在α-蒎烯生物环氧化反应过程中酯对反应的影响及机理探讨.pdf

2 20 化 工 进 展 CH EM IC A L IN D U STR Y A N D E N G IN E ER IN G PR O G RE SS 20 16 年第 35 卷第 1 期 在 蒎烯生物环氧化反应过程中酯对反应的影响及机理探讨 熊阳 覃益民 唐爱星 韦荟琳 刘幽燕 广西大学化学化工学院 广西 南宁 530004 广西生物炼制重点实验室 广西 南宁 530003 摘要 在以过氧化脲 U HP 为氧源 Nov435 为催化剂的体系中进行 d 蒎烯生物环氧化反应的研究 重点考察 不同酯作为酰基供体对反应的影响 从反应速率和酶批次稳定性综合考虑 以丙酸乙酯为最佳溶剂 30 C 下 一 蒎烯 3h 的环氧转化率可达到 87 左右 经 6批次反应后仍可达到 47 6 发现过酸和 H20 2的协同作用对酶稳定 性的影响要高于单一因素 酶催化乙酸乙酯 丙酸乙酯 乙酸戊酯 己酸乙酯等不同酰基供体过水解反应均可 在 60m i n 达到平衡 但过酸平衡浓度和 a一 蒎烯化学环氧化反应速率受酯影响较大 进而对总反应化学一 酶法联合 催化环氧化产生影响 最后探讨 了丙酸 乙酯为唯一酰基供体时的反应机制 认为酶利用丙酸产过酸的反应速率 和过酸平衡浓度远低于酯 丙酸乙酯的水解和过水解反应为一对竞争性反应 因此有机体 系更有利于环氧化 反 应 关键词 丙酸乙酯 a 蒎烯 环氧化反应 失活 脂肪酶 过水解 生物催化 中图分类号 Q 503 文献标志码 A 文章编号 1000 6613 20 16 01 0220 07 D o I 10 16085 i ssn 1000 6613 20 16 0 1 030 C h em o en zy m a ti c ep ox i d a ti o n o f 倪 一 p i n e n e e ster a s i n fl u en c i n g fa c to rs a n d m ec h a n i sm o f th e r ea c ti o n X ION G Yang Q IN Yi m i n TAN G A ixi ng W EIH ui li n 1 LIU Youyan C ollege of C h em i stry and C hem i c al E ng i n eeri n g G uan gx i U ni versi ty N an n i n g 5 30 004 G u an g xi C hi na G u an gx i K ey L ab oratory o f B i orefi n ery N ann i ng 53 00 03 G u an gx i C h i n a A b strac t C hem o en zym ati c epox i dati on o f c pi n ene w as ac hi eved i n a non aqueou s system w h i c h em ployed esters as solvent and perhydrolysi s substrate urea hydrogen peroxi de U H P as an oxygen sou rc e and li p ase as c atalyst D i fferen t esters w ere found to affec t th e reac ti on si gn i fic antly T h e op ti m al reac ti on c ond i ti o n w as 3 0 an d ethy l p rop i on ate as the solvent c on si deri n g b oth the reac ti on rate and the stab i li ty o f en zym e U n der these c ond i ti ons th e c onv ersi on c ou ld ac hi ev e 87 after 3h and rem ai n 4 7 6 after 6 c y c les T he sy nergy tox i c effec t of H 20 2 an d p erac i d w as m ore si gn i fi c an t th an that o f si ngle one It w as foun d that u si n g di fferent ac y l don ors su c h as eth yl ac etate ethy l p rop i onate am y l ac etate ethy l c ar ro ate an d th e li ke the reac ti on o f li p ase c atalyzed p ro duc ti on of p erac i d c an all reac h equi li bri um w i m i n 60m i n H ow ev er th e equ i li b ri um c o nc entrati on of p erac i d and th e rate of c h em i c al epo xi dati on greatly d ep en ded on th e ester em ploy ed w hi c h i n tu m affec ted th e o veral1 ep oxi dati on o f a p i n en e T h e m ec h ani sm of th e reac ti on w i th ethy l p rop i onate as th e exc lusi v e ac y l don or w as di sc u ssed T h e reac ti on rate an d th e equ i li b ri u m c onc entrati on for p ro duc i ng perac i d by en zy m e w i th prop i oni c ac i d w as si gni fic antly 1ow er th an tho se w i th esters and i t w as fou nd th at there are c om peti ti on s b etw een th e enzy m ati c hy dro lysi s w i th H 20 and the p erhy droly si s w i th H 20 2 w h en 收稿 日期 2015 04 28 修改稿 日期 2015 06 30 基金项 目 国家 自然科学基金 21276053 及广西 自然科学基金 0991001 项 目 第一作者 熊阳 1989一 男 c orn 联系人 覃益 民 博士 硕士研究生 E m ai l yi yuan35 ali yun 教授 E m ai l qym 62 89 si na tom 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 第 1 期 熊阳等 在 6 蒎烯生物环氧化反应过程 中酯对反应 的影 响及机 理探讨 221 H 20 exi sted an d therefore th e non aqueou s env i ron m ent w as m ore su i tab le fo r the epox i dati on K ey w o rd s eth yl propi on ate 一 p i n en e epox i dati on deac ti v ati on li p ase perh ydroly si s bi o c atalysi s 1990 年 B JO R K L IN G等 发现多种脂肪酶属 EC 3 1 1 3 三酰基甘油酰基水解酶 具有催化 过 水解 perhydrolysi s 反应的功能 即以有机酸和 过氧化氢为底物催化合成过氧酸 这是脂肪酶催化 的 多功 能 现 象 2 3 化 学一 酶 法 联 合催 化 环 氧 化 c hem o enzym ati c epoxi dati on 是此反应的一个典 型应用 如图 1 所示 过水解反应与环氧化反应耦 合 使得过水解反应生成的过氧酸 自动将活性氧原 子传递至碳碳双键生成环氧化物 与化学催化剂 4 相 比 生物法具有安全 绿色工艺 以及收率高等优 点L5 J 目前人们 已经利用反应途径开展 了植物油 烯烃 氯代烃等底物 6 的环氧化 N ovozym 435 是 此反应 中最有效的催化剂 O H O X R 20 2 H 20 图 1 以脂肪酸为酰基供体时酶催化烯烃环氧化 原理 6c 一 蒎烯是 自然 界 中存在 量最 多的单萜烯烃之 一 l 在樟脑 冰片等化学中间体及各种合成香料 生物活性物质制备中起着不可替代 的作用 环氧化 反应是其深加工 的重要途径之一 所获的产物不仅 本身有清凉气息 可作为香料 还可进一步合成两 百多种香料或有生理活性 的精细化学品 J引 所 以条 件温和 选择性高 副反应少 的生物法更有利于此 类对 品质要求较高的医药和香料等功能精细化学品 的制备 在化学 酶法联合催化环氧化反应 中 最初的酰 基供体多以脂肪酸为酰基供体 在两相体系中进行 a一 蒎烯环氧化 14 17 虽然底物转化完全 但 由于 一 蒎烯环氧化物为 酸敏感 物质 引 最高收率仅达到 65 酶也只能使用 4 批次 因此从反应稳定性 收率等角度考虑 一些研究人员选用碳酸二 甲酯等 酯类 作 为酰 基 供体 时 一 蒎 烯 收率 可 分别 达 到 85 L1 而 X U 等 J UJ以8 己内酯为溶剂可以实现在 两相体系中 93 的收率 当以过氧化脲 能缓慢释 放 H 2O 2 为氧源时 采用乙酸 乙酯为酰基供体和 溶剂 反应 可获 得 96 的转化 率 最 高收率 达 95 酶 能连 续使 用 7 批 次 但 是酶用 量较 高 33m g m L 这些研究表 明 酰基供体对 抗 一 蒎烯环氧化反应 有显著影响 首先不同酯的物性会影响 H 2O 2 在两 相 间的分布 而 H 2O 2 既是反应物 又是酶的失活 剂 其浓度是反应速率和稳定性的关键 因素 其次 酯作为过水解反应底物之一 不同酯会生成不同碳 链长度过酸 从而可能影响过水解反应速率和 一 蒎 烯环氧化反应速率 一些研究者发现环氧化体系中 存在着 中间产物 过酸 2 而不同碳链长度的 过酸对酶活 的影响不 同 如 TO R N VA L L 等L8J曾将 酶置 于 0 1m ol L 过十六烷 酸 16h 后酶 活仍保 持 99 7 但他们也认为一些短链过酸如过氧 乙酸对 酶 的毒害作用很大 对于生物催化过程来说 要想实现工业化应用 需要综合考虑反应速率 酶稳定性及产物收率 为 此本文选择 以过氧化脲为氧源的有机溶剂体系为反 应体系 从酶稳定性和转化率两个方面来考察酯种 类对过水解反应 以及 一 蒎烯环氧化反应的影响 并 初步探讨了以丙酸乙酯为酰基供体的环氧化反应机 理 从而初步解释了丙酸乙酯体系反应活性较高的 原因 1 实验 部分 1 1不同酯 类对反应 的影响 分别以乙酸乙酯 乙酸甲酯 乙酸丁酯 丙酸 乙酯 三乙酸甘油酯 乙酸戊酯 己酸乙酯溶液为 溶剂 配制 一 蒎烯浓度为 O 67m ol L 的底物溶液 取出 1 5m L 底物溶液于 5m L 玻璃瓶 中并加入过氧 化脲 1 1m m oL 置于平行合成仪 智城公司 型 号 ZH W Y 113H 4F 中预热至30 后加入50m g N ovozym 435 固定化南极假丝酵母脂肪酶 B 购买 于美 国 Si gm a A ldri c h 启动反应 250ffm i n 下反 应 3h 后取样气相分析 在丙酸乙酯体系与乙酸乙酯 体系中 每个批次反应 3h 后取样气相分析 脂肪酶 用乙腈一 水 V V 9 1 洗去脲素 再用溶剂洗去 乙 腈用于下一批次反应 量 取1 5m L乙腈溶 液于 玻璃瓶 中 并加入 R o O O H 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 222 化 工 进 展 2016 年第 35 卷 525m m ol L 过氧化脲或 60m m oL L 过氧 乙酸 最后 加入 30m g N ovozym 435 30 250r m i n 摇动若干 时问后取 出上清液 用 乙腈 水溶液 V V 9 1 洗 净 冻干酶颗粒后用于测量酶活 定义单位时间内 酶催化丙酸 乙酯过水解生成 lm m oL 过氧丙酸所需 的酶量为一个酶活单位 221 1 2酯类的过水解反应与 壤 烯环氧化反应 量取 1 5m L 丙酸乙酯 乙酸乙酯 乙酸戊酯 己酸 乙酯于玻璃瓶中并加入过氧化脲 1 1m m oL 预热至 30 后加入 50m g 酶 250r m i n 下启动反应 并于指定时间取样分析过酸浓度 6c一 蒎烯环氧化反应 将 25m L 乙酸乙酯 丙酸 乙酯 乙酸丁酯与 6m m ol过氧化脲充分混合 并加 入 60m g 酶颗粒启动反应 50 250r m i n 2h 后 取上清液 20m L 置于 25m L 玻璃瓶 中 加入 a一 蒎烯 164m m ol L 于 30 40 50 60 反应若 干时间后取出样 品气相分析 1 3 以丙酸 乙酯为溶剂的酶催化过水解机制 将 25m L丙酸 乙酯 0 5m ol L 乙腈溶液和 6 25m m ol 过氧化脲 U H P 充分混合 取上清液 20m L 碘量法测量体系中初始 H 2O 2浓度并计算得 出 H 20 2摩尔数 置于 25m L 的玻璃瓶中 加入 60m g 酶颗粒启动反应 30 C 250r m i n 取样分析过酸 浓度 为了考察水对过水解反应的影响 在反应玻 璃瓶 中加入一定量水 使得 H 2O 与 H 2O 2摩尔比为 1 10 其他反应过程和条件相 同 测定过酸生成量 同时设置 以丙酸 0 5m ol L 为酰基 供体 的对 照 实 验 1 4 蒎烯环氧化反应转化率 收率以及过酸浓度 的测定 6c 一 蒎烯 以及其环氧化物浓度用气相色谱 美国 安捷伦公司 型号 6890 测定 色谱条件 分流比 为 20 1 进样 口与检 测器 分别 设定 为 220 和 230 升温程序 初温 100 以 15 m i n 的速 率 升 至160 色 谱 柱 为H p 1 A gi lent 30m 0 25m m O 25gm 正十二烷 99 0 G C A laddi n 为 内标物 反应转化率与收率的计算公式如式 1 式 2 减烯 靴率 警 l0 1 2 3一 环氧蒎烷收率 1o0 2 式中 C0为初始加入的 仅 一 蒎烯的浓度 g几 C 残 为样品中残留的 一 蒎烯的浓度 g L C 1 为样品中 2 3 环氧蒎烷的浓度 g L 活性氧原子的浓度用碘 量法测量 剩余过氧化氢浓度用铈量法测定 过酸 浓度便是两者的差值 23 24 2 结果 与讨论 2 1不同酯类对反应的影响 表 1 反映 了不同酰基供体对环氧化反应 的影 响 首先不同酯 的物化特性会影响 H 2O 2 在有机相 中的传质 一般来说 lgP P 是溶剂在正丁醇与 水 中的分配系数 表征疏水性 值较低 的溶剂 中 H 2O 2浓度较高 这有利于推动环氧化反应 如乙酸 戊酯体系中 H 2O 2浓度仅有 14m m ol L 其 3h 的转化 率 为 39 而 乙酸 乙酯 时 H 2O 2 浓 度 可 达 到 80m m ol L 转化率可达到 86 但是过高的 H 2O 2 浓度可能造成酶的失活 2 存在底物抑制作用 以 乙酸 甲酯为例 尿素过氧化氢在此系统中不稳定 短时间内释放出大量过氧化氢 虽然有机相中 H 2O 2 浓度在反应中能保持在 400m m oL L 以上 但其 3h 的转化率 只有 44 其次 由于酯同时也是过水解反应底物 酯类 分子结构可能影响过水解反应 进而影响总反应速 率 如在己酸乙酯中 H 2O 2 浓度为 24m m ol L 3h 表 1不同酰基供体对催化 蒎烯反应的影响 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 第 1 期 熊 阳等 在 蒎烯生物环氧化反应过程中酯对反应的影响及机理探讨 223 的转化率为 28 而 乙酸戊酯 中 H 20 2 浓度仅为 14m m ol L 但其转化率却可达到 39 从反应速率考虑 丙酸乙酯和 乙酸乙酯作为酰 基供体是较好的选择 2 2 酯类对反应稳定性的影响 进一步选择 乙酸 乙酯和丙酸乙酯为溶剂 考察 酶的稳定性 结果如 图 2 所示 虽然两种溶剂中第 一 批次反应的转化率基本相同 但是在丙酸 乙酯中 酶批次稳定性明显好于乙酸乙酯 前者第七批次时 的转化率仍达到 35 而后者的转化率只剩下 4 分析原因认为与反应中的副产物有关 乙酸 乙酯 的 过水 解 产物 过 氧 乙酸 和 环 氧化 反 应后 的产 物 乙酸 相较于丙酸乙酯来说碳链都更短 在 相 同催化时间内对酶的毒害更大 而且乙酸 乙 酯体系中 H 2O 2 浓度也更高 因此可 以看 出丙酸乙 酯作为溶剂和酰基供体 较为合适 在 A N K U D EY 等 lJ研究中 乙酸 乙酯体系 中N ovozym 435 催化烯 烃环氧化连续使用 6 批次而没有显著酶活损失 可 能是由于高用酶量 50m g 1 5m L 图2 以丙酸乙酯 乙酸乙酯为酰基供体时反应稳定性 一 般认为 H 20 2和过酸是环氧化体系中酶失活 的主要因素 J 为此分别研究 了脲素 溶剂 c 一 蒎 烯 H 2O 2和过酸等因素对酶活稳定性的影响 发现 脲素 溶剂 一 蒎烯对酶活稳定性影响不大 但是 与文献报道不同的是 如图 3 所示 本研究体系中 H 2O 2和过氧 乙酸对酶活的影响也不显著 酶分别保 存在 525m m ol L H 2O 2和 60m m ol L 过氧乙酸的体系 中 失活曲线基本一致 900m i n 后仍能保持 90 的 活力 但是当将酶保存在过氧乙酸与 H 2O 2 共存的 体系中 可以发现此时酶失活加剧 400m i n 剩余酶 活仅有 60 900m i n 后仅剩余 12 这说明此环氧 化体系 中酶的失活可能是过酸与 H 2O 2的协同作用 这有待于进一步研究 图 3过酸与H 2O 2对酶活的影响 2 3 不同酰基供体对酶催 化产过酸 以及 蒎烯环 氧化反应的影响 为 探 究不 同酯类 如 何 影 响过 水解 反 应 以及 C hem i c al epoxi dati on反 应 速 率 进 而 控 制 整 个 C hem o enzym ati c epoxi dati on 反应 首先测定其过 水解速率 如图 4 所示 董 图4酶催化不同酯过水解 以 4 种酯为酰基供体的过水解反应几乎均在 60m i n 后达到平衡 反应初期 酶催化 乙酸乙酯过 水解速率最大 丙酸 乙酯次之 乙酸戊酯稍大于 己 酸 乙酯 其 过 酸 平 衡 浓 度 依 次 递 减 分 别 为 434 m m o l L 234 m m ol L 10 1m m ol L 和 82 m m ol L 可 以发现 过水解反应与表 1 中环氧化反应结果并 不严格对应 虽然以丙酸乙酯和乙酸乙酯为底物的 生成过酸平衡浓度相差两倍 其 H 2O 2 浓度基本相 同 但是 一 蒎烯总环氧化速率在这两种溶剂 中相 近 而己酸乙酯过水解速率稍小于乙酸戊酯 其环 氧化速率也较小 这是 由于 一 蒎烯化学环氧化反应 也影响着总环氧化速率 为此 测定 以乙酸乙酯 丙酸 乙酯 乙酸丁酯为酰基供体时的环氧化反应进 程 如图 5 所示 环氧化速率都随温度升高而增大 如丙酸乙酯体系中 30 时 120m i n 转化率为 63 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 224 化 工 进 展 2016 年第 35 卷 图 5 不同温度下丙酸乙酯体系 乙酸乙酯体系 乙酸丁酯 体系中蒎烯烃反应速率 60 C 转化率增至 72 在 同一温度下 乙酸 乙酯体 系中 6c 蒎烯转化较快 50 C 时反应 30m i n 乙酸 乙酯 体系中转化率达到 59 而丙酸乙酯体系与乙酸丁 酯体系中转化率为 46 51 3 种体系中反应速 率差别不大 可能是 由于过酸初始浓度不同所致 因此 以速率常数来表征不同酯对反应速率的 影响更为理想 根据文献报道 蒎烯 c hem ic al eDoxi dati on 反 应 符合 二 级 动力 学 拟 合 方程 为 式 3 1Ili 二 1 P0 一 1 tf 3 I M 1 一 J 式中 A仁 Q Po Po 为 o 一 蒎烯初始浓度 Q b 为过酸初始浓度 为 6c 一 蒎烯转化率 不 同温度下乙酸乙酯 丙酸 乙酯 乙酸丁酯的 反应体系中ln M X c 一 回归曲线如图 6 所示 通过图 6 与拟合方程可得出不同温度下化学环 d rai n a 丙酸乙酯 t m i n b 乙酸丁酯 t m i n c 乙酸乙酯 图6不同酯体系中蒎烯环氧化反应拟合曲线 一 一 一 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 第 1 期 熊阳等 在 一 蒎烯生物环氧化反应过程中酯对反应的影响及机理探讨 225 表 2不同酯体系蒎烯环氧化反应速率常数 氧化反应速率常数 如表 2 所示 3 种体系中速率常数都随温度升高而变大 而 同一温度下不同酯体系中蒎烯化学环氧化反应速率 不同 首先是由于不同碳链长度过氧酸与烯烃反应 时 由于其质子化状态不同而速率相异 2 如表 2 中 丙酸 乙酯体系环氧化常数大于乙酸 乙酯体系 这与 前述丙酸乙酯体系过水解速率较小而两种酰基供体 体系总环氧化速率相 同的结果对应 其次 表 2 中 乙酸 乙酯体系与 乙酸丁酯体系 中反应物都为过氧 乙 酸 但 乙酸 乙酯体系速中率常数较大 应该是 由溶 剂效应引起的 即溶剂 自身溶解底物的特性 2 4 以丙酸乙酯为溶剂的酶催化过水解反应机制 过水解反应一般被认为是环氧化过程的限速步 骤 探究丙酸 乙酯体系中酶催化机制有助于 了解整 个环氧化过程 图 7 反映了在有机体系中以酸或酯为酰基供体 以及外加水量对酶催化过水解效率的影响 可以看 出 在无外加水的环境 中丙酸乙酯过水解反应速率 最大 在 1 80m i n 内过酸可达到 59 2m m ol L 的平衡 浓度 而 以丙酸为酰基供体 的过水解反应无论是反 应速率还是生成的过酸平衡浓度均 比以丙酸 乙酯为 低 过酸平衡浓度只有 7 5m m ol L 这说 明了在有 机体系中以酯为酰基供体要优于丙酸 由此可见 当选用丙酸乙酯作为酰基供体与溶剂时 作为过水 解产物之一的丙酸基本不能被酶利用再生成过酸 图7酰基供体与 H 2O 对产过酸的影响 当外加水量为 240m m o1 L 时 过丙酸平衡浓度 下 降 至48 7m m ol L 而 当 c H 20 1 0c H 2o 2 2400m m ol L 时 平衡浓度下降至 32 2m m ol L 进 一 步考察上述体系 中丙酸 乙酯 的消耗 当加入 的 H 2O 从 0 增至 2400m m ol L 时 丙酸 乙酯转化率由 30 增至 88 表 明当体系中同时存在 H 20 和 H 20 2 时 酯的水解和过水解反应 同时进行 是一对竞争 性反应 其次 酯的水解部分由于生成的丙酸不能 再次转化为过酸而 无效率 因而外加水会 降低过 酸平衡浓度 故以丙酸 乙酯作为酰基供体时 有机 环境可以减少水解反应的发生 因此更适合于环氧 化反应 需要指出的是 各个体系中总的活性氧原 子浓度 240m m oYL 左右 即过酸与剩余过氧化氢 浓度之和 在反应过程中都基本不变 这说 明生成 的过酸和过氧化氢在体系 中能保持稳定 这与 x U 等L1 UJ以己内酯为溶剂和酰基供体的环 氧化反应机制不同 当 H 2O 和 H 2O 2同时存在于有 机相时 作为产物之一的 6 羟基己酸仍可作为酰基 供体在酶催化作用下生成过酸 而且其过水解速率 是酯的 60 倍 3 结 论 对于 一 蒎烯的环氧化过程 以酯作为溶剂与过 水解底物 采用过氧化脲为氧源 的有机体系可以获 得较高 的收率 以反应速率和酶批次稳定性两个指 标来优化酯的种类 温度等因素 发现丙酸 乙酯或 乙酸乙酯中可以获得最佳的环氧化反应转化率 批 次使用稳定性则 以丙酸乙酯为佳 反应转化率和收 率在 30 和 40 C 之间没有明显差别 但 3O 时酶 可 以获得更好 的稳定性 在最优条件下采用 30m g L 的酶量下 3h 的环氧转化率为 87 6 批次反应后仍 能达到 47 6 对反应机制 的研究显示 酯的不同 会显著影响有机相中 H 20 2 的浓度 过酸平衡浓度 等 进而影响总环氧化反应速率 在丙酸乙酯体系 中酶只能以酯为酰基供体产过酸 丙酸基本不能再 被利用 而且丙酸 乙酯的水解反应和过水解反应为 竞争性反应 因此有机体系更有利于反应 参考文献 11 B JO R K L1N G F G O D n R E D SEN S E R K O L i pase m edi ated form ati on of peroxyc arboxyli c ac i ds used i n c atalyti c epox idati on of al kenes J Journ al of the C hem i c al Soei ety C hem i c al C om lnuni c ati ons 1990 19 1301 1303 2 B ER N H A R D T P H U L T K K A ZIA U SK A S R J M olec ular basi s of perhydrolase ac ti vi ty in seri ne hydrolases J A ngew andte Chem i e 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 2 26 化 工 进 展 20 16 年第 35 卷 3 4 5 6 7 8 9 10 12 13 14 15 2 0 0 5 4 4 18 2 74 2 2 7 46 K A P O O R M G U P T A M N L ip a se pro m i sc ui ty an d i ts b i o c h em i c al appli c ati ons J Proc ess B i oc hem i stry 2012 47 4 555 569 R A N G A R A JA N B H A V E Y A G R U L K E E A e t a1 K i n eti c p aram eters o f a tw o p h ase m o d el fo rin si re ep o x i da ti on o f so yb ean oi l J J A m O i l Chem Soc 1995 72 10 1161 1169 P IE R R E V A O U F C V C F F U L C R A N D H et a 1 T h e u se of li plases as b i oc ataly sts fo r th e ep o x i da tin n o f fatty ac i d s an d p h en o li c c om pounds J G reen C hem i stry 2014 16 4 1740 1754 C H U A S C X U X G U O Z E m erg i n g su stai n ab le tec h n o log y fo r epoxi dati on direc ted tow ar d plan t oi l based plasti c i zers J P roc ess B i o c h em i stry 20 12 4 7 10 14 39 14 5 1 O R E L L A N A C O C A C C A M O C H O S A D L E R C R E U T Z D et a 1 C h em o en zym ati c ep ox i d ati o n o f lin o lei c ac i d p aram e ters i nfl uenc i ng the reac ti on J European Journal of L ip id Sc i enc e and Tec hnology 2005 107 12 864 870 T O R N V A L L U O R E L L A N A C O C A C H A T T I K A U L R et a1 S tab i li ty o f i m m ob i li z ed C an di d a an tar c ti c a lip ase B du ri n g c hem o enzym ati c epoxi dati on of fatty ac i ds J E nzym e and M i c robi al T ec hnology 2007 40 3 447 451 刘元法 王兴国 员克志脂肪酶催化制备环氧棉籽油的研究 J 中国油脂 2007 1 39 42 X U Y K H A W N R B J LI Z E ffi c i ent epoxi dati on ofalkenes w i th hydrogen peroxi de lac tone an d li pase J G reen C hem i stry 2009 1 1 12 2 0 4 7 A N K U D E Y E G O L IV O H F P E E P L E S T L L i p ase m e di ated epoxi dati on uti li zi ng urea hydrogen peroxi de i n ethyl ac etate J G reen C hem i stry 2006 8 10 923 926 MO N T E IR O J V E L O S O C C ataly ti c c o nv ersi o n of terp e n es i n to fi ne c hem i c als J T opi c s in C atalysis 2004 27 1 4 169 180 B IC A S J L D IO N i SIO A P PA STO R E G U M B i o oxi dati on of terpenes an approac h fo r the flavor i ndustry J C hem i c al R evi ew s 2009 109 9 4 5l8 453 l S K O U D O U V S T A M A T 1S H K O L IS IS F N L i p ase m e d i ated epoxi dati on of d pi nene J Journal of M olec ular C atalysi s B E nzym ati c 2003 21 1 2 67 69 S K O U R ID O U V S T A M A T IS H K O L IS IS F N A stu d y on th e p roc ess o f li p a se c ataly zed syn th esi s o f 一 p i ne ne o x i d e in o rg ani c solvents J B i oc atal B i otransfo rm 2003 21 6 285 290 16 TZ IA LL A A A PA V LID IS I V FE LIC ISSIM O M P et a1 L i pase i m m o b i li za ti on o n sm ec ti te n an o c lay s c h ar a c teri zati on a nd appli c ati on to the epoxi dati on of d pi nene J B i oresourc e T e c hn o lo g y 2 0 10 10 1 6 15 8 7 1 59 4 17 Tz IA LL A A A K A LO G ER IS E E N O T 1A D IS A et a1 E ffec ti ve i m m ob i li z ati on o f C and i d a an tar c ti c a li p ase B i n org an i c m o d i fi e d c lays appli c ati on fo r the epox idation of terpenes J M ateri als Sc i enc e and Engi neering B 2009 165 3 173 177 18 尹延柏 宋湛谦 商士斌 等 环氧蒎烷异构生成龙脑烯醛研究 进展 J 现代化工 2007 7 23 27 19 R U SC H G E N K L A A S M W A R W EL S C hem oenzym ati c e p ox i d ati o n o f a lk ene s b y di m e thy l c ar b o n ate an d h yd rog en peroxi de J O rgan i c