《果蔬及果蔬汁中橘红2号的测定 高效液相色谱法》标准文本VIP

ICS点击此处添加 ICS 号点击此处添加中国标准文献分类号DB S22吉 林 省 地 方 标 准DB S22/ TXXX2011果蔬及果蔬汁中橘红 2 号的测定 高效液相色谱法Determination of citrus red2 in fruit, vegetable and juices-High performance liquid chromatography（送审稿）2013 - XX - XX 发布 2013 - XX - XX 实施吉 林 省 卫 生 厅 发 布DB22/ TXXX2011I前言本标准遵循GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写和GB/T 20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法的编写规则。本标准的附录 A 为规范性附录本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院本标准主要起草人：郎乐、张庆波、王庆峰、刘斌、刘桂华。本标准于 2013 年 月 日首次发布。DB22/ TXXX20111果蔬及果蔬汁中橘红 2 号的测定 高效液相色谱法1范围本标准规定了果蔬及果蔬汁中橘红2号染料含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于果蔬及果蔬汁中橘红 2 号染料的测定。方法最低检测限为 0.1 mg/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696:1987，MOD）3原理根据橘红2号不溶于水，易溶于芳烃类溶剂的特点，样品用丙酮-正己烷（1+3）混合溶剂提取并蒸发至干。用甲酸-乙腈（0.5+99.5）溶液(经正己烷饱和)溶解残渣，正己烷脱脂。在液相色谱C 18反相柱上进行分离，在波长510 nm处检测，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量。4试剂和材料注1：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的实验室一级水。4.1试剂4.1.1 乙腈：色谱纯。4.1.2 甲酸：色谱纯。4.1.3 丙酮4.1.4 正己烷4.2标准品橘红2号标准品：纯度90%。4.3标准溶剂配制橘红2号标准储备液（100 mg/L）：准确称取10.0 mg橘红2号标准品置于100 mL容量瓶中，加入乙腈超声溶解并定容至刻度，置于4冰箱避光保存，有效期为6个月。DB22/ TXXX20112橘红2号标准工作液系列的制备：将橘红2号标准储备液用流动相逐级稀释为0.25 mg/L、0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L、5.00 mg/L的标准工作溶液系列。置于4冰箱避光保存，有效期为3个月。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器5.2分析天平：感量 0.1 mg5.3超声波震荡器5.4旋涡混匀器5.5氮吹仪5.6水平往复振荡器5.7离心机：转速4000 转/分6分析步骤6.1试样制备6.1.1 甜橙、胡萝卜等果蔬：取果皮或蔬菜表皮部分5.00 g切成小块置于50 mL具塞离心管中，加入丙酮-正己烷（1+3 ）混合溶剂20 mL，置于水平往复振荡器振荡 15分钟，吸取上层正己烷层至30 mL氮吹管中。离心管中再加入正己烷10 mL，重复提取一次，合并提取液于氮吹管中，在氮吹仪上于45蒸发至干。加入1 mL流动相溶解残渣，涡旋混合1分钟，超声1分钟，过0.22 m滤膜过滤后待测定。6.1.2 果蔬汁：称取样品 5.00 g 于 50 mL 具塞离心管中，若样品较为黏稠，可适量加水稀释并摇匀后，加入丙酮-正己烷（1+3 ）混合溶剂 20 mL，涡旋混合 1 分钟，置于水平往复振荡器振荡 15 分钟，离心后吸取正己烷层至 30 mL 氮吹管中。离心管中再加入正己烷 10 mL，重复提取一次，合并提取液于氮吹管中，在氮吹仪上于 45蒸发至干。加入 1 mL 甲酸-乙腈正己烷饱和溶液溶解残渣，涡旋混合1 分钟，超声 1 分钟，加入正己烷 0.5 mL，涡旋混合 1 分钟，移至 1.5 mL 具塞离心管中，离心并弃去正己烷层，下层清液用 0.22 m滤膜过滤后待测定。6.2仪器参考条件6.2.1色谱柱：Zorbax SB-C 18 3.5 m 4.6mm150mm （或相当型号色谱柱）6.2.2流动相：乙腈+水（90+10）6.2.3柱温：306.2.4流速：1.0 mL/min6.2.5检测波长：510 nm6.2.6进样量：10 LDB22/ TXXX201136.3标准曲线的制作将橘红2号标准系列工作液分别在上述色谱条件下测定相应的峰面积(峰高)，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积（峰高）为纵坐标，绘制标准曲线。6.4试样溶液的测定在相同的液相色谱条件下，将试样溶液注入液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。7分析结果的表述按标准曲线外标法计算试样中橘红2号的含量。计算公式见式（1）： （1）10CmVX式中：X试样中橘红2号的含量，单位为克每千克（g/kg） ；C由标准曲线计算出进样液中橘红2号的浓度，单位为微克每毫升（g/mL ） ；V试样的最后定容体积，单位为毫升（mL） ；m试样质量，单位为克（ g） ；1000由g/g换算成g/kg的换算因子。计