（水生生物学专业论文）斜带石斑鱼gnrh和gnrh受体的克隆及其mrna表达特性研究.pdf

笪堕墨主些盔堂堡主兰鱼堡塞! 堂兰! 旦一 论文题目：斜带石斑鱼g n r h 和g n r h 受体的克隆及其 m r n a 表达特性研究 专业：水生生物学 硕士生：何绮云 导师：李文笙副教授 摘要 促性腺激素释放激素( g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n gh o r m o n e ，g n r h ) 是动物生殖过 程中最重要的激素之一，因其对垂体合成并释放黄体生成素l h 和促卵泡激素 f s h 的刺激作用而得名。g n r h 在体内的重要功能是由促性腺激素释放激素受体 ( g n r i - i r ) 介导的g n r h 及其受体相互作用的调控在繁殖性能调控中是一个关键 性位点。 本文采用r t p c r 方法和c d n a 末端快速扩增技术( r a c e ) 从斜带石斑 鱼( 印i a e p h e l u sc o i o i d e s ) 下丘脑总r n a 中进行扩增，得到斜带石斑鱼s b g n r h c d n a 全序列。该c d n a 全长4 0 8 b p ，编码区2 8 5 b p ，所编码的前体s b g n r h 蛋 白为9 4 个氨基酸，包括2 2 个氨基酸的信号肽、s b g n r h 成熟十肽、加工位点 ( g l y t , y s a r g ) 和g n r i - 联合肢( g n r h - a s s o c i a t e dp e p t i d e ，g a p ) 。同源性分析表 明，斜带石斑鱼s b g n r h 与舌齿鲈( d i c e n t r a r c h u sl a b r a x ) s b g n r h 同源性为7 2 3 与鲻鱼( m u g i lc e p h a l u s ) s b g n r h 同源性为7 1 7 。进化树分析表明，斜带石 斑鱼s b g n r h 与鲈形目的狼鲈科( 条纹狼鲈和舌齿鲈) 、鲷科( 金头鲷和真鲷) 、 石首鱼科( 波纹绒须石首鱼和红拟石首鱼) 鱼类s b g n r h 在同一进化支上的不同 分支，与鲷科的金头鲷和真鲷亲缘性最近。 采用两步法r t p c r 结合s o u t h e r nb l o t 分析对s b g n r h 在斜带石斑鱼成体各 组织、胚胎发育和幼体发育早期的表达情况进行了初步的研究。成体组织分布结 果显示，s b o n r h 在不同脑区都有表达，但在嗅球、端脑、下丘脑等的表达丰度 比其他脑区高；在外周组织的视网膜、皮肤、性腺和胃也能检测到较弱的s b g n r h 表达。表明s b g n r h 作为神经激素调节促性腺激素g t h 的分泌，对下丘脑一垂体 重 何绮云中山大学硕士学位论文2 0 0 5 年5 月 一性腺轴起生殖调控作用，也可能作为神经递质和神经调质、自分泌和旁分泌调 节因子，参与鱼类神经内分泌的其他活动。在胚胎发育各时期s b g n r h 均有微量 表达，仔鱼出膜后则开始大量表达，此后一直保持上升趋势到2 4 天出现峰值， 表明s b g n r h 在斜带石斑鱼幼体发育过程中起重要作用。 为了更好地了解g n r h 在斜带石斑鱼中的生理功能，我们利用p c r 方法从 斜带石斑鱼垂体总r n a 克隆了g n r h 受体( g n r h r ) 的c d n a 全长序列。g n r h r c d n a 全长为1 9 2 1 b p ，编码区1 2 7 8 b p ，编码一条4 2 5 个氨基酸的多肽链。经 s m a r tv 4 0 分析，斜带石斑鱼g n r h r 是一个含有三个主要结构域的七次跨膜 蛋白，包括5 0 个氨基酸的n 端细胞外结构域，2 8 4 个氨基酸的7 次跨膜结构域 和9 1 个氨基酸的c 端细胞质结构域。同源性分析表明，斜带石斑鱼g n r h r 与 杜氏鲫( s e r i o l ad u m e r i l i i ) g n r h r 同源性达8 9 ，与舌齿鲈( d i c e n t r a r c h u sl a b r a x ) 达8 8 。进化树分析表明，斜带石斑鱼g n r h r 与鲈形目的条纹狼鲈、舌齿鲈、 金头鲷、杜氏辫在同一分支，而哺乳类g n r h r 则在另一分支。在亲缘性关系上， 斜带石斑鱼与杜氏晦的亲缘性最高，其次为舌齿鲈和条纹狼鲈，与哺乳类亲缘性 较低，此结果与序列同源性比较相一致。 采用半定量r t - p c r 结合s o u t h e r nb l o t 分析，对g n r h r 在斜带石斑鱼脑部 及不同组织中的表达情况进行了初步研究。结果表明，g n r h r 在斜带石斑鱼成 体各组织里广泛分布，其中以脑垂体的丰度最高。这主要与g n r h 的生物学功能 相一致。 为了获取g n r h r 抗体，通过免疫组织化学方法来检测斜带石斑鱼g n r h r 蛋白在体内的表达分布水平情况将斜带石斑鱼g n r h r 的开放读码框( o r f ) 克隆于表达载体p e t - 2 2 b 。重组表达载体经n d e ，和x h o ，双酶切鉴定，能得到 与p c r 产物大小一致的片段及载体p e t - 2 2 b 大小一致的片段，表明重组表达载 体g g n r h r p e t - 2 2 b 已经成功构建。随后的g n r h r 原核表达还有待进一步研究。 关键词：斜带石斑鱼( e p i n e p h e l u sc o i o i d e s ) 、促性腺激素释放激素( g n r i - i ) 、 促性腺激素释放激素受体( g n r h r ) 、c d n a 克隆、表达 毪 塑塑墨! 些查兰墅主兰垡堡苎! 塑! 至! 旦一 g n r ha n dg n r hr e c e p t o ro fo r a n g e s p o t t e dg r o u p e r , e p i n e p h e l u sc o i o i d e s ：m o l e c u l a rc l o n i n g a n dc h a r a c t e r i s t i c so f m r n a e x p r e s s i o n h e q i y u n m a j o r ：h y d r o b i o l o g y s u p e r v i s o r ：a s s o c i a t ep r o f l iw e n s h e n g a b s t r a c t g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n gh o r m o n e ( g n r h ) i san e u r o p e p t i d et h a tp l a y sap i v o t a lr o l ei n t h er e p r o d u c t i o no fa l lv e r t e b r a t e s g n r i - ii sn a m e df o ri t sk n o w nf u n c t i o no f ft h e p i t u i t a r yt oa c t i v a t et h es y n t h e s i sa n dr e l e a s eo fg o n a d o t r o p i n s ( f o l l i c l es t i m u l a t i n g h o r m o n e ，f s ha n dl u t e i n i z i n gh o r m o n e ，l h ) g n r hs i g n a l st h r o u g hi t ss p e c i f i c m e m b r a n er e c e p t o rg n r h ra n dg n r h r - g n r hi n t e r a c t i o n sh a v eb e e nak e yp o i n ti n t h en e u r o e n d o e r i n er e g u l a t i o no fr e p r o d u c t i v ep r o c e s s e s t h eo r a n g e s p o t t e dg r o u p e r , e p i n e p h e l u sc o i o i d e s ，ap r o t o g y n o u sh e r m a p h r o d i t ef i s h ，i suf a v o r i t em a r i c u k u r ef i s h i ns o u t h e r nc h i n a h o w e v e r t h em e c h a n i s m so fg o n a d a ld e v e l o p m e n ta n d r e p r o d u c t i o no fg r o u p e rr e m a i n sp o o r l yu n d e r s t o o d a st h ef i r s ts t e pt ou n d e r s t a n dt h e m g u l a t i o nm e c h a n i s mo fg n r h a n dt h er o l eo fg n r h ri nt h ec o n t r o lo fr e p r o d u c t i o n ， w ei s o l a t e dt h es b g n r hf r o mt h eh y p o t h a l a m u so fg r o u p e rb yr t - p c ra n dr a p i d a m p l i f i c a t i o no fe d n ae n d s ( r a c e ) t h ee n t i r es b g n r he d n a c o n s i s t so f4 0 8 b p a n de n c o d e da no p e nr e a d i n gf r a m e ( o r f ) o f2 8 5 b p t h i sg r o u p e r - t y p eg n r h e n c o d e sp r e p r o s b g n r hw i t h9 4a m i n oa c i d si n c l u d i n gas i g n a lp e p t i d e ( s p ) o f2 2 a m i n oa c i d s ，am a t u r es b g n r hp c p t i d eo f 1 0a m i n oa c i d s ，ap r o c e s s i n gs i t e f g l y t , y s a r g ) a n dag n r i - i a s s o c i a t e dp e p t i d e t h eh o m o l o g ya n a l y s i sd a t as h o w e d t h a ti th a sah o m o l o g yo f7 2 3 c o m p a r e dw i t ht h ee u r o p e a ns e a b a s sr d i c e n t r a r c h u s l a b r a x ) s b g n r ha n d7 1 7 o ft h ef l a t h e a dm u l l e t ( m u g i lc e p h a l u s ) s b g n r h p h y l o g e n e t i ct r e eo ft h eg r o u p e rs b g n r hd e d u c e da m i n oa c i ds e q u e n c e sa n do t h e r “i 何缔云中山大学硕士学位论文2 0 0 5 年5 月 s p e c i e sg n r h i n d i c a t e dt h a tt h eg r o u p e rs b g n r ha n do t h e rp e r c i f o r mf i s h e ss b g n r h a r ei nt h ed i f f e r e n tb r a n c ho ft h es a m ee v o l u t i o n a la x i sa n da r eh i g h e rs i m i l a r i t yw i t h g i l t h e a ds e a b r e a m ( s p a r u sa u r a t a ) a n dr e ds e a b r e a m ( p a g r u sm a j o r ) u s i n gr t - p c r a n ds o u t h e r nb l o t ( f o ra u t h e n t i c i t yc o n f i r m a t i o n ) ，t h em r n a e x p r e s s i o no fs b g n r h i nt h et i s s u e ，e m b r y oa n dt h ee a r l yl a r v a ld e v e l o p m e n ti no r a n g e s p o t t e dg r o u p e rw e r e s t u d i e d i nt i s s u ed i s t r i b u t i o ni tw a sf o u n ds b g n r hm r n aw a sp r e s e n tt h r o u g ha l l p a r t so ft h eb r a i n ，b u tt h es i g n a l so fo l f a c t o r yb u l b ，e n d b r a i n ，h y p o t h a l a ma n d p i t u i t a r yw e r eh i g h e rt h a no t h e rp a r t so ft h eb r a i n ；w e a ks i g n a l sa l s ob ed e t e c t e do n r e t i n a ，s k i n ，s e xg l a n da n ds t o m a c h o u rr e s u l t sa l s op r o v i d e dt h a ts b g n r hm r n a w a se x p r e s s e dd u r i n gt h ew h o l es t a g e so ft h ee m b r y oa n d e a r l yl a r v a ld e v e l o p m e n to f t h eg r o u p e gt h es i g n a lb e g a nt oi n c r e a s ea f t e rt h eh a t c h i n gs t a g ea n d k e e po ng r o w i n g u n t i l2 4d a y sp o s t h a t c h i n g i ts e e m st h a ts b g n r hh a sp l a ya ni m p o r t a n tr o l ei nt h e e a r l yl a r v a ld e v e l o p m e n to ft h eg r o u p e r i no r d e rt og e tf u r t h e ri n f o r m a t i o na b o u tf u n c t i o no fg b r hi nt h eo r a n g e s p o t t e d g r o u p e r , ae d n as e q u e n c ee n c o d i n gt h eg n r hr e c e p t o r ( g n r h r ) w a so b t a i n e df r o m p i t u i t a r yb yp c r t h ef u l l l e n g t hc d n ac o n s i s t so f1 9 2 1 b pa n dh a sa no r fo f 1 2 7 8 b p ，w h i c he n c o d e da4 2 6 - a m i n o a c i dp r o t e i n t h e5 - u n t r a n s l a t e dr e g i o ni s 3 0 1 b pl o n ga n dt h e3 - u n t r a n s l a t e dr e g i o ni s3 4 2 b pi n c l u d i n gt w op o l y a d e n y l m i o n s i g n a l s ( a a t a a aa n da t t a a a ) a n dap o l y ( a ) t a i l as m a r t ( s i m p l em o d u l a r a r c h i t e c t u r er e s e a r c ht 0 0 1 ) a n a l y s i si n d i c a t e dt h a tt h eg r o u p e rg n r h ri sas e v e n t r a n s m e m b r a n ep r o t e i nc o n s i s t e do fa5 0 - a m i n o a c i dn t e r m i n u se x t r a c e l l u l a rd o m a i n 。 a2 8 4 一a m i n o a c i dt r a f l s m e m b r a n ed o m a i na n da 9 1 a m i n o a c i dc t e r m i n u s i n t r a c e u u l a rd o m a i n ，w h i c hb e l o n g st ot h er h o d o p s i n - l i k eg p r o t e i nc o u p l e dr e c e p t o r ( g p c r ) f a m i l y t h eh o m o l o g ya n a l y s i ss h o w e dt h a ti th a sah o m o l o g yo f8 9 w i t h a m b e r j a c k ( s e r i o l ad u m e r i l i i ) g n r h ra n d8 8 w i t he u r o p e a ns e a b a s s ( d i c e n t r a r c h u sl a b r a x ) g n r h r p h y l o g e n e t i ct r e ei n d i c a t e dt h a tt h eg r o u p e rg n r h r h a st h eh i g h e s ts i m i l a r i t yw i t ht h ea m b e r j a c k ，t h e nm i d d l es i m i l a r i t yw i t he u r o p e a n s e a b a s sa n ds t r i p e ds e a b a s s ，w h i l el o w e rs i m i l a r i t yw i t hm a m m a l s u c hr e s u l ti s t h e s a n l ea st h ea b o v eh o m o l o g ya n a l y s i sd a t a u s i n gs e m i - q u a n t i t a t i v er t - p c ra n d 脚 何绮云中山大学硕士学位论文2 0 0 5 年5 月 s o u t h e r nb l o t ，i tw a sf o u n dt h a tt h eg n r h rm r n aw a sp r e s e n tw i d e l yf r o mb r a i nt o p e r i p h e r a ld s s u e s ，w h i l et h es i g n a li nt h ep i t u i t a r yi ss t r o n g e rt h a no t h e r s i no r d e rt od e t e c tt h ed i s t r i b u t i o no ft h em a t u r eg n r h r p r o t e i ni nt h eg r o u p e rb y i m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o d ，t h eg n r h r a n t i b o d yi sn e e d e d s ot h eg n r h ro r f w a ss u b c l o n d e di n t ot h ep e t 一2 2 b e x p r e s s i o nv e c t o rt oc o n s t r u c tar e c o m b i n a n t e x p r e s s i o nv e c t o rg g a r h r p e t - 2 2 b r e s t r i c t i o ne n z y m a t i cd i g e s t i o no ft h i s r e c o m b i n a n tv e c t o rc a n g a i nt h er l a g r r e n t sa sl o n ga st h eg n r h ro r fa n dt h ep e t - 2 2 b v e c t o r i tm e a n st h a tt h er e c o m b i n a n te x p r e s s i o nv e c t o rw a ss u c c e s s f u l l yc o n s t r u c t e d f u r t h e rs t u d yw i l lb ep e r f o r m e do nt h ee x p r e s s i o no fg n r h r i ne c o l i k e yw o r d s ：o r a n g e s p o t t e dg r o u p e r ( e p i n e p h e l u sc o i o i d e s ) ，g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n g h o r m o n e ( g n r h ) ，g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n gh o r m o n er e c e p t o r ( g n r h r ) ，c d n a c l o n i n g ，e x p r e s s i o n v 堡笪墨主坐奎兰堡圭兰垡鎏茎丝堕! ! 星 缩略词 a m p 氨苄青霉素( a m p i c i l l i n ) b d碱基对( b a s ep a i r ) c d n a 互补d n a ( c o m p l e m e n t a r yd n a ) d d h ，o双蒸水( d o u b l ed i s t i l l e dw a t e r ) d e p c 焦碳酸二乙酯( d i e t h y lp y r o c a r b o n a t e ) d n t p 脱氧核糖核苷三磷酸( d e o x y r i b o n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t e ) e b 溴化乙锭( e t h i d i u mb r o m i d e ) e c d细胞外区( e x t r a c e l l u l a r d o m a i n ) e c o l i 大肠杆菌( e s c h e r i c h i ac o i l ) e d t a 乙二胺四乙酸( t h y l e n ed i a m i n e t e t r a a c e t i ca c i d ) f s h 卵泡刺激素( f o l l i c u l a rs t i m u l a t e dh o r m o n e ) g h 生长激素( g r o w t hh o r m o n e ) g n r h 促性腺激素释放激素( g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n gh o r m o n e ) g n r h r 促性腺激素释放激素受体( g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n gh o r m o n er e c e p t o r ) i p t g 异丙基硫代一b d 一半乳糖苷( i s o p r o p y l t h i o - b d g a l a c t o s i d e ) k b 千碱基对( k i l o b a s e ) k d a千道尔顿( k i l o d a l t o n ) l h 黄体生成素( 1 u t e i n i z i n gh o r m o n e ) m e 巯基乙醇( m e r c a p t o e t h a n 0 1 ) m e s 2 一( n - 吗啡代) 乙磺酸( 2 - n m o r p h o l i n o e t h a n e s u l f o n i ca c i d ) m o p s 3 ( n 吗啡代) 丙磺酸( 3 一( n - m o r p h o l i n o ) p r o p a n e s u l f o n i ca c i d ) m r n a 信使r n a ( m e s s e n g e r r n a ) n c 硝酸纤维素膜( n i t r o c e l l u l o s em e m b r a n e ) o d 光密度( o p t i c a ld e n s i t y ) o r f 开放阅读框( o p e nr e a d i n gf r a m e ) p c r 聚合酶链式反应( p o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n ) r p m 每分钟转速( r e v o l u n t i o n sp e rm i n u t e ) s d s 十二烷基硫酸钠( s o d i u md o d e c y l s u l f a t e ) s d s p a g e 聚丙烯酰胺凝胶电泳( s d s p o l y a c r y l a m i d eg e le l e c t r o p h o r e s i s ) t e t r i s e d t a 缓冲液( t d s e d t a b u f f e r ) t r i s 三( 羟甲基) 氨基甲烷( t r i s ( d r o x y m e t h y l ) 一a m i n o m e t h a n e ) v 电压( v o l t a g e ) x g a l5 溴4 氯3 吲哚8 d 半乳糖苷( 5 - b r o m e 4 c h l o r o 一3 i n d o l y l 0 一d g a l a c t o s i d e ) 1 0 2 何绮云中山大学硕士学位论文2 0 0 5 年5 月 刖舌 促性腺激素释放激素( g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n gh o r m o n e ，g n r h ) 是十肽的蛋白 激素，作用是刺激垂体合成和释放黄体生成素( l u t e i n i z i n gh o r m o n e ，l h ) 和促 卵泡激素( f o l l i c l es t i m u l a t i n gh o r m o n e ，f s h ) 。近十年来，由于分子遗传学的迅 速发展，g n r h 已被证明是下丘脑一垂体性腺轴( h y p o t h a l a m u s p i t u i t a r y g o n a d a l a x i s ，h p g 轴) 的关键信号分子，对生殖过程的神经内分泌调控起中心作用。而 g n r h 的类似物、激活物及拮抗物的发现，更促进了g n r h 生理功能的研究。 g n r h 主要通过与垂体前叶的促性腺激素分泌细胞( 嗜碱细胞) 细胞膜上的 特异受体相互作用，启动信号传导来发挥作用。g n r h 及其受体广泛分布于神经 组织和非神经组织中，与此一致，其介导的生物学活性也多种多样。g n r h 不仅 是神经内分泌因子中刺激促性腺激素( g o n a d o t r o p i n ，g t h ) 释放的主要因子，还 是保守的神经递质( n e u r o t r a n s m i t t e r ) 和神经调节剂( n e u r o m o d u l a t o r ) 。此外， 它在垂体外生殖组织( 如卵巢) 的自分泌，旁分泌( a u t o c r i n e p a r a c r i n e ) 调节中也 发挥作用。 1 斜带石斑鱼简介 1 1 分类地位 脊椎动物门、辐鳍鱼纲( a c t i n o p t e r y g i i ) 、新真骨鱼类( n e o t e l e o s t s ) 、棘 鳍鱼总目、鲈形鱼系( p e m o m o r p h a ) 、鲈形目( p e r c i f o r m e s ) 、鲈亚目( p e r c o i d e i ) 、 鲈总科( p e m o i d e a ) 、箱科( s e r r a n i d a e ) 、石斑鱼亚科( e p i n e p h e l i n a e ) 、石斑 鱼属( e p i n e p h e l u s ) 、斜带石斑鱼( e p i n e p h e l u sc o i o i d e s ) ( 李明德，1 9 9 8 ) 。 1 2 分类特征及分布 背鳍具ll 根棘。背鳍棘几等于最长鳍条：臀鳍8 - 9 根。腭骨具牙。侧线管 无分支。头和身体的背部呈棕褐色，腹部底纹呈白色：无数橙褐色或红褐色的小 点分布于头、身体和鲳条的中部，故英文名为o r a n g e s p o t t e dg r o u p e r 。身体上有 5 大不规则的、间断的、向腹部分叉的黑斑；第一个黑斑在前背鳍棘的下方，最 后的黑斑在尾柄上；2 个黑斑在中鳃盖，丽另外的i 2 个在次鳃盖和中鳃盖的衔 接处。当暴露于空气中时橙色点变为褐色，而在防腐剂中则变得模糊。斜带石斑 堡箜重主坐查兰堡主兰垡笙苎! ! 堕兰i 星 鱼主要分布于北太平洋西部沿海近礁海域，广东沿海皆有分布。常栖息于大陆沿 岸和大岛屿，但在河口、离岸1 0 0 米深的水域中也有发现。 2 g n r h 的研究进展 2 1g n r h 的种类和结构特点 1 9 7 1 年s h a l l y 和g u i l l e n m i n 从猪的下丘脑首先分离得到促性腺激素释放激 素( g o n a d o t r o p i n r e l e a s i n g h o r m o n e ，g n r h ) 并由此获得诺贝尔奖( s h a l l ye ta 1 ，1 9 7 1 g u i l l e n m i ne ta 1 。1 9 7 1 ) 。至今，人们从各种脊椎动物和原索动物中已鉴别出至少 2 4 种g n r h 的分子结构( 林浩然，2 0 0 4 ) ，而“一个物种中存在多种不同g n r h 形 式”的观点已经为人们所广泛接受。 在已知的g n r h 中，1 4 种来自脊椎动物，l o 种来自无脊椎动物，它们的分 子结构如表l ( 林浩然，2 0 0 4 ) 。除章鱼g n r h ( o c t og b r h ) 夕f ，所有的g t t r h 都 由l o 个氨基酸组成，其中氨基端1 4 位氨基酸和羧基端9 1 0 位氨基酸十分保守， 其它部位的氨基酸可变。前三位氨基酸对于g n r h 刺激g t h 释放的功能是必要 的，而氨基末端和羧基末端的氮基酸刚与g n r h 受体配位结合的紧密程度有关 ( m i l l a re ta 1 ，1 9 9 4 ) 。g n r h 的1 0 个氨基酸有不同的功能，以哺乳类g n r h 为 例，它的氨基酸序列为焦谷i 一组2 色3 一丝一酪5 甘6 亮，一精8 一脯9 甘 1 0 甘6 一亮7 肽键主要起稳定g n r h 结构的作用，而组2 则为表现活性所必需( 胡 健饶。2 0 0 1 ) 。 阳离子交换与亲和层析和高压液相色谱表明，鱼类、爬行类和鸟类的g n r h 相似，而两栖类和哺乳类的g n r h 相似。对一些硬骨鱼类下丘脑提取物的层析 和免疫反应研究证明，它们的g n r h 和哺乳类的g n r h 虽有相似的化学结构， 但并不一样，推想是在十肽的第七和或第八位氨基酸不同。( 林浩然，1 9 9 9 ) g b r h 分子的长度及部分氨基酸序列在脊椎动物近5 亿年的进化过程中保持 不变，表明这些保守的分子结构对g n r h 肽的生物活性和构象、与受体结合、 对酶解的抵抗力等起重要作用。 2 何绮云中山大学硕士学位论文2 0 0 5 年5 月 a i r hi 2j4j67891 0 窨惟动精 精乳类p g u h s 卸r 耻 g y l 眦 衄陆嘶m 鼍 释爱pgu伽脚 r 即 g y 栅 胁脚m 鹛i p g h j 唧 rm g y l “n n肠 母n 琏 蛙pgu 晡， 卸 r t y r 嘶 l “ 邱 唧m 辋照pqu 住s 卸 岛r m母 l hr 阳o ，n 礓 鲣煎pgui - i , 郦 曼r 耻q y卸 h u舳脚隅 臼懿pgu 肫- 卸 船 伽 g y 蛔 脑脚m 制p g u l t - 却r a y l “ 船肺脚毗 峙趣p mm 饰 rm a y l ma m脯啡m 鳟燕pgu 1 - 1 1 唧 r踟 d yl 唧鼢 脯o ，n 砖 髑珏 p n u l - l l 郁 船r h j a y 卸m 啡m 置鱼pau 珏- 坤 r| 五 yml c t瞻 a ，n 七麓鳞睢 p a ui - i s 郦 rh i 钾卸 l ” 陆啡叭 者塑击_ j 鱼_ 堡l _ 堑- 垒l l 坐一坐 血b堕生墼 无脊椎新糯 章鱼 p n i l 舡砸 1 - i j盹鱼ra m 母 卸 雎i 跏 a ，n 砖 塑i p g u 住- 啷 盎r 知耐 l ” 胁 啡n 删l p g 玮 鄙 rl c 勘 晤。p b a 二n 强 海辅皿p g u l i - 1 】pr 啊n u盹 a ，n 心 潮嘲w p a u 强- 卸盎fa 孤n n l 明n r陆 a 二啪 绷v p o u i - t 唧 岛r 砸 a u m畔n h 黼m p g u 埔 卸 鱼r 如 a ym 蛔啡 嵩柏疆 p a n l - 1 却鱼r 砸 l - l “鼯k o ，n 如 洲砸p m1 4 i j 唧 生r l m l -h 鼯陆m m j 盥且山l j l l j l 鱼l 一纽函l 避出 脑坠墼 表1 g n r h 的分子结构 一般认为，硬骨鱼类存在至少两种类型的g n r h 。其中，c h i c k e nt y p e i ig n r h ( c g n r h - i i ) 是最普遍分布的一种，所有研究的鱼类都有c g n r h i i ，所以它是 非常保守的。通常来说，存在两种g n r h 的硬骨鱼，其另一种g n r h 为种属特 异性的g n r h 类型。这种特异性的g n r h 类型。在鲑科鱼类和鲤科鱼类为s a l m o n g n r h ( s g n r h ) ，鲶鱼为c a t f i s hg n r h ( c f g n r h ) ，鳗鲡为m a m m a lg n r h ( m g n r h ) 。 来自不同脊椎动物的许多证据表明，在脊椎动物的神经系统中至少有两种 不同形式的g n r h ，面在部分硬骨鱼中则存在3 种不同形式的g n r h ( w h i t ee ta 1 1 9 9 5 ；n a b i s s ie ta 1 ，2 0 0 0 ；a m a n oe ta 1 ，2 0 0 2 ；d u b o i se ta 1 2 0 0 2 ；s o m o z ae ta 1 2 0 0 2 ) 。间接证据显示在哺乳动物牛、兔甚至包括人类和水豚等神经组织中也可 能存在3 种不同形式的g n r h ，由此推测在脊椎动物中3 种不同形式g n r h 共存 可能是一个普遍现象( f e r n a l de ta 1 ，1 9 9 9 ：o k u b oe ta 1 。2 0 0 0 a ：s o m o z ae ta 1 何绮云中山大学硕士学位论文2 0 0 5 年5 月 2 0 0 2 ) 。鲈形目的硬骨鱼是第一种被鉴定出三种g n r h 并存的脊椎动物。p o w e l l 等( 1 9 9 4 ) 首先在金头鲷( s p a r u s a u r a t a ) 的脑中鉴定出三种g n r h ，即c g n r h i i ， s g n r h 及第三种新的g n r h 分子类型，命名为s e a b r e a mg n r h ( s b g n r h ) 。以 下各物种中均发现s b g n r h 的存在：a f r i c a nc i c h l i d ，h a p l o c h r o m i sb u r t o n i ( p o w e l l e ta 1 ，1 9 9 5 ；w h i t ee ta 1 ，1 9 9 5 ) ；r e ds e a b r e a m ，p a g r u sm a j o r ( o k u z a w ae ta 1 ，1 9 9 7 ) ； t i l a p i a ，o r e o c h r o m i sm o s s a m b i c u s ( w e b e r e ta 1 ，1 9 9 7 ) ：e u r o p e a ns e a b a s s ， d i c e n t r a r c h u sl a b r a x ( g o n z i l e z - m a r t f n e ze ta 1 ，2 0 0 1 ) ；s t r i p e ds e a b a s s ，m o r o n e s a x a t i l i s ( h o l l a n de ta 1 ，2 0 0 1 ) , t u r b o t ，s c o p h t h a l m u sm a x i m u s ( a n d e r s s o ne ta 1 ， 2 0 0 1 ) ：g r a s sr o c k f i s h ，s e b a s t e sr a s t r e l l i g e r ( c o l l i n se ta 1 ，2 0 0 1 ) 。 近年来在鱼类中又发现了新的g n r h 形式。一般来说，有三种形式g n r h 的鱼类，可以有c g n r h i i 、s g n r h 和种属特异的g n r h ，而第三种g n r h 类型 变化较大。在p a c i f i ch e r r i n g ，c l u p e ah a r e n g u sp a l l a s i 和m e d a k a o r y z i a sl a t p e j 中，第三种g n r h 分别是h e r r i n gg n r h ( h r g n r h ) 和m e d a k ag n r h ( m d g n r h ) ( c a r o l s f e l de ta 1 ，2 0 0 0 ；o k u b oe ta 1 ，2 0 0 0 b ) 。 g n r h 通常都以其最先鉴别出来的动物命名，而f e m a l d 和w h i t e ( 1 9 9 9 ) 提 出了一种新的命名方式，即根据g n r h 序列的比较，把在脑组织中分布的g n r h 分为g n r h - i 、g n r h i i 、g n r h h i ( 见表2 ) 。其中，g n r h i 是出现在下丘脑 而作用于垂体的种特异的g n r h ，如人m g n r h 和鲷鱼s b g n r h