生蔓延。生产和流通渠道缺乏组织管理，产业化水平低，新技术、新品种推广应用慢，保鲜滞后，商品果率低。品种杂乱，盲目引种，给农户造成损失，草莓研究和育种工作跟不上生产发展。平均产量不高，农药残留超标，栽培方式落后，缺乏配套设施，草莓深加工发展慢。总之我国与发达国家的差距是反映在产量和品质上。要改变这种遗传现状，只有采用无性植物营养体进行组织培养脱毒与快速繁殖，才能保持原品种全部的遗传性状，实现该品种种质的一致性。所以，对“丰香”采取组织培养脱毒与快繁新技术，是解决生产和市场对其大量需求的一个有效途径。同时，也是生态农业的必经之路。1、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 随着经济社会的发展，人们的饮食结构由温饱型向营养型、保健型过渡，由数量型向质量型转变，对果、蔬质量安全的需求日益提高。果蔬质量安全越来越受到全社会的高度重视，目前已成为政府重视、社会关注和全球瞩目的热点，大力发展无公害果品，既是广大消费者的翘首期盼，更是经济社会发展的必然要求。2、生产无公害果品，促农民致富随着社会的发展和人民生活水平的提高，食品营养价值越来越被人民所重视，特别是无公害食品和绿色食品，越来越受人们的青睐。作为草本植物的草莓既是一种蔬菜，又是一种优质水果。作为蔬菜，细嫩肉厚，新鲜可口，已成为大众餐桌上的美味佳肴。作为优质水果，它品质优良，营养价值高，口感好，香味浓郁纯正，需求量越来越多，它可用于庭院及田间种植，不仅生长速度快，而且品质好。所以，采用组织培养快繁技术，开展草莓的产业化生产，依据其生理特征特性，进行反季节栽培，进行反季节（冬季）无公害栽培种植，不但提高草莓的高产性能，发挥草莓的增产潜力，产生较大的的经济效益，而且，填补了冬季无鲜果的空白，此时正是病虫害发生最少之时，省工省时，降低成本，同上也提高了农民的就业率，增添了致富路。3、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整开展草莓的组培脱毒快繁技术研究，进一步推广应用，发挥其增产潜力及增收效益。也适应我国实施农业和农村经济结构战略性调整，提高果蔬产品国内外市场竞争力必须着力解决的关键问题。对促进了我区产业结构的调整、优化、及产品的更新换代，对农业的发展具有很大作用。（四）项目实施依据1、研究与实施的理论依据该项目是以草莓的组织培养、脱毒、快繁与应用为主题内容，进行的一种科学技术性研究。其理论依据：是利用植物体细胞及组织的全能性。植物体的每个活细胞具有遗传上的全能性,都具有发育为完整植株的潜能，叫做植物细胞全能性。其原理是生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因 。是指利用植物的任何器官、组织或细胞，在人预知（有一定的营养物质、激素、和其他）的控制条件下，放在含有植物营养物质和生长调节物质等组成的培养基（含营养物质和植物生长调节剂琼脂，灭菌凝固）中，使其生长、分化，形成一个完整植株的过程。它不受植物体其他部分干扰的情况下，研究被培养部分的生长和分化规律。利用茎尖脱去植物自身的病毒。病毒是一种纯寄生的无胞型微生物，它寄生在动植物体内引发病害。茎尖组织是细胞分裂活动的中心，根据病毒在植物体内分布不均匀的理论，植物茎尖分生组织（生长点）一般不带病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的茎尖分生组织（带1-2个叶原基）进行培养，即可得到无病毒苗。无病毒苗具有生长旺盛一致，在同样外界条件下长势好、产量高、品质优等优点。2、“丰香草莓”组织培养技术路线通过大量试验研究，筛选出“丰香草莓”组织培养与快繁技术路线：取材杀菌消毒外植体接种分化培养病毒检测继代与增殖培养生根培养炼苗与移栽苗圃育苗大田生产进入市场。3、草莓组织培养与脱毒的优点3.1草莓组织培养优点草莓的组织培养是在预知的控制条件下，放在含有植物营养物质和生长调节物质的培养基中，使其生长、分化，形成完整植株的过程培养。其优点：其一是人为的控制生长条件，不受自然条件的影响；其二是是不受草莓体其他部分干扰的情况下，研究被培养的茎尖、茎段生长和分化规律。其三是取材量小，培养材料经济；其四是生长周期短，繁殖系数大；其五是管理方便，可采用自动化生产；其六是脱去病毒，实现快速繁殖，保持种质资源；其七是产量高，品质好，耐储运。为草莓的进一步研究提供了科技支撑。3.2脱毒草莓的优点脱毒的优点：增产效果明显20%-50%，长势旺盛，结果增多，单果重增加，着果力增强，商品果率提高15%-20%品质好，含糖量高，耐储运，经济效益可观，按平均增产幅度20%，亩增收鲜果600-800斤，每亩增收3500-5500元。丰香草莓的生长特征特性统计表 株高 匍匐茎 叶柄 产量 果实数 含糖量 单果重 （cm） (个) （cm） (g) (个) (%) （g）无病毒 31.20 6.1 22.6 354 178 7.8 28.9带病毒 23.32 3.6 18.2 201 136 7.0 19.3三、丰香-草莓的组织培养技术研究（一）草莓-“丰香”脱毒技术研究1、研究目的依照植物体细胞及组织的全能性为论依据。采用草莓茎尖剥离方法，以草莓生长、发育所需要的营养物质、生长调节物质以及环境条件等，通过室内培养基获得无毒苗，加速繁殖应用与生产。2、供试材料供试材料为草莓-丰香。该品种早熟、高产、耐寒性强。果实圆锥形，红色有光泽，果肉细嫩白色髓心实，果汁多，香味浓郁，酸甜适中，口感好，果实含可溶性固形物9-11%，糖8.7%，总酸0.89%，每100g果肉含VC68.8 mg。果皮韧性强，耐储运。来源于我单位试验苗圃田中，采集时苗龄40d左右，展开叶3-5片，带生长点的茎尖部。3、组织培养环境条件 基本培养基为MS；即诱导与分化培养基MS+6-BA0.5-1.0mg/L +2-4D0.05-0.2mgL+GA30.5-1.5 mgL+椰汁200 mgL； 继代与增殖培养基MS+6-BA1.5-2.5mg/L +IBA0.5-1.0mg/L+GA31.0-1.5mg/L;生根培养基1/2MS+6-BA0.1-0.5mg/L+ IAA0.5-1.0mg/L或12MS（15-20g/L蔗糖）附加30g/L蔗糖，6g/L琼脂，PH5.6-5.8。分装于三角瓶中，封口后，高压121灭菌20分钟。，待用。培养温度242，湿度65-70，光照强度1800-2200LX，光照时间12-14h/d。4、材料的选择与处理 选择正在生长中的健壮，无病虫，具有本品种特征特性的草莓-丰香植株，剪取带有茎尖的茎段，1.5-2去掉可见叶，在流动的自来水中冲洗20-30 mis，粘干水分。在无菌室内的超净工作台上，用75酒精处理20S，0.1升汞和1-2滴土温灭菌8-12min后，用无菌水冲洗5-7次，待用。5、生长点的剥取把灭菌好的外植体，在无菌室内的超净工作台上，借用80-100倍解剖镜下剥离茎尖0.1-0.3，带1-2个叶原基，快速接种到诱导和分化培养基(1)中封口，同时做好标记（品种、接种时间、接种次数，直接种株号），以便观察与记载。迅速转到培养室内进行培养。6、培养方法6.1诱芽与化培养 茎尖分生组织的培养用小三角瓶或试管较好。接种到诱导培养基中的生长点，在无菌培养过程中，长出绿芽后转移到生芽培养基MS+6-BA1.5-2.5mg/L +IBA0.5-1.0mg/L+GA31.0-1.5mg/L中继续培养，生长点经30-40d后有芽萌动，50-60d即可分化出丛生芽，待芽长至3-5cm高，这时可将丛生芽分块或单芽转入培养基中进行增殖培养。茎尖培养是脱除草莓病毒的技术关键，茎尖越小对培养基的要求越高，成功率越低。在剥取生长点时随着生长点的加大，即叶原基的增多成活率增高，而脱毒率下降，反之则脱毒率提高，如表1所示。表1 不同叶原基对茎尖培养成苗率的影响 单位个茎尖长度 叶原基数 接种茎尖数成苗率% 脱毒率（%）0.11 1 40 16 1000.25 2 40 67 920.31 3 40 71 860.46 3 40 86 510.66 4 40 100 0.66 4 40 100 6.2继代与增值培养当草莓瓶苗展开叶3-5片，苗高2-3，将剪成带有0.5-1.0的茎段转接到中继续进行增殖培养，待小苗增至20-30株时，可进行病毒检测，针对同一株的植株必须及时进行统一编号，除以防感染外还利于减少病检样本。经鉴定后，不符合标准的全部淘汰，无毒苗在培养基中加速繁殖，3-5d有愈伤组织形成，10-15d有丛芽长出，愈伤组织随之减少，丛芽形成，这是一部分小的丛芽继续继续增殖培养，扩大繁殖基数，另一方面选择生长健壮的植株转入培养基进行生根培养，准备移栽种植。继代周期为25-28d。循环往复，增殖倍数8倍，有的甚至高达15倍以上。增值系数可达1107。7、病毒的检测7.1目测法：脱毒茎尖苗和在形态长势上差异明显，脱毒茎尖苗生长快，叶色浓，植株健壮；带毒茎尖苗长势弱叶色淡，叶片上有花叶明脉或褪绿斑。经目测，把带毒症状明显的茎尖苗除去。7.2血清学检测法：用待测的茎尖苗叶片制样，拥挤中病毒的抗血清做琼脂双扩散（SDS）酶联免疫（ELISA）或斑点酶联免疫（DOT-ELISA）检测，阳性反应为带病毒苗。7.2电镜观测法：将待测茎尖苗汁液滴在覆膜铜网上制做样本，在电镜下观测到病毒质粒的为带毒苗。去除检测出的带毒苗和改变了品种特征性状变劣的茎尖苗，剩余的即为脱毒苗，快繁后可直接应用于生产。8、无毒原种苗的保存与繁殖8.1无病毒原种的保存：无病毒原种可利用隔离法，进行保存。以使用80-100目的尼龙防虫网罩为宜，防止昆虫类介体进入。8.2无病毒原种的繁殖：无病毒原种的繁殖，要建立一套严格的良种繁育制度，以三级育苗为宜，生产场所做好土壤消毒和防昆虫工作，保持无病毒原种材料质量。（二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究1、研究目的通过该试验进行不同培养基间对草莓“丰香”生长发育的影响研究，了解不同培养基之间以及同一培养基内的各种有机物、无机物、微量元素的配置比例和植物生长调节剂含量的多少，所需要的浓度的高低，还有对生长所需要的光照时间、光照强度，温度、湿度等环境条件，从中筛选出适宜草莓“丰香”生根、长芽、生叶的培养基，为下为下一步的快繁工作打下良好的基础。2 、试验材料草莓“丰香”的茎尖、茎蔓采自商丘市农科所草莓试验地。2.1试验基质与培养条件 本培养基为MS培养基，生长调节剂有：6-BA（6-苄基腺嘌呤IAA吲哚乙酸IBA吲哚丁酸赤霉素GA3）4种植物激素，浓度分别是：0.1、0.5和1.0，各个培养基中附加蔗糖30mgL琼脂6-8mgLPH5.6-5.8。2.材料的取得与处理 从正在生长的季节中选择生长健壮，无病虫害，长势强具有本品种特征特性的植株，剪取当年生匍匐蔓顶端和茎尖，去掉可见叶，用漂白粉漂洗10-15min，在流动的自来水中冲洗20-30min，洁干水分待用。在无菌室内的超净工作台上用75%酒精处理30S，0.1%升汞灭菌10min后，用无菌水冲洗5-7次，待用。然后剪成0.5-1.0cm长含有1-2个腋芽的茎段，快速接种到上述各培养基中。培养温度2，湿度70%-75%，光照时间14h/d，光照强度1800-2000LX。每3日记载一次，共记载0天。3、试验方法 用“草莓-丰香”的外植体运用正交试验，筛选出最佳增殖、壮苗及生根的培养基和适宜配比。试验设计：四种植物激素，每种激素设有3个浓度，每个培养基分装20瓶，高压灭菌后待用。采用四因子三水平正交设计法，列L9表4所示：4.试验结果分析表4 （L9）筛选培养基试验设计（单位：mg/L）序号 6-BA （A） IAA (B) IBA(C) GA3(D)0.10.10.10.50.50.51.01.01.00.10.51.00.10.51.00.10.51.00.10.51.00.51.00.11.00.10.50.10.51.00.51.00.10.51.00.1每个培养基有20个重复，记载结果列表4，表中的各数量都是各培养基的平均数植。4.1不同培养基对生长发育的影响 不同培养基对茎叶生长的影响 由表5可看出，外植体通过40天的培育后，不论是哪个培养基主茎叶片都在增加。以培养基上升最为明显，培养基的茎叶与相近，其余的增长较慢。在所有的培养基中主茎叶片数都在不断上升，培养基叶片数最多为7.5片，其次是培养基、 为7-6片，其它培养基增叶较慢为4片叶。表5 生长期记载汇总培养基序号 主茎叶片 侧芽数量 根 数 主茎株高 生长势 （个） （个） （条） （cm）4.17.06.54.35.27.57.37.05.12.24.03.54.50.08.06.05.53.51.00.05.02.03.00.01.50.54.02.22.63.03.12.53.03.22.63.0+不同培养基对幼芽的影响 从表5还可得知，在培养期间有的形成快为丛生，有的生芽较慢或无芽形成。在所有的培养基中，丛生芽形成多而快的是培养基为8个， 是5.5-6个，培养基只有主茎则芽为0，其他培养基诱芽较慢为2.2-4.5个。不同培养基对根系形成的影响 从试验结果中看出，各个培养基间对根的形成表现较为突出，以培养基表现最好，次之，其它培养基除和以外均有根形成。在这9个培养基中，最佳有5条根形成，4条根形成，和无根系形成，其余的培养基根的形成是1-3条。不同培养基对主茎高度的影响 由表6可知，通过培养的草莓主茎高度都有增长，生长最快的培养基是和高度为3.0cm，其次是、培养基增长高度为3.0-3.2cm，其余的生长较慢2.2-2.9cm之间。表6 试验材料的生长发育性状统计主茎叶片 侧芽 生根 主茎高度417.06.54.35.27.57.57.05.12.2 AB4.0 AB3.5 AB4.5 AB0.0 B8.0 A6.0 AB5.5 AB3.5 AB1.00.05.02.03.00.01.50.54.0cddabcdabcdcddabABBAABABBABABAB2.22.63.03.12.53.22.92.63.2注：同列中小写字母表示显著差异(P0.05)，大写字母表示极显著水平(P0.01)。4.2各处理因子对生长发育的影响最佳因子组合对增殖和生根的影响试验设计：从极差表（R值）中直接看出，D因子R值最大，这表明GA3对增殖的影响最大，A因子6-BA次之，C因子IBAR值最小，说明对增殖的影响最小，也说明不同因子对草莓茎分化苗增值影响程度是不同的。同时从表6中还可以看出，B因子R值大于A因子小于D因子，而且B、C因子生长素的含量最高对生根的影响最大，A、D因子含量小对生根数的形成影响最小，也说明不同因子对草莓茎分化、苗生根数增加影响程度也是不同的。由表5正交设计方差分析所示，A、B、C、D因素对试验结果有极显著(P0.01)影响，即6-BA、NAA、IBA、ZT因子的用量或水平均能明显影响草莓分化苗根的形成和增殖。通过Duncan多重比较结果分析，在所选择的4个因子中，对芽增殖的影响为GA36-BAIAAIBA，对生根数的影响IAAIBAGA36-BA，且四者之间有明显差异，随A（6-BA因子水平的升高，A1、A2、A3明显高于A3、A2、A1，对分化丛生芽增殖效果越明显，而对生根数的形成呈下降趋势；随BIAA因子水平的升高，对芽增殖的影响呈下降趋势，而对生根数的增加B1、B2、B3明极差分析表因素ABCD13.0753.0253.126672.6583323.208333.091673.191673.6916733.641673.808333.516673.5750.56670.78330.3251.0333正交设计方差分析表（完全随机模型）变异来源平方和自由度F值均方显著水平A2.1066721.05333B4.5266722.26333C0.78520.3925D7.6866723.84333误差15.10581.888120.377950.97223显高于B3、B2、B1，呈上升趋势；随CIBA因子水平的升高，对生根数的增加而表现为C3、C1、C2，C3的作用明显高于C1、C2；随DGA3因子水平的升高，对芽增殖呈D2、D3、D1趋势，D2的作用明显高于D3、D1。这充分说明不同培养基之间及激素含量水平对芽增殖和对生根数增加的影响效果是不同的。在MS+6-1.0mg/L+IAA0.1mg/L+IBA1.0mg/L+GA3 0.1mg/L培养基中，细胞分裂素6-BA含量最高1.0 mg/L，GA3对增殖的影响最大的含量是0.1 mg/L，而生长素IAA的作用大于IBA，IAA的含量最小，而IBA的含量最高，但其作用力最低，相互作用使该培养基的茎分化苗增殖率高达100%，增殖倍数6以上，且芽匀而壮，可作为草莓的增殖培养基使用。在MS+6-BA0.1mg/L+IAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+GA30.2mg/L培养基中表现尤为突出，在B、C因子配比浓度上含量最高各为1.0mg/L，这说明IAA、IBA、对草莓分化苗根的形成的影响最大，对茎分化苗根的形成起着重要的作用，而GA3因子的作用虽然大于IAA、IBA但其含量为1.0时所对生根数的形成影响最小，也说明不同因子对草莓茎分化苗生根的影响程度亦不相同。培养基生根率高达100%，生根倍数5以上，且都是在茎基部发育的有效根系，栽植成活率高，是草莓生根培养的最佳培养基。4.3最佳培养基筛选的验证在筛选最佳因子组合培养基基础上，对茎分化苗增殖培养基和茎分化苗根的形成培养基又各配制20瓶，方法同上，其结果相同，增殖培养基不仅分化率高，而且集中形成的不定芽长势好，大小均匀一致，没有无效芽形成，可作为草莓的增殖培养基使用。对培养基生根数的进一步证实基本结果基本相同，苗生长旺盛。同时又进行了炼苗移栽试验，选择3-5条根，株高2-3 cm，展开叶3-5片的植株，揭开培养瓶的封口膜，炼苗5-7天，然后用自来水冲洗去苗基部的培养基，移栽到已灭过菌的腐殖质与碎炉渣以32的比例混合的基质中，前期适当遮阴并保持湿度在85%-95%，逐步降至70%，15天后去掉薄膜罩，定期喷洒40%多菌灵800倍液杀菌，5-7天一次，共计2-3次，该培养基的生根苗比其他培养基的生根苗成活率高出3%-5%，达95%左右。5、结论与讨论5.1 草莓只有采用脱毒快繁技术，才能保持原品种全部的遗传性。从该正交试验中筛选出了最佳生根培养基MS+6-BA0.1mg/L+IAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+GA31.0mg/L，根系发达，长势好，栽种易成活；培养基MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+IBA1.0 mg/L+GA30.1mg/L，主茎叶片数最多，没有无效芽，无根系形成，苗匀苗壮，适宜作为增殖培养基使用。但是在试验中株高2-3 cm，茎、叶之间节间较短，腋芽利用率低，在今后的工作中还需要进一步的完善和研究。 5.2 培养基()（MS+6-BA0.5mg/L+IAA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+ GA30.5mg/L）综合性状好，叶片数7.3片居第二位，侧芽8个居第一位，株高3cm居第一位，生长势强，可作为草莓-丰香的最佳增殖培养基。培养基（MS+6-BA0.1mg/L+NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L+ZT0.2mg/L）综合性状较好，生长势强，根系发达为6条居第一位，可作为草莓-丰香的最佳生根培养基。培养基（MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+IBA1.0mg/L+ZT0.1mg/L）生长快，长势强，叶片数7.5片居第一位，株高居第二位，可作为草莓-丰香的最佳壮苗培养基。5.3 综上表明：用正交实验是筛选草莓最佳培养基的好方法。既可用于植物快繁的研究中，同时探求出培养基中适宜的几种成分的用量，如生长素、细胞分裂素、糖和其它成分的用量。对培养物有切实可靠的指标便于观察和计算，比较容易进行定量化处理，如出苗数量、苗高度、生根数量、根长度、移栽成活率等，为下一步的草莓快繁工作打下了良好的基础。草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究项目组（三）组培草莓驯苗基质的研究研究目的：通过扦插基质比较试验，了解和观察脱毒苗在不同基质中的生长表现状况，找出脱毒“草莓丰香”苗在不同环境和不同条件下的成活率，找出既经济又适宜丰香草莓脱毒苗生长的扦插基质。1 材料与方法1.1 供试材料（1）腐殖质和草木灰（1：1）：沙壤土以1：1；（2）有机质：珍珠岩（蛭石）1：1：（3）沙壤土、碎炉渣（颗粒状0.3cm）和有机质1：1；（4）沙壤土（CK）1.2 试验目的通过扦插基质比较试验，了解和观察脱毒苗在不同基质中的生长表现状况，客观公正科学地鉴定脱毒“草莓丰香” 在不同环境和不同条件下的成活率，找出既经济又适宜丰香草莓脱毒苗生长的扦插基质，为大面积推广与发展提供理论依据。1.3 试验设计 试验采用完全随机区组设计：采用4种基质，3次重复，每重复50株，用6x7（cm）育苗钵每穴1株种植，在同等的栽培管理条件下进行。20天后以单株苗为统计单位。1.4 试验时间与地点该试验在商丘市农科所温棚内进行，时间为2005年4、5、6三个月，把室内培养瓶苗经7天炼苗后，进行各基质的扦插。1.5 技术管理炼苗前揭开培养瓶的封口膜，炼苗5-7d，然后小心取出，用自来水冲洗洗去苗基部的培养基，移栽到已灭过菌的各种基质中，前期适当遮阴并保持湿度在85-95%，逐步降至70%，定期喷洒40%多菌灵800倍液杀菌，7-10天-次，15天后生长加快。移栽前设隔离空间，用80目的防虫网，严防传毒昆虫进入；加塑料罩保水，10天后去掉，前5-7d适当遮阴并保持较高的湿度（85-90%），以后湿度65%左右，温度15-25，定期5d喷洒多菌灵800倍液杀菌3次。2 试验结果分析 表（一） 试验结果 单位： 株基质 平均4 5 6456456草木灰沙壤土有机质珍珠岩土炉渣有机质沙壤土（CK）35464731364746273144422934.045.645.029.031474828354543303045452932.045.645.329.033474429294646303042473230.645.045.730.332.245.445.330.0 表（二） 试验结果 单位： 株基质 平均 ck%平均 ck% 平均 ck%平均 ck%草木灰沙壤土 34.0 14.8 32.0 9.40 30.6 1.0 32.2 6.90有机质珍珠岩 45.6 35.6 45.6 36.5 45.0 33.0 45.4 34.0壤土炉渣有机质 45.0 36.0 45.3 36.0 45.5 34.5 45.3 33.8沙壤土（CK） 29.0 29.0 30.3 30.0 表（三） 试验结果 单位： 株（%）基 质 成活率 草木灰沙壤土 有机质珍珠岩 壤土炉渣有机质 （CK） 位次草木灰沙壤土 32.2 有机质 珍珠岩 45.4 29.1壤土炉渣有机质 45.3 28.9沙壤土（CK） 30.0 -0.740.9-2.2-51.3 -40.7 6.9 3 2.2 34.0 1 33.8 2-51.1 4表（四） 特征特性及生长状况表现 基质 叶色 新生根 新生芽 生长势 生长整齐度草木灰沙壤土有机质 珍珠岩壤土炉渣有机质沙壤土（CK）浅绿 绿深绿浅绿1.6 0.53.2 1.53.1 1.41.0 0.3+ +表（五） 方差分析 变异来源 平方和 自由度 均方 F值 P值区组间 643.7091 3 214.5697 234.076 0.0001处理间 7.3333 8 0.9167 总变异 651