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粗蛋白测定方法什么是粗蛋白， 粗蛋白跟蛋白质又有什么区别，如何测量饲料中粗蛋白的含量，粗蛋白的含量高是不是一定代表着蛋白质的含量高。我想，当你看到这个题目时，肯定会联想到这一连串的问题中的其中几个。那么接下来，我就来详细介绍下粗蛋白的概念、粗蛋白测量和其他关于饲料中粗蛋白含量的问题。/ U! p- $ Z/ O1 粗蛋白概念：+ I1 E$ Y / B0 j( e) d粗蛋白不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质。包括真蛋白质和含氮物(氨化物)。食物中粗蛋白含量以大豆最高,肉类次之。粗蛋白英文为crude protein。粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。由于一般蛋白质中含氮量约为16%，故在概略分析中，常用凯氏(Kjeldahl)法测出总氮量，再乘以系数6.25来求得。实际上，它是食品、饲料中含氮化合物的总称，既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸盐和氨等。此外，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同，如小麦和多数谷物的换算系数为5.80，水稻5.95，大豆5.7，多数食用豆和坚果5.3，牛奶6.38等。粗蛋白只是一个粗略的概念。$ f7 e) I: Q% X8 S# i l! j( H6 . D& S0 z+ Z( l% 粗蛋白含量：) 7 ? P. B) g5 j, P8 I 下面我介绍几种常见物质的粗蛋白含量，仅供大家参考。% u5 i: Y4 Y- E4 9 P薏苡仁 粗蛋白含量：13%-14%$ s$ A: c3 Fk9 B( N, m+ e& u棉粕 粗蛋白含量：可达40%以上$ g2 ?/ d农大白早糯玉米 粗蛋白含量：3.41%( Y3 z3 d1 z9 D蠡玉168 粗蛋白含量：9.635 h1 1 j: M4 g! # 台湾大青枣 粗蛋白含量：0.86%+ n$ l- Y: p6 J 上文介绍了几种农产品或水果的粗蛋白含量情况，如果需要更多的资料，大家可自己查阅。5 N0 q; d _; p6 ) c1 N, p- r9 i5 U0 N. M- N1 f+ w% K粗蛋白测定：, S) 8 x( T J* ?5 h3 R 方法一：最简便也是最快键的方法，就是用蛋白质测定仪来测量。. g- y: $ H- J; J M 本标准参照采用ISO 59831979 动物饲料氮含量的测定和粗蛋白含量计算。 , X1 O& n5 q: o- M! Q3 g1 主题内容与适用范围* g# |3 R: 0 y7 M本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。4 Z& 8 X3 X* o$ G0 e本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。( c. e* b% e. O3 S3 m2 引用标准: G; y5 g, : SGB 601化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备1 D6 * v# ND, G( P. w! r B3 原理3 j1 E, H$ z7 U9 N R, UZ( h凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。. U1 g, z, z: I4 试剂# h+ _9 Z- o$ z4.1 硫酸（GB 625）：化学纯，含量为98，无氮。+ i! x0 N9 f/ U_2 2 h4.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665），6g硫酸钾（HG 3920）或硫酸钠（HG 3908），均为化学纯，磨碎混匀。- J3 _3 cp4.3 氢氧化钠（GB 629）：化学纯，40水溶液（m/V）。! g7 m* Vn8 M; c5 W! f4.4 硼酸（GB 628）：化学纯，2水溶液（m/V）。 p: C9 G# h0 |, k! H5 L3 w4.5 混合指示剂：甲基红（HG 3958）0.1乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 31220）0.5乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。+ z$ s+ / N: % IE4.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB 601制备。3 r5 E, qV* E4 4.6.1 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB 622，分析纯），注入 1 000mL蒸馏水中。! C9 Q% YK: f h4.6.2 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB 622，分析纯），注入1 000mL蒸馏水中。9 + |+ s# M% Q2 c6 t4.7 蔗糖（HG 31001）：分析纯。3 F Bp# d4 _3 t& N5 n& nZ( 4.8 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。! ?5 d% t, D, u9 d% f. |4.9 硼酸吸收液：1硼酸水溶液1 000mL，加入0.1溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1甲基红乙醇溶液7mL，4氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。+ n9 l2 8 p4 U, H4 H2 ; w5 仪器设备9 C; n% x9 N; x; F) O K5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。( o: r8 S J6 4 k4 Z0 7 c5.2 分样筛：孔径0.45mm（40目）。% F, b+ d6 G6 2 L F: h& I) |* 5.3 分析天平：感量0.0001g。j- I2 a/ r7 S5 5.4 消煮炉或电炉。( m o1 |3 : O l1 v5 s5.5 滴定管：酸式，10、25mL。3 ?, B# J- B3 V3 d U5.6 凯氏烧瓶：250mL。0 K5 w1 L4 1 |* o5 L- |/ X7 e* X5 W7 5.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。7 K2 v 5 F2 G5.8 锥形瓶：150、250mL。, d! u+ : R M5.9 容量瓶：100mL。: - c3 o# 6 w e5.10 消煮管：250mL。) U, |9 ug) I8 ea2 o* Y. 9 g5.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动，全自动定氮仪。, m. Tm. k! i6 试样的选取和制备$ Q9 h2 d6 R, l0 Y5 V4 c4 Y e选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。, Q6 h0 v& F% P. : D5 n7 分析步骤 w- e0 A3 Z; R& Vr5 p- 7.1 仲裁法6 |2 t- B( - W) d2 y! N- X7 t7.1.1 试样的消煮7 5 c8 _, Sz5 O5 j称取试样0.51g（含氮量580mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶（5.6）中，加入6.4g混合催化剂（4.2），与试样混合均匀，再加入12mL硫酸（4.1）和2粒玻璃珠，将 凯氏烧瓶（5.6）置于电炉（5.4）上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力 （360410）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。, 8 |: D1 F5 K) R9 P: o* R) l7 D) t3 B7.1.2 氨的蒸馏（蒸馏步骤的检验见附录A）: Q+ J, j% w9 o1 D2 i- S) |& T7.1.2.1 常量蒸馏法& x7 R& r4 f/ D# A* j5 h( n将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入60100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶（5.6）中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3），轻轻摇动凯氏烧瓶（5.6），使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏12min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。7 Ey0 4 t* j3 y7.1.2.2 半微量蒸馏法 4 , M5 T% e4 . E2 O% b将试样消煮液（7.1.1）冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。将半微量蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸（4.4）吸收液和2滴混合指示剂（4.5）的锥形瓶（5.8）内。蒸汽发生器 （5.7）的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液1020mL注入蒸馏装置（5.7）的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液（4.3），小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶（5.8）使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。0 P, l* x: y5 U1 |2 % V注：7.1.2.1和7.1.2.2蒸馏法测定结果相近，可任选一种。$ k HO. b h p8 C. N7.1.2.3 蒸馏步骤的检验, S, . k Q8 f& B 2 |精确称取0.2g硫酸铵（4.8），代替试样，按7.1.2或7.2.2步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.190.2，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 , A3 $ Y) Gu) & S7.1.3 滴定) 4 Q( U6 t; w |用7.1.2.1或7.1.2.2法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L（4.6.1）或0.02mol/L（4.6.2）盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。5 p2 d) G. T. r4 q* w7.2 推荐法. K# d; 9 B$ E s7.2.1 试样的消煮: 7 K0 o) g4 k称取0.51g试样（含氮量580mg）准确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（仪器自备）1 X) 4 * J8 % ?或6.4g混合催化剂（4.2），12mL硫酸（4.1），于420 下在消煮炉上消化1h。取出放凉后加入30mL蒸馏水。/ B9 * S2 r# K8 f7.2.2 氨的蒸馏 O# & B w. Y8 v( ?# B采用全自动定氮仪（5.11）时，按仪器本身常量程序进行测定。: J8 ; S H; a l$ ZxX采用半自动定氮仪（5.11）时，将带消化液的管子插在蒸馏装置上，以25mL硼酸（4.4）为吸收液，加入2滴混合指示剂（4.5），蒸馏装置（5.7）的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消煮管中加入50mL氢氧化钠溶液（4.3）进行蒸馏。蒸馏时间以吸收液体积达到100mL时为宜。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。+ V% U& 5 : G% P7.2.3 滴定+ y6 G9 & z: S$ I) I1 Q用0.1mol/L的标准盐酸溶液（4.6.1）滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。, E* 6 F- 5 D2 J5 J! w s8 空白测定: A1 & E3 E; f称取蔗糖0.5g，代替试样，按第7章进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液（4.6.1）的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液（4.6.2）体积不得超过0.3mL。5 B/ d% O f: X8 L4 u2 Q9 分析结果的表述, N: v9 : p$ n3 E4 9.1 计算见下式：4 q- Z/ ?# J9 P( d L+ l8 N7 O粗蛋白质（）=（V2-V1）c0.01406.25/（mV/V） 100 . T5 M3 z. B: V# D8 A) c: A式中：V2 滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； # B3 Z: 0 z; XV1 滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； / K! U9 x9 G& p2 # V, G% l+ Bc 盐酸标准溶液浓度，mol/L； + C0 x( l- l9 Q5 T/ |/ y1 cm 试样质量，g； ; N- m* l# I# YV 试样分解液总体积，mL； P$ X7 T1 ?& ! x S( F. _V 试样分解液蒸馏用体积，mL； ; / m% N# l0 R+ ! p5 B0.0140 与1.00mL盐酸标准溶液c（HCl）=1.000mol