微生物实验报告.doc

实 习 报 告实习名称 食品微生物检验实习 系 别 生物与化学工程系 年级专业 12级食品科学与工程专业 学生姓名 某某某 指导老师 王老师、黄老师、李老师 X X 学 校2015 年 1 月 13日1、实习时间、地点和实习单位时间内容地点实习单位12月2325日腐乳中细菌含量的检测3栋1楼邵阳学院微生物实验室11月2628日腐乳中霉菌含量的检测3栋1楼邵阳学院微生物实验室11月281月3日腐乳中酵母含量的检测3栋1楼邵阳学院微生物实验室11月45日腐乳中大肠菌群的检测3栋1楼邵阳学院微生物实验室2、实习目的通过食品微生物检验实习，掌握培养基的配制、包扎及灭菌；正确采集样品并对样品进行稀释、滴加、培养；菌落观察、鉴定与计数；数据处理、分析等方面内容，并结合生产和科研技术的发展，开设较高的综合性实验为主，运用综合的实验方、实验手段对我们的知识、能力、素质形成综合的培养。为我们今后从事各种与食品相关的工作打下基础。3、实习过程概述3.1参加认识实习动员大会 2014年11月8日上午由黄大川、王瑶琼2位老师召开了微生物实习动员大会。会上，老师们说明了实习目的、内容、时间、地点，着重强调了此次实习的自主性和和注意事项，另外还应遵守实验室的规章制度，保持高度的安全意识。3.2实习内容一、腐乳中细菌含量的检测1、实验材料和设备 1ml移液管 5支,1000ml、500ml、100ml的烧杯各1、1、2个,250ml锥形瓶 3个，100ml量筒1个，研钵1个,滴定管1支,试管5支,试管架1个，玻璃棒1根,培养皿 12个,涂布器1个,洗耳球1个,酒精灯1盏,电磁炉1个，天平1台,药匙1个，pH试纸，标签纸1张，纱布、棉花、线、报纸若干，高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱，超净工作台。2、牛肉膏蛋白胨培养基的配制 配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂1520g 水1000ml pH 7476 步骤：称量溶化调pH过滤分装加塞包扎灭菌倒平皿接种培养3、样品的稀释 预处理：在天平上称取25g 样品，置于研钵中，然后加50ml无菌水在无菌室里研磨，磨碎后再加175mL 无菌水于研钵中，最后转至250ml锥形瓶中，充分振摇后，制成1:10 的样液。 十倍稀释： 用1mL 灭菌移液管吸取1:10 样液1mL ，沿管壁缓缓注人盛有9 mL无菌水的灭菌试管中（注意吸管不要触及稀释液面），充分振荡试管使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。接着用另一支吸管按上述操作重复，依次制成10倍梯度系列的样品匀液。每稀释1次，换用1支1mL灭菌移液管。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min 。4、倒平皿前准备 开启无菌工作台，先紫外线灭菌，30min后再进入。（研钵用酒精擦拭后，放在无菌室进行紫外灭菌）5、倒平皿 倒入的培养液要到培养皿高度三分之一的位置，至少倒10个培养皿。倒完培养皿后，将其放在一旁等待冷却凝固。6、接种根据对样品污染状况的估计，选择3 个适宜稀释度的样品匀液，根据腐乳的污染情况估计我们选用了10-11、10-12、10-13 三个稀释度，进行10倍稀释时，吸取0.5 mL 样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做了3个平皿。同时，留1个培养皿作空白对照。（注：每个稀释度做三个培养皿是为了降低误差，使结果更准确，因为我们用的是市售型腐乳，污染情况较严重，所以选用了这三个稀释度）7、渗透 将接种后的培养皿放置30min，使样液渗入培养基。8 、倒置培养 将渗透好了的培养基翻过来，放在温度为361 的恒温箱中培养 241h。9、实验结果 选取菌落数在30 CFU300CFU 之间，无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数，低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。稀释度10-1110-1210-13空白培养皿1无法计数298 310培养皿2无法计数264 280培养皿3无法计数249 190平均菌落数CFU/g(mL）无法计数270 160二、腐乳中霉菌含量的检测1、实验材料和设备研钵1个，100mL量筒1个，滴定管1支，1 mL移液管6支，试管5支，玻璃棒1根，培养皿12个，500mL烧杯一个，涂布器1个，洗耳球1个，药匙1个，试管架1个，酒精灯1盏，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL锥形瓶3个，标签纸1张，纱布、棉花、线、报纸若干，高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱，超净工作台。察氏培养基的配制 配方：硝酸钠3g 磷酸氢二钾1g MgSO47H2O 0.5g 氯化钾0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂20g 蒸馏水1000mL 步骤：称量溶化调pH过滤分装加塞包扎灭菌倒平皿接种培养3、4、5跟细菌含量的检测步骤一样6、接种根据对样品污染状况的估计，选择3 个适宜稀释度的样品匀液，因为霉菌的菌落较大，所以我们选择了10-11、10-12、10-13 三个稀释度，进行10倍稀释时，吸取0.5 mL 样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做了3个平皿。同时，留1个培养皿作空白对照。（注：每个稀释度做三个培养皿是为了降低误差，使结果更准确）7、渗透 将接种后的培养皿放置30min，使样液渗入培养基。8 、倒置培养 将渗透好了的培养基翻过来，放在温度为271 的恒温箱中培养5天。9、实验记录24小时记录一次数据，连续5天。10、实验结果稀释度10-1110-1210-13空白培养皿12031860培养皿21971640培养皿32142620平均菌落数CFU/g(mL）2052040三、腐乳中酵母含量的检测1、实验材料和设备研钵1个，100mL量筒1个，滴定管1支，1 mL移液管5支，试管5支，玻璃棒1根，培养皿12个，500mL烧杯一个，涂布器1个，洗耳球1个，药匙1个，试管架1个，酒精灯1盏，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL锥形瓶3个，铁架台1个，漏斗1个，标签纸1张，纱布、棉花、线、报纸若干，高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱，超净工作台。2、 马铃薯葡萄糖琼脂培养基的配制配方：马铃薯200g 葡萄糖20g 琼脂1520g 蒸馏水1000ml 自然pH步骤：先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂（煮沸2030分钟，能被玻璃棒戳破即可），用纱布过滤，加热，再据实际实验需要加琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000ml，分装锥形瓶，加塞、包扎，（121）灭菌20分钟左右后取出。3、4、5跟细菌含量的检测步骤一样6、接种据样品污染估计，选择3 个适宜稀释度的样品匀液，我们选择了10-11、10-12、10-13三个稀释度，进行10倍稀释时，吸取0.5 mL 样品匀液于无菌培养皿内，每个稀释度做了3个平皿。同时，留1个培养皿作空白对照。（注：每个稀释度做三个培养皿是为了降低误差，使结果更准确）7、渗透 将接种后的培养皿放置30min，使样液渗入培养基。8 、倒置培养 将渗透好了的培养基翻过来，放在温度为281 的恒温箱中培养5天。9、 观察计数24小时记录一次数据，连续记录5天。10、实验结果稀释度10-1110-1210-13空白培养皿110411 30培养皿21161510培养皿31231360平均菌落数CFU/g(mL）1141330四、腐乳中大肠菌群有无的检测1、实验材料和设备研钵1个，100mL量筒1个，滴定管1支，1 mL移液管5支，试管5支，玻璃棒1根，500mL烧杯一个，培养皿13个，涂布器1个，洗耳球1个，药匙1个，酒精灯1盏，试管架1个，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL锥形瓶3个，标签纸1张，纱布、棉花、线、报纸若干，高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱，超净工作台。2、实验流程检样稀释乳糖胆盐发酵管361，242h产气不产气大肠杆菌阴性伊红美蓝琼脂平板361，18-24h报告乳糖发酵管361，242h革兰氏染色革兰氏阴性无芽孢杆菌革兰氏阳性不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性大肠菌群阳性报告报告报告3、乳糖胆盐发酵管的配制配方：蛋白胨20g 乳糖10g 猪胆盐5g 0.04%溴甲酚紫水溶液25mL 蒸馏水1000mL pH7.4制法：将蛋白胨、乳糖及猪胆盐溶于水中，校正pH，加入指示剂，然后往每支试管中加10ml左右的乳糖发酵液，再放入1支杜氏小管，我们组共装了4支，最后，加塞、包扎放入高压蒸汽锅115灭菌15min。4、接种将灭完菌的乳糖胆盐发酵管放到无菌室内冷却降温，等温度降到室温时，用移液管吸取0.5ml样液于乳糖胆盐发酵管中，然后混匀加塞。5、培养 将接完菌的乳糖胆盐发酵管放在37的恒温箱中培养，时间为24小时。6、观察我们的乳糖胆盐发酵管中的杜氏小管没有浮起来，说明市售腐乳中没有大肠菌群。4.思考题（1）用滤膜法检测大肠菌群有什么优点？答：滤膜法的优点:与直接法比较可以检测大量的样品。 浓缩效应使微生物的检测结果提高。 带有菌落的滤膜可作为检测的永久记录存档。 可见的菌落与样品量直接对应，得出定量结果。（2）检查样品中的大肠菌群有何意义？答：大肠菌群主要包括肠杆菌科中的埃希氏菌属、柠檬酸细菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。这些属的细菌均来自于人和温血动物的肠道，需氧与兼性厌氧。不形成芽泡，在3539条件下，48h内能发酵乳糖产酸产气，革兰氏阴性。大肠菌群中以埃希氏菌属为主，埃希氏菌属被俗称为典型大肠杆菌。大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。本群中典型大肠杆菌以外的菌属，除直接来自粪便外，也可能来自典型大肠杆菌排出体外730 d后在环境中的变异。所以食品中检出大肠茵群，表示食品受到人和温血动物的粪使污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧日污染。大肠菌群最初作为肠道致病菌而被用于水质检验，现已被我国和国外许多国家广泛用做食品卫生质量检验的指示菌。大肠菌群的食品卫生学意义是作为食品被粪便污染的指示菌，食品中粪便含量只要达到10-3mg/kg即可检出大肠菌群。肠道致病菌如沙门氏菌属和志贺氏菌属是引起食物中毒的重要致病菌、然而对食品经常进行逐批逐件地检验又不可能，鉴于大肠茵群与肠道致病菌来源相同，而且一般在外环境中生存时间也与主要肠道病原茵一致，所以大肠茵群的另一个重要食品卫生学意义是作为肠道病原菌污染食品的指示菌。当然食品中检出大肠菌群，只能说明有肠道病原茵存在的可能性，两者并非一定平行存在，但只要食品中检出大肠菌群，则说明有粪便污染，即使无病原菌该食品仍可被认为是不卫生的。5.实验心得 这次实验还算圆满成功，在实验过程中我们遇到很多的问题，我们没有能够很好及时的处理，还有一些注意事项我们没有意识到，所以在以后的实验中要做好各种准备，不能手忙脚乱，我们要认真对待实验，不能马虎，在以后的试验中遇到不懂的要你那够自己很好的处理，还有一些细节我们要注意，比如稀释的时候各种小细节都直接影响实验的结果。我们不足的地方需要不断的改进，在以后的实验学习难免遇到，所以一定要养成严谨的好习惯。、在实验过程中，我们要注意灭菌和无菌操作的重要性，尽量避免杂