《苦丁茶 第1部分 种子质量要求》（编制说明）

苦丁茶 第 1 部分：种子质量要求（征求意见稿）编 制 说 明广西壮族自治区中医药研究院二一六年八月二十五日1一、 工作概况（一）任务来源与项目编号本标准是广西壮族自治区质量技术监督局下达的 2015 年第五批广西地方标准制定（修订）项目计划（桂质监函2015345 号文） ，项目编号：20150526。（二）起草单位广西壮族自治区中医药研究院。（三）主要起草人员名单及职务或职称二、 编制标准意义苦丁茶为冬青科冬青属植物 Ilex kudingcha C.J.Tseng，是具有悠久应用历史的药茶两用植物，收载于广西中药材标准(第一册) （1990 年版） 、 广西壮族自治区壮药质量标准（第二卷） （2011 年版） ；药用具有散风热、清头目、除烦渴的功效，用于头痛、齿痛、目赤、耳鸣、耳中流脓、热病烦渴、痢疾等 1-2；茶饮具研 制人 员 姓名 职务/职称现从事专  业所在单位项  目负责人赖茂祥 研究员 药用植物栽培 广西中医药研究院黄云峰 副研究员 中药资源 广西中医药研究院蒋珍藕 主任中药师 中药学 广西中医药研究院胡琦敏 助理研究员 组培学 广西中医药研究院覃兰芳 副主任药师 药学 广西中医药研究院徐传贵 助理研究员 药用植物栽培 广西中医药研究院屈信成 主管中药师 中药学 广西中医药研究院胡仁传 助理研究员 中药资源 广西中医药研究院主要参加人员张启伟 助理研究员 分子生物学 广西中医药研究院2有生津、提神、益智、抗衰老、降血压、降血脂等功效。现代药理研究表明：苦丁茶具有保护心脑血管系统 3，降血压 4，降血脂 5-10，降血糖 11，抗菌 12-14，调节免疫 15-16，抗氧化 17-21，抗肿瘤 22等药理作用。苦丁茶主产于广西、广东、海南等地，是广西道地大宗常用中、壮药材。由于苦丁茶药用、茶用功效独特，药理作用广泛，市场需求量日益增加，野生资源远不能满足市场需要，人工栽培势在必行。因而广西、广东、海南等省区掀起了种植苦丁茶热，仅在广西天等和大新两县种植苦丁茶面积就超过 1000 亩，已成为广西西部山区部分农村经济发展的主要产业。开展规范化种植是目前满足苦丁茶市场需求的主要手段，种子是开展规范化种植的重要前提和基础，苦丁茶种子具有后熟特性，刚采收的种子种胚未完全发育成熟，需经过一段时间的贮藏使种胚发育成熟后种子才具有发芽能力，而且干燥的种子基本丧失发芽能力，因此，对种子的质量检验显得尤为重要。目前苦丁茶种子尚未有法定的标准规范（即还没有国家标准、行业标准和地方标准） ，随着种植面积的扩大，苦丁茶种子交易量将不断增加，如无标准规范，易造成品种混杂，种子质量参差不齐，将严重影响苦丁茶药材的生产。制定苦丁茶种子质量要求，加强苦丁茶种子的质量控制，从源头上把好药材种子种苗质量关，规范苦丁茶药材生产，提高苦丁茶产品质量，保护生产经营者利益，促进苦丁茶产业发展。三、 标准编制起草及研究过程（一）标准编制过程认真学习中华人民共和国标准法、标准化工作导则、标准制定和产品标准编写规定等相关文件资料，研究确定标准的编写原则和项目的实施方案。参照有关国家标准、中国药典与行业标准，并根据本产品的特点而制定标准。力求标准的各项指标均符合国家相关标准的规定，各项指标的试验方法引用国家相关标准中规定的方法，引用国家标准、中国药典与行业标准，并参照执行。标准起草小组成员先后承担国家科技支撑计划项目“苦丁茶等3种药材SOP优化及产品标准化研究” （2011BAI01B04）、广西科学研究与技术开发计划项目“苦丁茶等3种药材SOP优化及产品标准化研究” （桂科重1298001-2-3）及 “苦丁茶良3种选育研究” （桂科重14124002-3 ）等课题研究，对苦丁茶的生物学特性、种质资源、繁殖栽培技术、病虫害防治及采收加工等方面进行了系统研究，掌握了苦丁茶药材生产的关键技术。有多年的苦丁茶繁育种植实践，并在种苗繁殖技术方面，对苦丁茶种子的生物学特性和发芽特性进行了较深入的研究，为制定苦丁茶种子质量要求打下了良好的基础。标准主管部门广西壮族自治区质量技术监督局下达2015第五批广西地方标准制定（修订）项目计划的通知（桂质监函2015345号文），苦丁茶 第1部分：种子质量要求地方标准获准立项（项目编号：20150526），我们及时成立了以广西壮族自治区中医药研究院赖茂祥为主持人，黄云峰、蒋珍藕、胡琦敏、覃兰芳、徐传贵、屈信成、胡仁传、张启伟为组员的标准起草小组，及时部署了标准编制的工作方案和小组成员调研、起草工作时间安排表。在标准起草前，研究了苦丁茶的相关文献及种子质量研究方面的资料，并对前期课题研究成果进行了全面整理和总结讨论，在编制过程中，走访了种植基地实地调研，在广泛调查和试验研究的同时还咨询了相关权威专家，力争编制工作过程科学、严谨，方法、技术路线正确。（二）标准研究过程在承担苦丁茶的国家科技支撑计划项目和广西科学研究与技术开发计划项目研究期间，项目组成员对苦丁茶的生物学特性、种质资源、繁殖栽培技术、病虫害防治及采收加工等方面进行了系统研究。在广西区质监局下达编制标准的任务后，我们在种苗繁殖技术方面，对苦丁茶种子的生物学特性和发芽特性进行了深入的研究，并成立了以原苦丁茶课题组成员为骨干的标准编写小组。对苦丁茶的繁殖，我们开展过种子繁殖、扦插繁殖和组织培养快速繁殖的技术研究，多年的苦丁茶繁育种植实践，结合对文献资料分析讨论，我们认为，在苦丁茶的繁殖技术中，目前生产上最易于操作和推广的是种子繁殖和扦插繁殖，全区各地推广种植的主要是实生苗和扦插苗。因此，对苦丁茶种子的研究很重要，对种子的质量控制是保证药材质量的关键环节。在标准编制期间，起草小组成员还深入大新县、天等县、马山县等苦丁茶种植基地进行实地走访和调查，了解苦丁茶种苗生产现状及药材种植情况。经起草小组充分讨论后，按照 GB/T 1.1-2009 规定的标准编4写格式于 2015 年 12 月初完成了苦丁茶 第 1 部分：种子质量要求广西地方标准“工作组讨论稿 ”，并向本单位部分专家征求意见和建议，起草小组进再行内部讨论和修改，对讨论稿进行进一步完善，于 2016 年 8 月形成了标准征求意见稿。四、 标准编制原则、依据1、制定本标准的目的是规范广西区内的苦丁茶种子质量，指导今后的苦丁茶种子生产和种苗生产，为药材生产提供优质种子种苗，以促进苦丁茶在广西适宜地区的推广种植。2、本标准的格式和编写方法执行 GB/T 1.1-2009 的规定。3、本标准的制定力求准确、系统，内容与当前苦丁茶种子种苗生产实际紧密结合，可操作性强。五、 标准主要技术内容1、范围本标准规定了广西境内生产和销售的苦丁茶 Ilex kudingcha C. J. Tseng 种子的质量要求、检验方法、检验规则、标志、包装、贮藏、运输。2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 3543.2-1995  农作物种子检验规程  扦样GB/T 3543.3-1995  农作物种子检验规程  净度分析GB/T 3543.4-1995  农作物种子检验规程  发芽试验GB/T 3543.5-1995  农作物种子检验规程  真实性和品种纯度鉴定GB/T 3543.6-1995  农作物种子检验规程  水分测定GB/T 3543.7-1995  农作物种子检验规程  其他项目检验3、主要技术内容及其说明（1）扦样5根据广西区内苦丁茶种子的生产、贮藏和销售情况，以及 GB/T 3543.2 的相关要求，提出了种子批的划分方法和扦样的方法，并根据该种子的生物学特性提出了其种子批最大重量，送验样品、试验样品最小重量及样品保存方法。表 1    试验用各批次种子序号 样品编号                样品来源1 KDC-1 广西大新县龙门乡苦丁村        2011 年收种，新鲜果实。2 KDC -2 广西大新县龙门乡苦丁村下告屯  2011 年收种，新鲜果实。3 KDC -3 南宁市明秀路南宁地委大院      2011 年收种，新鲜果实。4 KDC -4 广西宾阳县思陇镇廖田村        2011 年收种，新鲜果实。5 KDC -5 广西天等县都康乡              2011 年收种，新鲜果实。6 KDC -6 广东省梅州市大浦县            2011 年收种，新鲜果实。7 KDC -7 广东省清远市清新县            2011 年收种，新鲜果实。8 KDC -8 海南省海口市白沙县            2011 年收种，新鲜果实。种子批的划分方法：按同一来源，同一品种，同一采收期的质量基本一致，在规定数量之内划分种子批。扦样方法：初次样品的扦取、混合样品的配制、送验样品及试验样品的分取，按 GB/T 3543.2 执行。根据广西区内苦丁茶种子的生产、贮藏和销售情况，初步将种子批的最大重量定为 1000kg。按 GB/T 3543 的要求，为保证种子样具有代表性， 确定送验样品最小重量为 250g，其中净度分析样品重量为 50g。（2）净度分析按照 GB/T 3543.3（农作物种子检验规程）中净度分析法进行检验。研究了多来源多年份多批次苦丁茶种子样品的组成，对其净种子、杂质、其他植物种子各成分做了分析和界定，其是净度96%的为一级种子、净度96%的为二级种子。（3）发芽试验研究6按照 GB/T 3543.4 的要求，从不同的发芽温度、光照、发芽床等发芽条件进行发芽试验的研究，并通过多条件多次重复试验的观察，获得苦丁茶种子发芽试验的技术条件。   发芽温度：设 15、20、25、30、355 个恒温培养和 1525及 2030 2 个变温培养。从实验结果看（表 2） ，25恒温培养在发芽率上表现最好，因此确定 25为其发芽温度。表 2  不同温度发芽率统计表发芽温度（）发芽率（%）露白时间（d）初次计数时间（d）末次计数时间（d）15 0 0 0 6020 13.8dC 15 25 6025 56.7aA 14 25 6030 43.3bA 14 25 5835 32.4cB 14 25 581525 11.8fD 15 25 602030 21.2eC 14 25 60发芽光照：分为光照、部分光照（12h 光照，12h 黑暗） 、黑暗、自然光四种条件，25恒温培养。试验结果表明（表 3） ，苦丁茶在光照和黑暗条件下发芽结果差异不显著，但部分光照条件下发芽率较高；在实验室内检验时，不同季节自然光照不一，可能会对实验结果造成一定的影响。从标准化的角度出发，每天给予固定部分光照的条件更适合其发芽。表 3  不同光照条件对发芽的影响光照条件 初次计数时间（d） 末次计数时间（d） 发芽率（%）全光照 25 60 55.4部分光照 25 60 56.3黑暗 25 60 55.7自然光 25 60 56.77发芽床：设纸上（TP） 、纸间（BP ） 、砂上（TS） 、砂中（S ） ，25恒温培养。从发芽率和观察的便利性上考察，以 TP 为宜。根 据 以 上 观 察 和 发 芽 率 统 计 结 果 ， 制 定 苦 丁 茶 种 子 发 芽 试 验 技 术 条 件 （ 表 4） ，并 初 步 拟 定 其发芽率50%的为一级种子、发芽率 30-49%的为二级种子。表 4  苦丁茶种子发芽试验技术条件发芽床 温度 / 初次计数时间/ d 末次计数时间/ d附加说明，包括破除休眠的建议纸上 25 25 60种子硬实，透水透气性差，需破除休眠后用35浸种20h24 h可充分吸涨。破除硬实建议：砂纸打磨种子，浓硫酸腐蚀6 min。（4）种子真实性和品种纯度鉴定研究采用种子外观形态法，通过对种子形态、大小、颜色等表面特征的鉴定能够快速的检验种子的真实性。鉴别依据见表5。表 5 苦丁茶种子形态特征类别 苦丁茶颜色与种皮特质 种皮黄棕色，表面具网状纹理及沟，石质。大小千粒重 42.445.9g，长 7.0 mm7.5  mm，宽 4.0 mm5.0  mm。种子形状种子长圆形；脐条明显；胚乳白色，2 片，呈椭圆形。果皮 颜色与果皮特质核核果，红色，球形，宿存花萼 4 裂片，盘状，内含种子 4 粒。苦丁茶种子纯度鉴定按照 GB/T 3543.5 对种子纯度的鉴定方法和计算方法执行。（5）水分测定方法研究8按 GB/T 3543.6 的相关要求，采用高温烘干法测定苦丁茶种子含水量。表 6  苦丁茶种子水分测定条件样品名 样品准备 样品大小/g 温度/ 干燥时间/h苦丁茶 粉碎 10 130133 1苦丁茶种子具有后熟作用，因此苦丁茶种子传统的贮藏方式是湿沙贮藏，以使种子在足够水分的条件下完成胚后熟，在种子失水的情况下会中断后熟作用，使种子失去发芽能力，经实验观察，种子含水量小于 35%，种子生活力急剧下降，因此，把种子含水量定为35%。（6）重量测定方法研究从方便、快捷、实用的角度考虑，采用百粒法测定苦丁茶种子的千粒重比较适宜，操作方法按 GB/T 3543.7 的规定执行,试验统计结果见表 7。表 7  苦丁茶种子千粒重测定条件观测值指标粒数(粒) 总重(g) 千粒重（g）100 4.145 41.45100 4.532 45.32100 4.425 44.25100 4.616 46.16100 4.339 43.39100 4.637 46.37100 4.352 43.52鲜重（g）100 4.258 42.58样本数（N）平均值Mean方差Var标准差SD标准误SEM变异系数CV(%)最大值Max最小值Min偏度Skew峰度Kurt描述性统计分析结果8 44.13 3.011 1.743 0.613 3.93 46.37 41.45 -0.084 -1.043依据样本描述性统计分析，苦丁茶种子千粒重（g）用 MeanSD 表示为44.131.74g，因此规定苦丁茶一级种子千粒重指标为44.1g，规定苦丁茶二级种子千粒重指标为44.1。六、 与现行法律法规和标准关系9本标准（征求意见稿）制定是在参照国内其他作物的相关标准等国家相关的法规和标准的基础上结合地方实际情况制定出来的，因此与现行法律、法规及强制性标准无冲突。七、 实施标准的要求和建议为保证中药材的质量稳定，应从源头上把好质量关，即从药材种苗繁育技术的环节上进行控制，对苦丁茶种子进行质量分级研究，保证药材种子种苗纯正、优质，这是实现苦丁茶药材人工栽培需要首先解决的主要问题，本标准的制定将为解决这些问题提供技术指导，建议在苦丁茶 第 1 部分：种子质量要求制定完成后尽快发布实施，使其在苦丁茶药材栽培中发挥积极作用。八、 参考文献1 广西壮族自治区卫生厅. 广西中药材标准( 第一册)S. 南宁: 广西人民出版社, 1990:  63-64.2 广西壮族自治区食品药品监督管理局. 广西壮族自治区壮药质量标准（第二卷） S. 南宁:  广西科学技术出版社, 2011: 168.3 朱莉芬，罗集鹏苦丁茶的心血管药理作用研究J 中药材， 1994，17(3)：37-404 陈一，李开双苦丁茶冬青叶的降压作用研究J 医学教育探索， 1995，(5)：250-2525 向华林，许宏大，田文艺，等中国皋卢( 苦丁)茶降脂作用的实验研究J中国中药杂志，1994，19(8)：497-4986 潘慧娟，王超英，方志敏苦丁茶对大鼠高脂血症及脂肪肝形成的影响J浙江中医杂志，2003，38(9)：404-4057 卢锟刚，乐智勇，陈桂林，等决明子，丹参，苦丁茶，绞股蓝不同组分配伍的降血脂作用J 中国实验方剂学杂志，2012，18(9) ：191-1958 彭晓辉，卢锟刚，宋成武，等海南苦丁茶不同组分对高血糖小鼠血糖与血脂的作用研究J时珍国医国药，2012， 23(6)：1376-13789Nishimura K，Fukuda T， Miyase T，et a1Activity-Guided Isolation of Triterpenoid Acyl CoA Cholesteryl Acyl Transferase(ACAT)Inhibitors from Ilex kudinchaJJournal Of Natural Products，1999，62(7)：1061-1064 10Nishimura K，Miyase  T， Noguchi HTriterpenoid saponinsfromllex kudinchaJJournal Of Natural Products，1999，62(8)：1128-113311