《畜肉食品中鸭源性成分PCR检测方法》 编制说明

1吉林省地方标准畜肉食品中鸭源性成分 PCR 检测方法编制说明一、任务来源最近据媒体报道及相关职能部门反映鸭肉制成“涮羊肉和烤羊肉”现象很严重，很多市场销售的牛羊肉及肉制品中，很多都掺杂鸭肉等杂肉类，来冒充羊肉等肉类进行销售，以此来谋取暴利，甚至据相关部门反映在事件调查过程中，据违法销售者陈述，掺入的鸭肉分量达到三分之二以上，为弥补羊肉味不足，有的甚至掺入羊肉粉、羊肉精膏等添加剂来粉饰其掺假行为，市场上出现了名副其实的“挂羊头卖鸭肉”等严重掺假造假行为，拿鸭肉添加羊肉香精，制成羊肉串去欺骗消费者，这既违反相关规定，更是一种商业欺诈。目前动物源性成分检测范围涵盖牛、羊、猪、狗、鸡、马、驴鹿、兔、骆驼等动物种类。尚无对鸭源性成分鉴别检测的相关标准，满足不了检测需求，迫切需要建立该方面检测方法及标准，为杜绝肉及肉制品中掺假造假行为及责任追查提供法律依据，为消费者打造安全、健康的消费环境提供技术支持。根据吉林省卫生厅下达的编写任务通知，由吉林省产品质量监督检验院负责地方标准畜肉食品中鸭源性成分 PCR 检测方法的起草工作。二、标准编制的目的古有“挂羊头卖狗肉” ，而今则是在我们的肉食领域刮起了一阵“假肉”歪风：“牛肉膏”制造假牛肉、 “假肉丸鱼丸” 、重庆“假猪蹄” 、 鸭肉制成“涮羊肉和烤羊肉”等肉类及其制品掺假事件，遍布大小集贸市场、餐饮饭馆乃至深受消费者信赖的知名超市。现实生活中， “掺杂使假”可谓无孔不入，食品领域也难以幸免。最近据媒体报道及相关职能部门反映鸭肉制成“涮羊肉和烤羊肉”现象很严重，很多市场销售的牛羊肉中，很多都掺杂鸭肉等杂肉类，来冒充羊肉等肉类进行销售，以此来谋取暴利，甚至据相关部门反映在事件调查过程中，据违法销售者陈述，掺入的鸭肉分量达到三分之二以上，为弥补羊肉味不足，有的甚至掺入羊肉粉、羊肉精膏等添加剂来粉饰其掺假行为，市场上出现了名副其实的“挂羊头卖鸭肉”等严重掺假造假行为，拿鸭肉添加2羊肉香精，制成羊肉串去欺骗消费者，这既违反相关规定，更是一种商业欺诈。针对此状况，很多部门诸如工商、药监和质监等部门需要对市场中可疑样品进行检测，但目前肉制品和饲料中鸭源性检测方法还未建立起来，无相关检测方法标准，满足不了需求，迫切需要建立该方面相关标准，为肉制品中掺假鉴定及责任追查提供技术支持及法律依据，为饲料中是否含有鸭源性成分提供检测方法和标准依据。目前领先的 DNA 基因检测手段是 PCR（聚合酶链式反应）技术。动物源性成分检测的原理也是基于利用不同动物 DNA 的唯一性，从而采用聚合酶链式反应技术，迅速准确地鉴定产品中是否含有特定动物源性成分。PCR 动物源性成分鉴定的应用领域非常广泛，除鉴别肉制品掺假、甄别饲料中是否含有动物源性成分有效防止疾病传播外，还可以对保健品成分中的动物来源鉴定等等。目前动物源性成分检测范围涵盖牛、养、猪、狗、鸡、马、驴鹿、兔、骆驼等动物种类。但目前在用荧光定量 PCR 法鉴定检测动物源性成分的研究上，国内外尚未见到对鸭源性成分鉴别检测的研究报道。国内无鸭源性检测方法标准，满足不了检测需求，迫切需要建立该方面检测方法及标准，为杜绝肉制品中掺假造假行为及责任追查提供法律依据，为消费者打造安全、健康的消费环境提供技术支持。三、编制原则和依据本标准的编写是按照 GB/1.1-2000标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则要求进行的。本标准是在参考镰刀菌的有关 PCR 检测标准基础上，其中技术路线参考了国内外有关资料，经研究、改进和验证后，结合国际及我国科研成果制定的。本标准经过验证试验，证明切实可行。 四、标准制定的主要过程（一）计划阶段2012 年 3-4 月是项目计划制定阶段。项目负责人组织成立制标项目组，召开项目计划会议，对项目工作进行细化，制定实施计划和进度表。（二）资料收集分析阶段2012 年 5-6 月，项目组通过搜索互联网、查阅文献等手段收集当前国内外有关鸭源性成分检测的标准和论文，了解各种检测方法的发展和特点。3（三）完成标准初稿2012 年 7 - 8 月，项目组确定标准制定原则及基本框架，按照 GB/T 1.1-2000标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则要求编写完成畜肉食品中鸭源性成分PCR 检测方法标准初稿。（四）标准征求意见2012 年 9 月，项目组组织专家研讨对标准初稿进行审阅。2010 年 10 月对标准初稿的样品制备程序进行完善，形成标准征求意见稿。五、标准编制中要说明的几个问题（一）标准名称本标准适用于新鲜、冰冻畜肉和肉干、肉酱、酱肉、火腿、肉松等畜肉加工食品中鸭成分定性检测，主要采用现代分子生物学检测技术- PCR 方法，起名畜肉食品中鸭源性成分 PCR 检测方法 。（二）标准主要内容说明(如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等的论据) 根据 GB/T 1.1-2000标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则要求，本标准分为资料性概述要素（封面、前言） 、规范性一般要素（范围、引用文件） 、规范性技术要素（定义、术语和缩略语、方法提要、试剂与材料、设备和仪器、检验程序、检验报告）三大部分。1.鸭源性成分检测：1.1 引物引物设计来自于材料，具体为：Duck2012-f：CATCTATCCTGCTAGCCGCC Tm59 GC60Duck2012-r：GGCTTGAGTGGAAGAATGCC Tm58 GC55PCR201bp1.2 扩增序列CATCTATCCT GCTAGCCGCC GGCCTCTTAT CAATGCTCCT AGTGATACTC CAATGATGAC GGGACATTGT CCGAGAGAGC ACCTTCCAAG GCCACCACAC ACCTACAGTC CAAAAAGGCC TACGATACGG CATAATCCTC TTCATCACAT CCGAAGCTTT CTTCTTCCTA GGATTTTTCT GGGCATTCTT CCACTCAAGC C1.3 基因扩增基因为鸭线粒体基因（参考文献）41.4 灵敏性试验100bpmarker 泳道1 28310-1g/ml；泳道2 28310-2g/ml；泳道3 28310-3g/ml；泳道4 28310 -4g/ml；泳道5 28310 -5g/ml DNA1.5 特异性实验5泳道1：鸭；2，羊；3，猪；4，牛；5，鸡；6，鹅；7，马；8， 9， 10，1.6 酶切后的测序结果CATCTATCCTGCTAGCCGCCGGCCTCTTATCAATGCTCCTAGTGATACTCCAATGATGACGGGACATTGTCCGAGAGAGCACCTTCCAAGGCCACCACACACCTACAGTCCAAAAAGGCCTACGATACGGCATAATCCTCTTCATCACATCCGAAGCTTTCTTCTTCCTAGGATTTTTCTGGGCATTCTTCCACTCAAGCC83BP用限六、与国外同类标准水平的对比分析通过联机检索，未查到与本标准相同的国内外标准。本标准在制定过程中，充分考虑了国内食品行业的畜禽肉制品检测现状和实际检测能力，标准的技术方法实用、合理、先进、针对性强，达到了国内先进水平。七、与有关的现行法律、法规和强制性（国家、行业、地方）标准的关系本标准符合现行的法律法规和地方标准要求。八、重大分歧意见的处理经过和依据由于本标准为地方性基本要求，在制定过程中经与生产企业及食品安全监督检验部门进行沟通，本标准文本未见重大分歧意见。九、本标准作为推荐性地方标准的建议当前，我国大力加强食品安全监管工作，国际贸易对食品安全检验提出了更高的要求。该项目的开展为食品生产、流通、监管检测、质量控制、出入境检验、质量监督等领域的食品检测工作提供了有力的技术支持，也为研发与检验人员开创并积累新的知识与技能提供平台，具有较大的社会效益与人才效益。PCR 方法在畜禽肉制品快速检测方面的应用大大提高了产品检验的速度，节省人力和物力，提高了检验的技术水平，具有良好的经济效益和社会效益。建议将畜肉食品中鸭源性成分 PCR 检测方法作为推荐性地方标准批准发布。十、贯彻标准的要求和措施建议(包括技术措施、管理措施、实施方案等内容)6（一）技术措施要求熟悉畜肉食品中鸭源性成分PCR 检测方法标准，熟练掌握畜肉食品DNA提取及PCR检测相关的技术。（二）管理措施本技术标准在实施过程，由吉林省产品质量监督检验院和吉林农业大学进行评估，以使标准取得预期效果。在畜肉食品中鸭源性成分检测过程中，严格执行国家有关食品样品采取和送检、检样处理及食品微生物检测实验室质量控制规范等相关标准，确保检测结果准确。（三）实施方案本标准由吉林