（生态学专业论文）鸟类疟原虫形态、流行病学及pcr检测方法的研究.pdf

鸟 类疟原虫形态、流行病学及p c r检测方法的 研究 广 东 疟 原 虫 : 属 诺 维 亚 属 ， j o c o s u s ) , 步 性 较 差 。 自然感染率是 1 0 % . 寄生 于红耳鸭 ( p y c n o n o t u s 裂 体 生殖 周 期 是 2 4 小 时 ， 同 该疟 原虫 红 内期 寄 生 于 成 熟 红 细 胞 内 ，环 状 体 一 般 位 于 寄主 细 胞 的亚 极 ，而 滋 养 体 则 多数 分布 于 寄 主细 胞 的 一极。两性配子体长形，不包 核 。成熟裂殖体含有 4 - 8个裂 殖 子，并有 一颗恒 定的疟色 素粒 ，没有 “ 领带 结 ”结构 ，裂殖 子没有 折 光 球 ，成熟 裂 殖体 儿 乎 观察 不 到 细胞 质 。该 寄 生 虫 红外期一般 寄生于红耳鸭的肺 ，肝和 肾。在致倦库蚊体 内仅 能发育成卵囊，在蚊唾液腺 中观察不到子抱 子。在实验调 查 中该疟 原虫仅 寄生 于红耳鸭 。 待定种 ( p l a s m o d i u m s p . ) 1 .该虫寄生于大杜鹃 ( c u c u l u s c a n o r u s )， 成熟裂殖体儿乎观察不到细胞质 ，含有 3一 6个 裂殖子，裂殖子为长条形，裂体生殖周期是 2 4小时，但 同步 性较 差 。两 性 配子 体 为 长形 。 从 红 内期 的观 察来 看 ，该疟 原 虫应属 于诺 维 亚属 。 待定种 ( p l a s m o d i u m s p . ) 2 . 寄生于红喉姬鹅，红 内期一般 寄 生于成熟 红细胞 ，成 熟裂 殖 体 含 2 - 3个 裂殖 子 。两性 配 子 体均很大，且为环形 ，将寄主红细胞核包裹于其 中，因在 红 内期 内有裂 体生殖 发生 ，故把 它 归 为疟 原虫 。 在形态及流行病学研究的基础上，对江 氏等 6种疟原虫进 行 p c r检测实验 以引物 8 9 和引物 9 0 , ，以及引物 5 7 0 和引物 5 6 6 进行扩增。通过一系列的阴性和阳性对照实验 ，在镜检 为 阳性的血液样品中均能扩增得到大约 5 8 0 6 p的 d n a片段，而 在 镜检 为 阴 性 的血 液 样 品 中 却 没有 这 一 片 段 。所 用 引物 的 设 计是依据哺乳类疟原虫的 p c r扩增引物以及 s i n g e r 1 9 8 9所 厕的鸡疟原虫的保守序列而设计的。p c r检测技术在哺乳类疟 原 虫 的检测 中 己得 到 广 泛应 用 ， 而在 鸟类 疟 原 虫 的检 测 与 诊 断 中 ， 目 前 还 没 有 见 报 道 几 通 过对 云南 大理 部分鸟类 疟 原虫感 染 的调 查表 明 ，候 鸟 的 感 染率 高 于 留 鸟的感 染 率 ，成 鸟 的感 染 率 高 于幼 鸟和 亚 成 体 云南大学博士论文 鸟的感 染率 。 关键 词 :鸟疟原虫 ，斑 坞疟 原 虫 ，异核疟 原 虫 ，广 东疟原 虫 ，p c r诊 断 鸟 类疟原虫形态、流行病学及p c r检测方 法的 研究 a b s t r a c t i n t h i s p a p e r ， t h e s u r v e y a n d r e s e a r c h o f a v i a n m a l a r i a i n r e s i d e n t a n d m i g r a n t b i r d s a r e c a r r i e d o u t i n g u a n g d o n ga n dy u n n a n p r o v i n c e , i n c l u d i n g 5 1 s p e c i e sb i r d s , 3 5 6 i n d i v i d u a l b i r d s , f i n d i n g 6 s p e c i e s o f p l a s m o d i u m w h i c h a r e p l a s m o d i u m j i a n g , p . s t r e p t o p e l i a , p . h e t e r o n u c l e a r e , p . g u a n g d o n g e n s l s , a n d u n t i t l e d s p e c i e s , a m o n g t h e m , p . s t r e pt o p e l i a , p . h e t e r o n u c l e a r e a n d p . g u a n g d o n g e n s l s a r e n e w s p e c i e s . p l a s m o d i u m s t r e pt o p e l i a i s o b s e r v e d i n s t r e p t o p e l i a d e c a o c t o f i r s t l y , b e l o n g i n g t o s u b g e n u s g i o v a n n o l a i a ， n a t u r a l i n f e c t e d r a t e i s 1 0 % . g a m e t o c y t e s h a v e d i f f e r e n t m o r p h o l o g y b e t w e e n t h e m a l e a n d t h e f e m a l e , b o t h l a r g e a n d e l o n g a t e , t h e m a c r o g a m e t o c y t e c u r l r o u n d t h e h o s t c e l l n u c l e u s , b u t t h e m i c r o g a m e t o c y t e d o n o t c u r l r o u n d . t h e m a c r o g a m e t o c y t e a n d m i c r o g a m e t o c y t e d i l a t e t h e h o s t c e l .t h i s p a r a s i t e p r e s e n t s s y n c h r o n o u s a s e x u a l i n t h e t h e b l o o d，s h o w i n g a p e r i o d i c i t y o f 2 4 h o u r . i n g e n e r a l ， t h i s m a l a r i a p a r a s i t e s i n t h e m a t u r e o r n e a r l y m a t u r e e r y t h r o c y t e s , s c h i z o n t s u s u a l l y l a r g e，o c c u r r e i n m a t u r e e r y t h r o c y t e s w i t h m o r e 2 0 m e r o z o i t e s m o s t c o m m o n l y a r r a n g e d i n m a s s . t h e m a t u r e o r n e a r l y m a t u r e s c h i z o n t o f t e n w a s o f t e n n o t o b s e r v e d t h e c y t o p l a s m . d u r i n g e x o e r y t h r o c y t i c s c h i z o g o n y , p l a s m o d i u m s t r e p t o p e l i a w e r e o b s e r v e d i n t h e l i v e r , l u n g a n d k i d n e y o f s t r e pt o p e l i a d e c a o c t o . t h i s p a r a s i t e s h a v e n o s e n s i t i v e t o c u l e x p i p i e n s f a t i g a n s . ，a n d t h e c y s t s o f t h i s p a r a s i t e w a s f o u n d i n i t s m i d g u t o n l y . t o h o s t s p e c i f i t y , t h i s m a l a r i a w a s o n l y o b s e r v e d i n s t r e pt o p e l i a d e c a o c t o , b u t i n a r t i f i c i a l i n f e c t i o n，o t h e r b i r d s c a n n ot b e i n f e c t e d 云南大学博士论文 w i t h t h i s p a r a s i t e . p l a s m o d i u m h e t e r o n u c l e a r e p a r a s i t e s i n b a m h u s i c o l a t h o r a c i c a , i s p l a c e d i n s u b g e n u s n o v y e l l a , n a t u r a l i n f e c t e d r a t e i s 3 0 % . t h e c y c l e o f s c h i z o g o n y o f t h i s p a r a s i t e s i s 2 4 h o u r s , i t h a s h i g h l y s y n c h r o n i c i t y i n t h e i r d e v e l o p m e n t i n t h e b l o o d . d u r i n g a s e x u a l s t a g e s i n t h e b l o o d s a n d p a r a s i t e s i n t h e m a t u r e o r n e a r l y m a t u r e r e d c e l l . t h e r i n g 一 b o d y a n d t r o p h o z o i t e s u s u s a l l y b e c o m e l o c a l i z e d a t o n e p o l e o r s u b p o l e o f h o s t r e d c e l l ，a n d o f t e n c o n n e c t w i t h t h e n u c l e u s o f h o s t c e l l . t h e m al e a n d f e m a l e g a m e t o c y t e s a r e e l o n g a t e， a n d d o n o t c u r l r o u n d t h e h o s t r e d c e l l n u cl e u s . t h e m a t u r e s c h i z o n t c o nt a i n s 2 - 6 m e r o z o i t e s , i n a s a m e s c h i z o n t , t h e m e r o z o i t e s h a v e d i s t i n c t d i f f e r e n c e i n d i m e n s i o n , t h e s c h i z o n t s h a v e n o p i g m e n t g r a n u l e , a n d d o n o t t e n d t o t h e p o l e o f r e d c e l l t o o . t h e m a t u r e s c h i z o n t s h a v e l i t t l e c y t o p l a s m . d u r i n g e x o e r y t h r o c y t i c s c h i z o g o n y , t h e m a l a r i a s m a i n l y p a r a s i t e i n t h e l u n g , l i v e r a n d k i d n e y o f h o s t . t o c u l e x s p . s e n s i t i v e ; t h e p a r a s i t e s o n l y d e v e l o p c y c s t i n t h e m i d d u c k o f m o s g i t o , a n d n o t b e c o m e s p o r o z o i t e . a t p r e s e n t , b a mh u si c o l a t h o r a c i c a a n d fi c e d u l a f u s c at u s c a n i n f e c t t h i s p a r a s i t e o n l y . p l a s m o d i u m g u a n g d o n g e n s i s p a r a s i t e s a t p y c n o n o t u s j o c o s u , c l a s s i f y i n t o s u b g e n u s从， v y e l l a , n a t u r a l i n f e c t e d r a t e i s 1 0 % . t h e c y c l e o f s c h i z o g o n y i s 2 4 h o u r s , w i t h s l i g h t s y n c h r o n i c i t y i n t h e i r d e v e l o p m e n t i n t h e b l o o d . d u r i n g a s e x u a l s t a g e s i n t h e b l o o d , i t o c c u r i n t h e m a t u r e e r y t h r o c y t e , a n d i t s r i n g - b o d y l o c a l i z e s a t t h e s u b p o l e o f t h e h o s t r e d c e l l ，a n d t h e t r o p h o z o i t e a t o n e p o l e . t h e m a c r o g a m e c y t e a n d m i c r o g a m e c y t e a r e e l o n g a t e a n d 鸟 类疟原虫形态、流行病学及p c r 检测方法的研究 i r r e g u l a r b o d i e s , n o t c u r l r o u n d t h e h o s t c e l l n u c l e u s . t h e m a t u r e s c h i z o n t c o n t a i n s 4 一 8 m e r o z o i t e s , w i t h o n e p i g m e n t g r a n u l e , t h e y h a r d l y b e o b s e r v e d t h e c y t o p l a s m , n o t t e n d t o t h e p o l e o f h o s t c e l l a n d h a s n o t h e t i e s t r u c t u r e i n t h e m a t u r e s c h i z o n , t h e m e r o z o i t e h a s n o r e f r a c t i v e g l o b u l e . d u r i n g e x o e r y t h r o c y t i c s c h i z o g o n y , t h i s m a l a r i a u s u a l l y p a r a s i t e s i n t h e b r a i n , l u n g , l i v e r , a n d k i d n e y . i n c u l e x s p . i t c a n o n l y d e v e l o p i n t o c y s t . a t p r e s e n t ， i t i s o n l y s e n s i t i v e t o p y c n o n o t u s jocosus u n t i t l e d s p e c i e s . o n e :i t p a r a s i t e i n c u c u l u s c a n o r u s , t h e m a t u r e s c h i z o n t h a s l i t t l e c y t o p l a s m，c o n t a i n i n g 3 一 6 m e r o z o i t e s w h i c h i s b a r i n m o r p h o l o g y . t h e c y c l e o f s c h i z o g o n y i s 2 4 h o u r s , a n d t h e s y n c h r o n i c i t y o f d e v e l o p m e n t i s s l i g h t . t h e f e m a l e a n d m a l e g a m e t o c y t e a r e e l o n g a t e . b a s e d o n t h e s t u d y o f a s e x u a l s t a g e s i n t h e b l o o d , t h i s p a r a s i t e b e l o n g s t o s u b g e n u s n o v y e l l a . u n t i t l e d s p e c i e s , t w o :i t p a r a s i t e s i n f i c e d u l a f u s c a t u s . d u r i n g a s e x u a l s t a g e s i n t h e b l o o d , t h i s m a l a r i a o c c u r s i n m a t u r e r e d c e l l ， a n d i t s m a t u r e s c h i z o n t g e n e r a l l y p r o d u c e s 2 一 3 m e r o z o i t e s . t h e m a l e a n d f e m a l e g a m e t o c y t e a r e l a r g e ， a n d c u r l r o n d t h e p o l e s o f t h e h o s t c e l l n u c l e u s , a n d m e e t e a c h o t h e r . b e c a u s e o f o b s e r v i n g t h e s c h i z o g o n y i n b l o o d , i t i s c l a s s i f i e d i n t o g e n u s p l a s m o d i u m b a s e d o n t h e s t u d y o f m o r p h o l o g y a n d e p i d e m i o l o g y o n t h e m a l a r i a ， w e h a v e s t u d i e d t h e p c r e x a m i n a t i o n a n d d i a g n o s i s m e t h o d s o n p l a s m o d i u m j j a n g j , p . s t r e pt o p e l i a p . h e t e r o n u c l e a r e , p . g u a n g d o n g e n s i s , a n d t w o s p e c i e s u n t i t l e d . a f t e r t o t a l d n a i s e x t r a c t e d , a n d a d d t o p r i m e r 云南大学博士论文 8 9 a n d 9 0 ， p r i m e r 5 7 0 a n d 5 6 0 r e s p e c t i v e l y , a n d o b t a i n d n a p c r p r o d u c t i o n . t h r o u g h a s e r i o u s c o n t r a s t t e s t o f t h e p o s i t i v e a n d n e g t i v e , t h e p o s i t i v e s a m p l e u n d e r s c r e e n e x a mi n a t i o n , c a n p r o d u c e a b o u t 5 8 0 b p d n a s e g m e n t ， b u t t h e n e g t i v e s a m p l e u n d e r s c r e e n e x a m i n a t i o n , n o t o b t a i n e d d n a s e g m e n t . t h e d e v i c e o f p r i m e r s i s b a s e d o n t h e p c r p r i m e r o f m a m m a l m a l a r i a p a r a s i t e s a n d t h e c o n s e r v a t i v e s e q u e n c e p l a s m o d i u m g a l l i n a c e u m ( s i n g e r 1 9 8 9 ) ， p c r d i a g n o s i s m e t h o d h a s b e e n a p p l i e d t o t h e e x a m i n a t i o n o f m a m m a l m a l a r i a , b u t n o t b e r e p o r t e d o n a v i a n m al a ri a . i n t h i s p a p e r , t h e s u r v e y o f a v i a n m a l a r i a i n r e s i d e n t a n d m i g r a n t b i r d s w e r e c a r r i e d o u t i n g u a n g d o n g a n d y u n n a n p r o v i n c e s , t h e i n v e s t i g a t i o n r e s u l t s s h o w t h a t t h e i n f e c t i n g r a t i o o f mi g r a n t bi r d s m a l a r i a i s h i g h e r t h a n o f t h e r e s i d e n t b i r d s , a n d t h e h i g h e r i n f e c t i n g r at i o o f t h a n t h at of t h e .1s t h a t t hemat ure p r e m at u r e b i r d s m al a r i a bi rds k e y w o r d s pt o p e l i a , d i a g n o s t i c :a v i a n m a l a r i a l p a r a s i t e 尸l as modi u m st re一 p . h e t e r o n u c l e a r e , p . g u a n g d o n g e n s i s , p c r met hod. 鸟 类疟原虫形态、流行病学及p c r检测方法的研究 第一章 绪 论 鸟类疟原虫在分类上属 原生动物的一个 类群，是鸟类常 见 的 血 液 和组 织 寄 生 虫 ，在 寄 主的组 织 和 血 细 胞 内经 过 几个 不 同的发育阶段，并通过蚊子， 主要是伊蚊和库蚊传播。鸟疟 原虫是一类世界性分布的寄生虫，全世界鸟类的感染率超过 2 5 % ( b e n n e t t e t . a l . , 1 9 8 2 b ) 。不同种类的鸟感染疟原虫的 比 例 有 相 当 大 的 差 异 ， 如 雀 科 ( f r i n g i i i i d a e ) , 鹤 亚 科 ( e m b e r i z i o a e ) ，掠 鸟科 ( s t u r n i d a e ) 感染率 比较 高，而鸥科 ( l a t i d a e ) ,鹏 科 ( s c o l o p a c i d a e ) ，海雀科 ( a i c i d a e ) 感 染率 则很低 ，这可 能与寄主对 寄生虫的敏感性 ，寄主对蚊子的驱 避行为和鸟的栖息环境等诸多因素有关。但是，环境条件， 尤 其是气候因子和有无适 当的传播 媒体存在等 因素是造成鸟 疟 原虫感 染差异 的重要 原 因。 鸟类疟原虫首次在俄罗斯被发现 ( d a n i l e w s k y , 1 8 8 5 ) d a n i l e w s k y对这种寄生虫进行 了形态描述，而且将它对鸟类 的 影 响 作 了记 录 。 另外 ，还 阐述 了鸟疟 原 虫 在 新 鲜血 液 中小 配子的形成过程 。但在随后的研究中，鸟疟 原虫与血变虫之 间造成 了相 当的混淆 ，因为在 大多数情况下 ，从有性体的形 态上，很难将疟原虫与血变虫区别开。 m a c c a l l u m ( 1 8 9 8 ) 证实 了配子体发育形成过程 以及发现了 寄生虫的有性周期和大小配子体的存在。同年 r o s s解开了另 一 个 疟 原 虫研 究 的迷 团 ， 即疟 原虫 的传 播 途 经 ，他 首先 追踪 了残 疟 原 虫 ( p l a s m o d i u m r e l i c t u m )在 一 种 “ 恢 ”蚊子 ( 后 来证实这种蚊子是一种库蚊 ( c u l e x p i p i e n s f a t i g a n s )的 发 育情 况 ( g a r n h a m 1 9 6 6 ) , r o s s用 这 种蚊 子 血 餐感 染 了疟 原 虫 的麻 雀 ，再用 血 餐 后 的蚊 子叮咬 不带 疟 原 虫 的麻 雀 ，结 果 疟疾 感 染 能被传递 ，终于 证 明蚊 子是疟 原虫 的传播媒 体 。 随着研究的不断深入 ，a r a g a o ( 1 9 0 8 ) 描述 了疟原虫在鸟组 云南大学博士论文 织 内的无性生殖过程 ，首先发现疟原虫的无性生殖阶段是在 鸟肺 部 血 管 的 内皮细 胞 内 。这 一 发现 从 后来 在 几种 鸟疟 原 虫 的研究结果中得到证实( h u f f , 1 9 3 5 ; r a f f a e l e , 1 9 3 6 b ; j a m e s 和 t a t e , 1 9 3 7 ) 第一节 鸟疟原虫生活史 生 活 史的研究是 寄 生虫 研 究 中的重要组 成部 分 ，对 鸟类 疟 原虫的研究也不例外 ，通 过对 鸟类多种疟原虫的研究发现 ， 目前 已知的鸟类疟原 虫都有相似的生活史，在整个生活史 中 都必须拥有脊椎动物 寄主和无脊椎动物 寄主，脊椎动物寄主 是鸟类 ，无脊椎动物 是蚊 子，鸟类疟原虫在蚊 子体 内达到性 成熟 ，形成 子抱子，子抱 子通过蚊子叮咬进入鸟体 内，在 鸟 体 内完成无性阶段的发育 ，并开始了有性阶段的发育，形成 雌雄配子体 ，在蚊子 叮咬鸟体时，雌雄配子体随血液进入蚊 子体内，并在蚊子的中肠内结合发育成卵囊。 鸟类疟原虫中残疟原虫生活 史是首先被研究清楚的，因 此 ，残疟原虫的生活 史就充当了鸟类疟原虫生活史的模式 。 研究发现脊椎动物寄生阶段始 于感染了疟原虫的库蚊对鸟的 叮咬，在蚊 子体内发育成熟的子抱子随蚊子的唾液分泌物 一 起进 入鸟的血液，并 随血 液循环进入相应 的组织细胞 内，子 抱子侵入适 当的细胞后 ，就在这些细胞内开始 了最初的发育 ， 并进行 无性 生殖即裂 体生殖 。鸟疟原虫的红外期最早出现在 鸟的成纤维细胞和脾的淋 巴一 吞噬系统 ( h u f f 1 9 6 9 ) , 然后进 入血管 的内皮网状细胞 ，尤其是在毛细血管中，最后才从 内 皮细胞转移到红细胞 内。 子抱子侵入鸟细胞 以后 ，变圆，形成缓殖子( b r a d y z o i t e ) , 在 通 过 至 少 三 代 的 组 织 细 胞 内 发 育 ， 即 潜 隐 体 ( c r y p t o z o i t e )， 中 隐 体 ( m e t a c r y p t o z o i t e )和 显 明 体 ( p h a n e r o z o i t e ) 的周 期 之 后 ，它 们 释 放 出球 形 或 卵 圆形 的裂 鸟 类疟原虫形态、流行病学及p c r检测方法的 研究 殖 子 ，裂 殖 子 进 入 血 液循 环 ， 在 外 周 血 中侵 入 红细 胞 ， 开 始 了红内期阶段 的发育 。在红外 期寄生发育期 间，寄生虫形成 由膜包裹 的寄生泡 ( p a r a s i t o p h o r o u s v a c u o l e ) ，这层膜常常 加厚。这种 由膜包 裹的寄生泡对 寄生虫在细胞内寄生的生理 环 境 的调 控 起 着重 要 作用 ，如 寄生 虫 的 生 长 ，分化 所 需 要 的 营养物质均可 以通过寄生泡的膜扩 散到 寄生泡内，或者直接 把寄主的细胞质吞噬到寄生泡 内，供寄生虫需要。对鹏疟原 虫 ( p l a s m o d i u m l o p h u r e )，鸡疟原虫 ( p . g a l l i n a c e u m ) , 联核疟原虫 ( p . j u x t a n u c l e a r e )， 长疟原虫 (p . e l o n g a t u m ) 和珠鸡疟原虫 ( p . f a l l a x )等的细胞培养研究，均发现有这 一相同或相似的发育阶段和结构 ( m e y e r和 o l i v e r i a , 1 9 6 5 ; h e l p e r e t a l . ， 1 9 6 6 ;a i k a w a e t a l . ， 1 9 6 7 , 1 9 6 8 ;b e a u d o i n 和 s t r o m e , 1 9 7 3 ; o l i v e r i a和 s o u s a , 1 9 7 4 ). 在鸟类疟原虫的红外期方面的研 究还存在着至今仍未统一 认识的情况，即在 4 0 -6 0年代，有 学者在研究寄生于金丝鸟 的残疟原虫红 外期时发现，此 鸟疟 原虫在红外期中具有二型 裂 殖 子 ， 并命 名 为 大裂 殖 子 ( m a c r o m e r o z o i t e )和 小裂 殖 子 ( m i c r o m e r i z o i t e s ) ( r e i c h e n o ，和 m u d r o w 1 9 4 3 ) ，同样的现 象在研究鸡疟原虫时也有发现 ( h u f f和 c o u l s t o n 1 9 4 2 ) 。对 于这种现象 ，这些 学者解释为:在 红外 期产生的大裂殖子是 为红外期再循环 而产生的，小裂殖 子则是为最终进入红 内期 参与红 内期循环而产生的。但是 ，随着研究的进一步深入 ， 研究人员发现产生二型裂殖子 的现 象 并不是在每一种鸟疟原 虫 中都 存 在 ，所 以关 于二 型裂 殖 子 的研 究 一 直 是鸟 疟 原 虫 争 论的焦点 之一 。 到 目前 为止 ，鸟类疟 原 虫生 活史 的 研 究 中 ，寄生 于 红 外 期 的研 究一 直 没有停 止 过 。科 学家 己对1 2种 鸟疟 原虫 的红 外期 进 行 了系 统 的研 究 ，其 中，最 具 代 表 性 的是 对 鸡疟 原 虫 与 残 疟原虫的研究。现己确定鸟疟原虫的红外期可分为两类，一 类 是具有 红 细 胞 前 期 的种 类 ，包 括 残 疟 原 虫 ，鸡疟 原 虫 ，麻 云南大学博士论文 雀疟原虫 ( p l a s m o d i u m c a t h e m e r i u m ) ,鹏疟原虫和珠鸡疟原 虫 ; 另 一 类 为 不 具 红 细 胞 前 期 的 种 类 ， 包 括 弯 形 疟 原 虫 ( 只 c i r c u m f l e x u m ) ，联核疟原虫，火鸡疟原虫( p . d u r e )，六子 疟 原 虫 ( p . h e x a m e r i u 动 ， 长 疟 原 虫 ， 沃 氏 疟 原 虫 ( p . v a u g h a n i )， 赫 夫 疟 原 虫 ( p . h u f f i )和 嗜 核 疟 原 虫 ( p . n u c l e o p h i l u m ) ( g a r n h a m , 1 9 6 6 ) 。 鸟疟原虫经过在鸟类组织细胞内的发育和潜伏 ，进入 了红 细胞 ，开始在红细胞 内的发育阶段。红 内期无性周期具有种 的特异性 ，长期 以来一直是鸟疟原虫生活史研究的 一个重要 内容 。红外 期 释 放 出来 的 圆 形或 卵 圆形 裂 殖 子进 入 红细 胞 ， 开始无性繁殖 ，首先形成环状体 ，再发育成滋养体 ，然后滋 养体再发育 为无性体 ( 裂殖 体;显明体 )或有性体 ( 雄配子 体 ;雌 配 子体 ) ，有性 体 或 配子 体 成熟 ， 就对 适 宜 的蚊 媒 具 有 感染 能 力 。 鸟疟原虫红 内期 ( 裂体生殖周期 )因种 的不同而不 同，例 如残疟原虫和鹑疟原虫 ( p . m a t u t i n u m )的无性周期是 2 4小 时 ，而 且裂 体 生殖 具 有 很强 的 同 步性 ，裂 体 生殖 的 高峰 一 般 是在早上;而麻雀疟原虫也有 明显的无性周期，其裂体生殖 的高峰期一 般发 生在1 8 : 0 0左 右 ;但 是许 多种 鸟疟 原虫 并没 有 表 现 出特 别 明显 的 周 期性 ，即 成熟 裂 殖 体 的 出现 没 有 很 强 的同步性( d e m i n a , 1 9 5 9 ; h u f f , 1 9 3 7 ; c o r r a d e t t i e t a l . , 1 9 6 0 ; m c g h e e , 1 9 6 0 ) 。同步性强否，可以作为虫种鉴定的参考之一。 无性生殖周期的的调控机理一直不明，但近来的研究表明 这主要决定于寄主的生理特点和疟原虫的遗传构成 。学者们 曾经做过这样的实验 ，将鸡疟原虫加 以冷藏后，在细胞培养 中，发现其无性生殖周期表现为 1 2小时，但把它接种到其正 常干净的宿 主体 内时，它又能调整其无性生殖周期 ，达到 正 常水平 2 4小时;同样的，如果将受疟原虫感染的鸟饲养在人 工控制光周期的环境 中，寄生虫就会缩短或延长其无性生殖 周 期 ，逐 渐 与改 变 了 的环境 相协 调 一致 。 鸟类疟原虫形态、 流行病学及p c r检测方法的研究 同时 ，在红 内期 发 育 阶段 ，学者对 红 内期 裂殖 子 的超微 结 构特征做 了详细的研 究 ，发现裂殖子有 很 大的中央核，具有 位 于核 后 部 的管状 脊 的 新 月形 线粒 体 ， 紧 靠 着线 粒 体有 一 个 功 能未 知 的球 状 体 ， 目前一 般 认 为这 个 球 状 体可 能 为线 粒 体 磷酸化所涉及到的酶提供底物 ( a i k a w a , 1 9 6 6 , 1 9 6 7 , 1 9 7 1 ) o 在裂殖 子的项端发现 了对裂殖子进入寄主细胞有 重要作用 的 细胞器 ，包括 一对花瓶状 的棒状体 ( r h o p t r i e s )和数 目不等 的 短棒 形 的微 丝 ( m i c r o n e m e s ) ，这 些 微 丝 通 过 导 管联 接 到 裂 殖 子 的 顶端 ，在 侵 入 寄 主细 胞 时棒状 体 密 度 降低 ，表 明它 们 的 内涵 物 己经 分 泌 掉 了 。学 者们 还 发 现 ，这 些细 胞器 把 内涵 物 释 放 到包 围着 细 胞 内裂 殖 子的寄 生 泡 ( p a r a s i t o p h o r o u s v a c u o l e )内 。在 裂 殖 子 进 入 寄 主 细 胞 内 不 久 ( t o r i i e t a i . , 1 9 8 9 ) ，形态相似的一种称为移行体 ( t r a n s i t i o n a l b o d y ) 的结构在鹏疟原虫的红外期裂殖子上观 察到，这种移行体在 入侵 寄主细胞时 ，是否有相 同的功能还 不得 而知 ( b e a u d o i n 和 s t r o m e , 1 9 7 3 ) 裂 殖 子 的细 胞 骨 架 结 构 与 子抱 子 的 类 似 ，包 括 一 个 前 极 环 ，一个不连续的 内膜层和一直从极环 ( p o l a r r i n g )延伸 到 裂殖 子后 端 的表 膜 下 微 管 。在 对 珠鸡 疟 原 虫红 内期裂 殖 子 的研究中发现其有 2 4 -2 6根表膜下微管 ( a i k a w a , 1 9 6 7 ) 。表 膜的内膜层，也称为迷宫结构 ( l a b y r i n t h i n e s t r u c t u r e ) , 排 列 成 方格 状 的 小 室 ，这 一结 构通 过 负 染 很 容 易 被 发 现 ( a i k a w a , 1 9 6 7 )， 研 究 发现迷宫结构布满 了除最 前端和胞 口 ( c v t o s t o m e )之外的整个裂殖子质膜之下，被认为是一种使 裂殖子更坚固的结构 ( 人 i k a w a , 1 9 7 1 ) 0 在残疟原虫 ( p . r e l i c t u m )的超微 结构研究中，首次澄 清 了 疟 原 虫 裂 殖 子 穿 入 寄 主 细 胞 的 机 制(l a d d a e t a l . , 1 9 6 9 ) 。这一研究后来在研究灵长类疟原虫的过程中得到 证 实和 进一步的完善 ( a i k a w a e t a 1 . , 1 9 7 8 ) 。研 究发现 ，最 初 裂殖 子与寄主细胞 相接触，以裂殖子 的前端与红细胞的膜 云南大学博士论文 相接触，紧接着红细胞 向内产生凹陷，在裂殖子逐渐进 入红 细胞时，凹陷不断扩 大 。此时尽管红细 胞膜发生 了很大的变 形 ，但是仍保持完整 ，在穿入的最后阶段，入侵时产生 的空 泡 ，由红细胞 自身再度封闭。在红细胞 内，裂殖子开始 分化 和发育，棒状体 ，微 丝和 与裂殖子表膜 相联的细胞骨架 结构 均 消失。裂殖 子发育 成 为滋养 体。 红 内期 滋 养 体 与红 外 期滋 养 体相 比有 更多 的多态性 ，在 虫 体 内有具脊 的线粒 体 ，核糖体在滋养体 中极为丰富，但 大 多 数的核糖体为游离型 ，也可见到单体核糖体和多体核糖 体 ， 在 滋养 体 中 的 内质 网 都 为泡状 或短 管 状 ，其 表 面常 附有 核 糖 体，滑面内质网少见，高尔基体呈小泡状。 滋养体通过胞 口吞噬红细胞细胞质获取养分 ( a i k a w a e t a l . , 1 9 6 6 ; h u f f , 1 9 6 9 ) 。研究发现在红细胞质里的滋养体有 大 量含有 血 红 蛋 白 的 泡 状 体存 在 ，这 说 明疟 原虫 的生 长 需 要 从 寄主细 胞 吞 噬 大 量 的血红蛋 白。 同时 在细 胞化 学 的研 究 中 发现，在这些泡状 体 内含有大量的水解酶，血红蛋 白消化后 的 副产 品是 疟 原 虫 色 素 ( h e m o z o i n)或疟 色素 ( m a l a r i a l p i g m e n t ) 。这些色素是 由于血红蛋 白含有铁离子，而疟原虫 却 不 能 加 以 代 谢 ， 故 而 形 成 了含 铁 的 疟 色 素 ( a