（免疫学专业论文）钙钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ对巨噬细胞tlr信号转导的调控及其机制研究.pdf

钙钙调素依赖性蛋白激酶i i 对巨噬细胞t l r 信号转导的调控及其机制研究【摘要1t 0 1 1 样受体信号的活化受到严密的调控。我们研究了钙钙调素依赖性蛋白激酶i i ( c a m i ) 对巨噬细胞t l r 3 、t l r 4 和t u t 9 信号转导的影响及其相关机制。发现凹s ( t u t 4 配体) 可诱导巨噬细胞中c a m l ( i i 时间依赖性的快速高水平活化，但c p go d n ( t l r 9 配体) 和p o l yi ：c ( t l r 3 配体) 不能显著诱导c a m k i i 活化。利用k n 6 2 抑制c a m i 活性可显著降低l p s 诱导的小鼠巨噬细胞i l 6 、i f n 6 的产生，可降低l p s 诱导的e r k 、j n k 、n f l ( b 和i r f 3 的活化。但对c p go d n 和p o l yi ：c 诱导的细胞因子和信号通路无明显影响。c a m k i i 不影响l p s 诱导前后巨噬细胞t l r 4 的表达，同时可能不与t a k l 、i r a k l 、t b k l 、i k k 及t r a f 6 等分子发生相互作用。研究表明c a m i 选择性地参与t l r 4 信号转导的正相调控，并可能同时参与调控t l r 4 的m v d 8 8 依赖和m v d 8 8 非依赖途径的信号转导，为l p s 诱导巨噬细胞充分活化所必需。本研究结果表明c a 2 + c a m c a m i 信号途径与t u t 信号途径之间存在着交互作用，丰富了t l r信号转导的调控机制。【关键词1 钙钙调素依赖性蛋白激酶i i ，巨噬细胞，t o l l 样受体，l p s ，p 0 1 yi ：c ，c d g0 d n ，m a _ p k ，n f l ( b ，i r f 3t h er e g u l a t i o no ft l rs i g n a l i gi nm a c r o p h a g e sb yc a 2 + c a l m o d i u m d e p e n d e n tp r o t e i n “n a s ei i【a b s t m c t 】v a r i o u so t h e rs i g n a lp a t h w a y sa r ej n v o l v e di nt h et i g t l tr e g u l a t i o no ft l rs j g n a l i n g h e r ew ei n v e s t i g a t e dt h ep o t e n t i a lr o l eo fc a m i ( i ii nt u ts i g n a l i n gi nm u r i n em a c r o p h a g e s w ed e m o n s t r a t e dt h a tl p s ( t u t 4a g o i s t ) c o u l ds e l e c t j v e l ya n ds i 印i f i c a n t l yi n d u c ea c t i v a t i o no fc a m li nm a c r o p h a g e s ，w h i l en os i g n i f i c a n tc a m k a c t i v a t i o nw a sd e t e c t e di nm a c r o p h a g e ss t i m u l a t e dw i t hc p g0 d n ( t l r 9a g o n i s t ) o rp o l yi ：c ( t u t 3a g o n i s t ) c a m k i ii n h j b j t i o nb yk n 6 2 ，as p e c i f i cc a m k i ii n h i b i t o r ，m a r k e d l yd e c r e a s e dt h ep r o d u c t i o no fi l 一6a n dt n f 一0 【i nl p s i n d u c e d钙钙调素依赖性蛋白激酶i i 对巨噬细胞t l r 信号转导的调控及其机制研究【摘要】t 0 1 1 样受体信号的活化受到严密的调控。我们研究了钙钙调素依赖性蛋白激酶i i ( c a m i ) 对巨噬细胞t l r 3 、t l r 4 和t u t 9 信号转导的影响及其相关机制。发现凹s ( t u t 4 配体) 可诱导巨噬细胞中c a m l ( i i 时间依赖性的快速高水平活化，但c p go d n ( t l r 9 配体) 和p o l yi ：c ( t l r 3 配体) 不能显著诱导c a m k i i 活化。利用k n 6 2 抑制c a m i 活性可显著降低l p s 诱导的小鼠巨噬细胞i l 6 、i f n 6 的产生，可降低l p s 诱导的e r k 、j n k 、n f l ( b 和i r f 3 的活化。但对c p go d n 和p o l yi ：c 诱导的细胞因子和信号通路无明显影响。c a m k i i 不影响l p s 诱导前后巨噬细胞t l r 4 的表达，同时可能不与t a k l 、i r a k l 、t b k l 、i k k 及t r a f 6 等分子发生相互作用。研究表明c a m i 选择性地参与t l r 4 信号转导的正相调控，并可能同时参与调控t l r 4 的m v d 8 8 依赖和m v d 8 8 非依赖途径的信号转导，为l p s 诱导巨噬细胞充分活化所必需。本研究结果表明c a 2 + c a m c a m i 信号途径与t u t 信号途径之间存在着交互作用，丰富了t u t信号转导的调控机制。【关键词】钙钙调素依赖性蛋白激酶i i ，巨噬细胞，t o l l 样受体，l p s ，p 0 1 yi ：c ，c d g0 d n ，m a _ p k ，n f l ( b ，i r f 3t h er e g u l a t i o no ft l rs i g n a l i gi nm a c r o p h a g e sb yc a 2 + c a l m o d i u m d e p e n d e n tp r o t e i n “n a s ei i【a b s t m c t 】v a r i o u so t h e rs i g n a lp a t h w a y sa r ej n v o l v e di nt h et i g t l tr e g u l a t i o no ft l rs j g n a l i n g h e r ew ei n v e s t i g a t e dt h ep o t e n t i a lr o l eo fc a m i ( i ii nt u ts i g n a l i n gi nm u r i n em a c r o p h a g e s w ed e m o n s t r a t e dt h a tl p s ( t u t 4a g o i s t ) c o u l ds e l e c t j v e l ya n ds i 印i f i c a n t l yi n d u c ea c t i v a t i o no fc a m li nm a c r o p h a g e s ，w h i l en os i g n i f i c a n tc a m k a c t i v a t i o nw a sd e t e c t e di nm a c r o p h a g e ss t i m u l a t e dw i t hc p go d n ( t l r 9a g o n i s t ) o rp o l yi ：c ( t u t 3a g o n i s t ) c a m k i ii n h j b j t i o nb yk n 6 2 ，as p e c i f i cc a m k i ii n h i b i t o r ，m a r k e d l yd e c r e a s e dt h ep r o d u c t i o no fi l 一6a n dt n f 一0 【i nl p s i n d u c e dm a c r o p h a g e sa n da t t e n u a t e dl p s - i n d u c e de r k ，j n k ，n f k ba n dl r f 3a c t i v a t i o n ；h o w e v e r ，c a m k i ii n h i b i t i o nd i d n ta f f 色c tt h ec y t o k i n ep r o d u c t i o na n ds i g n a l i n gp a t h w a y si nm a c m p h a g e si n d u c e db yc p go d no rp o l yi ：c w ef o u n dt h a tc a m i ( i id i d n ta f f e c tt h et u t 4e x p r e s s i o na n dc a m im a yn o ti n t e r a c tw i t hi r a k l ，1 1 a k l ，t b k l ，i k k o rt r a f 6 n sa s s u m e dt h a tc a m im i g h ts e l e c t i v e l yp a n i d p a t ei nt u t 4b u tn o tt u t 3a n dt u t 9s i g i l a l i n g ，a n dt h a ti tm i 曲tb er e q u i r e df o rl p s j n d u c e da c t i v a t i o no fm a c r o p h a g e s t h e s ef i n d i n g sp m v i d ee v i d e n c ef o rt h ec r o s s t a l kb e t w e e nc a 2 + c a m c a m l ( 1 ia n dt l rs i g n a l i n gt h a tl e a d st om a c r o p h a g ea c t i v a t i o n ，w h i c hm a yf a c i l i t a t et h ef u t u r ei n v e s t i g a t i o no “h et u ts j g n a l i n ga n di t sr e g u l a t i o n k e y w o r d s ：c a 2 + c a l m o d i u m - d e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s ei i ，m a c r o p h a g e ，7 i b l l 1 i k er c c e p t o r i j s ，p o l yi ：c ，c p go d n ，m a p k ，n f l ( b ，i r f 3第一军医大学硕十学位论文缩略词表c a m ic p g o d ne r ki r f 3i j sm a p km v d 8 8p o l v l ：ct a k lt l rt n f 一0 【t r i f缩略词表钙钙调素依赖性蛋白激酶i ic a l c i u m c a l m o d u l i n d e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s ei i含非甲基化c p g 基序的脱氧寡核苷酸u n m e t h y l a t e dc p gm o t i f _ c o n t a i n i n go l i g o d e o x y n u c l e o t i d e s胞外信号调节激酶e x f r a c e l l u l a rs i g n a l - r e g u l a t e dk i n a s e干扰素调节因子一3i f n - r e g u l a t e df a c t o 卜3细菌脂多糖l i p o p 0 1 v s a c c h a r i d e丝裂原激活的蛋白激酶m i t o g e n - a c t i v a t e dp r o t e i nl 【i n a s e髓样分化因子8 8m y e l o i dd i f f e r e n t i a t i o nf a c t o r8 8聚肌苷酸胞嘧啶核苷酸p o l y i n o s i n i ca c i dp 0 1 y c y t i d y l i ca c i d转化生长因子b 激活的激酶1t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o 卜ba c t i v a t e dk i n a s e11 b 1 1 样受体t o l l - l i k er e c e p t o r肿瘤坏死因子c 【t u m o rn e c r o s i sf a c t o 卜a l p h a诱导6 干扰素的含t o l l 白细胞介素1 受体结构域的接头分子t i r ( 1 陆l l i l 一1r e c e p t o r ) d o m a i n - c o n t a i n i n ga d a p t o r - i n d u c i n g1 f n p第一二军医大学硕1 ：学位论文中文摘要钙钙调素依赖性蛋白激酶i i 对巨噬细胞t l r 信号转导的调控及其机制研究中文摘要t 0 1 l 样受体( t 0 1 1 1 i k er e c e p t o r s ，t l r ) 作为一种重要的模式识别受体，主要表达于巨噬细胞和树突状细胞( d e n d r i t i cc e l l s ，d c ) 表面，构成机体抵御病原体入侵的第一道防线。t u t 在各种生物体内高度保守，目前已发现并克隆了1 1 种哺乳动物的t i 瓜分子，选择识别病原体相关的分子模式，如t l i t 2 、t u t 3 、t l r 4 、t u t 5 、t l r 9 分别识别病原微生物的u a 、d s r n a 、l p s 、n a g e l l i n 、c p g 基序。t l r 不仅启动天然免疫应答，启动或控制炎症反应的性质、强度和持续时间，还可以通过上调抗原提呈细胞表面的共刺激分子和m h ci i ，促进d c 的成熟，指导抗原特异的免疫应答尤其是t h l 型反应的产生，调节获得性免疫应答的强度和类型，成为连接初始免疫应答和获得性免疫应答的枢纽。n 且信号过度活化或活化不足会导致机体功能异常和疾病的发生。许多的其他信号通路参与对t u t 信号的严密调控。因此，对t u t 信号转导调控的深入研究具有重要的理论意义和应用价值。钙钙调索依赖性蛋白激酶i i ( c a l d u m c a l m o d u l i n d e p c n d e mp i o t e i nk i n a s ei i ，c a m i ) 是一种多功能的丝苏氨酸蛋白激酶，广泛分布于机体大部分重要器官组织中。它由四个独立的基因a 、b 、y 及6 编码，且存在着不同的剪切体，因而产生多达2 4 种不同的同型物。c a m i 的活化需要c a 2 + c a m 的启动，但活化后其自身磷酸化位点( 在c a m i c 【为t 2 8 6 ) 被磷酸化，对钙调素的亲和力增强，使c a m 1 具有钙非依赖的自主活性。c a m k i i 有着众多的作用底物，如转录因子c r e b 、a t f 及其他信号分了p 5 6 ”。、t i a m l 、s h p 2 、s 1 ：f 玎1 等等。c a m k i i 可调节机体的多种重要生理功能，如突触的信号传递、记忆、物质的代谢、肌肉的收缩、基因的表达及细胞周期的调控。近年来研究表 j = jc a m i 可以通过结合并活化一系列信号分j i ：如a s k l 、r a f - 1或1 1 a k l 来调控m a p k 信号途径。而1 觚1 是t l r 信号通路巾m v d 8 8 依赖途径的第二军医人学硕：学位论文中文摘要必需成员。另外，有研究报道。抑制c a m k i i 的活性可降低血小板活化i 习子( 队f )致敏的巨噬细胞中l p s 诱导的e r k 、j n k 、n f k b 、a p 一1 的活化及t n f - a 的产生。这些研究表明c a m 髓i 在某些情况下可能参与t l r 4 信号转导的调控。但c a m i 是否参与其他t l r 信号转导的调控及具体的调控机制尚未见文献报道。本文对这一+ 设想进行了初步研究，探讨了c a m l 对巨噬细胞t u t 3 、t l r 4 和t l r 9 信号转导的影h 向。第一部分：钙钙调素依赖性蛋白激酶i i 在巨噬细胞中的表达及t l r 配体对其活化的调控首先，用w e s t e m 印迹方法检测到r a w 2 6 4 7 小鼠巨噬细胞可表达中等水平的c a m k i i 的同型物c a m l ( i i c 【。用1 0 0 n g m ll p s ( t l r 4 配体) 、o 3 mc p go d n( t l r 9 配体) 及1 0 斗g m lp o l yi ：c ( t u t 3 配体) 刺激r a w 2 6 4 7 细胞0 2 4 小时后，发现三种刺激不能诱导c a m k i i 蛋白表达水平的变化。由于自身磷酸化位点的磷酸化可作为判断c a m i 活化的指标，我们随后检测了上述三种不同t u t 配体刺激后r a w 2 6 4 7 细胞中c a m k i it 2 8 6 磷酸化水平的变化。结果显示l p s 能够以时间依赖性方式诱导c a m l ( i i 舵8 6 的磷酸化，在2 0 分钟内明显升高，3 0 分钟达到最高，4 0 分钟后丌始下降。但c p go d n 和p o l yi ：c 不能诱导明显的1 t 2 8 6 磷酸化。为了直接了解c a m i 活性的变化，我们用c a m i 激酶活性检测系统直接测定经上述刺激后r a w 2 6 4 7 细胞中c a m l 蛋白列底物的激酶活性，发现l p s 可显著上调c a m l 的活性，但没有明显时间依赖性关系；而对于c p go d n 和p o l yi ：c 刺激，c a m l 活性未见明显增加。t l r 4 配体刺激后c a m i 出现活化，表明c a m l 可能参与t l r 4信号转导的调控，但是，从是否诱导c a m 日i 活化的角度尚不能排除c a m i 参与t u t 3 、t u t 9 信号通路调控的可能性，尚需要实验进一步证实。第二部分：钙钙调素依赖性蛋白激酶i i 对巨噬细胞t l r 信号转导的调控及其机制研究我们发现，c a m k l l 特异性化学抑制剂k n 6 2 可剂量依赖性抑制t l r 4 配体l p s 诱导的r a w 2 6 4 7 巨噬细胞中细胞因子i l 6 的产生，在1 5 m 时就达明显抑制效第一二军医人学硕士学位论文中文摘要果；在l p s 刺激1 8 小时后i l 厂6 降低最明显，约为对照组的1 3 。但k n 6 2 处理对l p s诱导的r a w 2 6 4 7 巨噬细胞产生t n f 一0 【无明显抑制作用。抑制c a m k i i 活性还降低l p s诱导的i f n 仔的产生，但对l l 1 p 无影响。在新鲜分离的小鼠腹腔巨噬细胞中，用k n 6 2预处理以抑制c a m i 活性，结果同样能够降低l p s 诱导的i l 广6 、i f n b 的产生，而对t n f 一旺和i l 1 b 产：生没有影响。同时，k n 6 2 不能抑制l p s 诱导r a w 2 6 4 7 细胞的n o 产生。对于t u t 9 配体c p g0 d n 及t u t 3 配体p o l yi ：c 刺激r a w 2 6 4 7巨噬细胞，k n 6 2 预处理对二者诱导产生的细胞因子均无明显影响。表明c a m i 对于t l r 4 诱导激活的巨噬细胞产生细胞因子具有促进作用。由于i l 6 、i f n b 是巨噬细胞活化后发挥效应作用的重要细胞因子，因此，c a m i 可能是l p s 诱导巨噬细胞充分活化所必需的中间环节。为了研究c a m i ( i i 对巨噬细胞中t u t 信号转导途径的影响，我们检测了相关信号分子的表达以及活化( 磷酸化) 水平。结果发现，用k n 6 2 抑制巨噬细胞中c a m i活性可降低l p s 诱导的e r k l 2 、j n k 及1 1 ( b n 的磷酸化水平。利用n f k b 报告基因检测系统，我们发现抑制c a m i ( i i 活性可降低 s 诱导的n f l c b 转录活性。此外，c a m k i i 活性的抑制可降低l p s 诱导的i r f 3 的磷酸化及其核转位。同样，k n 6 2 预处理对c p g0 d n 及p o l yi ：c 诱导的巨噬细胞上述信号通路均无明显影响。这些结果表明c a m i 可以促进t i 且4 触发的e r k l ，2 、j n k l ，2 、n f l c b 、i r f - 3 的活化，可能同时参与f 相调控t u t 4 的m y d 8 8 依赖和m y d 8 8 非依赖途径的信号转导，但不参与t l 且3 和t i 且9 的信号转导的调控。既然c a m i 能通过磷酸化某些转录因子来调控基因的表达，我们进一步观察了抑制c a m l 活性对l p s 诱导前后t u t 4m r n a 水平的影响，发现其m r n a 水平并无变化，表明c a m k 可能不通过影响t l r 4 的表达来发挥调控作用。我们用免疫沉淀的方法试图寻找c a m i 能结合的t u t 信号通路中的靶分子，但未检测到c a m i能与t a k l 、i r a k l 、t b k l 、l k k 及t r a f 6 等分子相结合。至于c a m i 通过结合何种分子发挥调控t l r 4 信号通路的作用，有待于进一步研究。综卜所述，本研究表明t u t 4 配体可诱导臣噬细胞中c a m i 时间依赖性的快速高水平活化，但t l r 3 和t l r 9 配体不能够明显活化c a m k i i 。c a m i ( i i 可选择性地洲控t l r 4 信号转导，促进l p s 刺激的巨噬细胞产生i l 6 和1 f n d ，促进e r k l 2 、第一军医人学硕十学位论文中文摘要j n k 、n f k b 、i r f 一3 的活化，提示其可能为l p s 诱导巨噬细胞充分活化所必需，但目前尚没有实验证据证明c a m i ( i i 参与巨噬细胞t u t 3 和t u t 9 的信号转导。本研究结果展示了c a 2 + c a m c a m l 信号途径与t l r 4 信号途径之间存在交互作用，从而丰富了t u 4 信号转导的调控机制，使我们进一步认识了机体在抵御外来病原体时的免疫反应及其精细调控，同时为感染、肿瘤等疾病的免疫学机理探究以及新型治疗手段的发现提供了潜在的新思路。关键词：钙钙调素依赖性蛋白激酶i i 巨噬细胞，t 0 1 l 样受体，l p s ，p o l yi ：c ，c p go d n ，m a p k ，n f _ l c b ，i r f 3第军医大学硕 ：学位论文英文摘要t h er e g u l a t - o no ft l rs i g n a l i n gi nm a c r o p h a g e sb yc a 2 + c a l m o d i u m d e p e n d e n tp r o t e i n 磁n a s ei ia b s t i a c tt h ea b i l i t yo ft h ei n n a t ei m m u n e8 y s t e mt or e c o g n i z ea n dr e s p o n dt om i c m b i a lc o m p o n e n t sh a sb e e ni a r g e l ya t t r i b u t e dt ot 0 l l - l i k cr c c e p t o t s ( 砌t s ) a s 柚i m p o r t a n tk j n do fp a t c e r nr e c o g i l i t i o nr e c e p t o r s ( p r r s ) ，t u hc o m p r i s eal a r g ef a m i l yc o n s i s t i n go fa tl e a s t1 1m e m b e r sa n da r em a i l l l ye x p r e s s e do na n t i g e n p f e s e n f i n gc e l l ss u c h衄m a c f o p h a g e sa n dd e n d t i t i cc “l s ( d c s ) r e c o g n i t i o no fp a t h o g e n - a s s o c i a t e di n o l e c u l ep a n e r n s ( p a m p s ) b y1 1 且sl e a d si oav a r i e t y0 fs i g i l a l i ”ge v e n t st h a ti n “i a t ei n n a t ei m m u n i t ya n da l s od e t e r m j n el h en a t u r e ，i i l t e n s i t ya 1 1 dd u r a t i o no fi h ei n n a m m a t o r yr e s p o n s e i na d d i t i o n ，t l rs i g l l a l i n gc a ni n d u c et h ee x p r e s s i o no fc 0 一s t i m u l a t o r ym 0 1 e c u i c sa n dc y t d k i n e s ，f a c i l i t a kd cm a t u m t j o na n di n s t m c td e v e l o p m e n to fa n t i g e n s p e c i f i ca d a p t j v ei m m u n i t y e s p e c i a l l yt h lr e s p o n s e v a r i o u so i h e rs i g n a lp a t h w a y sa r ei n v 0 1 v e d nt h et i g t l tr e g i 】1 a t i o no ft l rs i g n a l i n gt oe n h a n c eo ra t t e n u a t et b e i ra c t i v a t i 伽，w h j c hm a i n t a i nt h ei m m u n 0 1 0 9 i c a lb a l a n c eh a w e v e lt h e s er e g u l a t o r ym e c h a n s m sa r en o tf i l l l yu n d e r s t o o d c a 抖恻m o d i u m ( o m ) 一d e p e n d e n tp m t e j nk i n a s ci i ( c a m i a i ) ，a ni m p o n a n te f f c c t o ro fc a 2 + c a m ，i sam u l t j f u n c t i o n a lc a l c i u m c a l m o d u l i n d e p e n d e n ts e r j n e a h r e o n i n ep m t e i nk i n a s ei h a i i sw i d e l yd j s t r i b u t c dj nm a m m a l i a nt i s s u e s c a m k ui se n c o d e db y4s e p a t a t eg e e s ( a ，b ，ya n d6 ) ，a n da l t e m a t es p l i c i n go ft h e s eg e n ep r o d u c e st h e2 4p o l y p e p t j d e ss e e nmv j v d i l lr e s t i n gc e l l s ，c a m ie x i s l sa sa n0 1 i g o m e r i cc o m p l e xo f8 一1 2s u b u n i t sw i t ha u t o i n h i b j t i o no fc a t a l y t i ca c t i v i t y b j n d i n go fc a 。+ c a mr e l i e v e sa u t o i n h t i o nr e s u n i “gi n 佃t e r s u b u n i fp h o s p h o r y l a t i o n ( t 2 8 6 ，f o rt h eai s o f o r mo fc a m k i l q ) a n da c t j v a t i 咖o fc a m k l l _ b e c a u s eo n h ep i e s e n c e0 fap h o s p h 叶eo nt h ea u t o n o m ys i t e ，t h ek i n a s er e t a i n sa u t o n o m o u sa c f i v i y ( 2 0 8 0 ) e v e na n e rt h ed i s s o c j a t i o no fc a l m ( ) d u l i n k i n a s er e t a i n sa u t o n o m o u sa c f i v i y ( 2 0 8 0 ) e v e na n e rt h ed i s s o c j a t i o no fc a l m ( ) d u l i n 第二军医大学硕士学位论文英文摘要c a m k i ic a np h o s p h o r y l a t eu pt o5 0d i v e r s es u b s t r a t e si n c l u d i n ge n z y m e s ，k i n a s e s ，i o nc h a n n e l s ，a n dt i a n s 口i p t i o nf a c t o r s ，a n di si n v o l v e di nab r o a dr a n g eo fc e l l u l 趼f u n c t i o n s ，s u c ha sm e t a b o l i s m ，n e u r o t r a n s m i t t e rr e l e a s e ，c e l lp r o l i f c r a t i o na i l dg e n ee x p r e s s i o n r e c e n ts t u d i e si n d i c a t e dt h a t ，d 印e n d i n go nc e l lt y p e sa n de n v i r o n m e m s ，c a m 1c o u l dm o d u l a t em a p kp a t h w a yt h r o u g hb i n d i n gt oa n da c t i v a t 血gr a f _ 1 ，a s k0 r1 ：i 气k 1 ，w h i c ha l lb e l o n gt om e k ( m i t o g e n - a c t i v a t e dp r o t e i n e x t r a c e l l u l a rs j g n a l r e g u l a t e dk j n a s ek i n a s e ) k i n a s e ( m e k k ) 1 a k l ( t r a n s f b r m i n gg r o w t hf a c t o r - ba c t j v a t e dk i n a s e1 ) ，a sw ea l lk n o w ，f u n c t i o n si nm y d 8 8 ( m y e l o i dd i f f e r e n t i a t i o nf a c t o r8 8 ) 一d e p e n d e n ts 虹；i l a l i n gp a t h w a yo ft u t s a n o t h e rs t u d ys h o w e dt h a tp l a t e l e t a c t i v a t i n gf a c t o r ( i 蛔p r e t r e a t m e n ts e l e c t i v e l yi n c r e a s e dl p s ( 1 i p o p o l y s a c c h a r i d e ) 一i n d u c e de r k l ，2 ，j n k s a p k ，n f k ba n da p 1a c t i v a t i o n ，a n d1 n f - ap r o d u c t i o n ，w h i l ei n h i b i t i o no fc a m ip r e v e n t e dp a f i d u c e dp r i m i n go ft h e s ee v e n t s b a s e do nt h e s ee v i d e n c e s ，w eh y p o t h e s i z e d 也a tc a m k i im i 曲tb ei n v o l v e di nt l rs j g n a lt r a i l s d u c t i o n s 1 nt h i ss t u dy ，w ei n v e s t i g a t e dt h ep o t e n t i a lr o l eo fc a m ii nt i 且s i 9 1 l a l i n gj nm u r i n em a c m p h a g e s p a r ti 。e m c t so ft l ra g o n i s t so nt h ee x p r e s s i o na n da e t i v a 6 0 no fc a m li nm a c m p h a g e sw ef i r s te x a m i n e dm er e g u l a t i o no fc a m ie x p r e s s i o ni nr a w 2 6 4 7c e l l ss t i m u l a t e dw i t hl p s ( t u t 4a g o n i s t ) ，c p go d n ( t l r 9a g o n i s t ) o rp o l yi ：c ( t l r 3a g o n i s t ) f o r1 - 2 4h b yw e s t e r nb l o ta n a l y s i s ，w ed i d n td e t e c ta p p a r e n tc h a n g eo fc a m k i ip r o t e i ne x p r c s s j o ni nm a c r o p h a g e sa f t e rs t i l n u l a t e dw i t ht h ea b o v et h f e et l ra g o n i s t s t h e nw ei n v e s t i g a l e dw h e t h e rt l ra g o n i s tc o u l di n d u c et h ea c t i v a t i o no fc a m lb e c a u s ea u t o p h o s p h o r y l a t e dc a m i ( i ih a ds i g n i f i c a n ta u t o n o m o u sa c t i v i t ya n da u t o p h o s p h o r y l a t i o n( t 2 8 6o ft h ec 【i s o f 0 硼) c o u l d b eu s e dt oa s s e s st h ea c t i v a t i o no ft h ek i n a s e ，w ea n a l y z e dt h ep h o s p h o r y l a t i o ns t a t u so ft 2 8 6s i t eo fc a m k i ii nr a w 2 6 4 7c e l 】ss t i m u l a t e dw i t hl p s ，c p go d no rp o l yi ：c ，r e s p e c t i v e ly ，f o ro - 6 0m i n ，l p sc o u l di n d u c eu p - r e g u l a t i o no fc a m k i lp h o s p h o r y l a t i o ni nat i m e d e p e n d e n tm a n n e r w h i c ho c c u r r e dw j t h i n2 0m i n ，p e a k e da t3 0m i n ，a n dd e c l i n e d4 0m i na f t e rl p st r e a i m e n t h o w e v e r ，n e j t h e rc p go d n6第一军医人学硕士学位论文英文摘耍n o rp o l yi ：cc o u l da f f e c l i h ep h o s p h o r y l a t i o ns t a t u so fc a m i w ef u r t h e rd e t e m i n e dc a m lk i n a s ea c t i v j t yb yt h ei n c o 叩o r a t i o no fh 一“p 】a t pi n l oa u t o c a m t i d e 2 ，ac a m i s p e c i f i cs u b s t r a t ep e p t i d e ，b y 胁v 打，口k i n a s ea s s a y e n d o g e n o u sc a m l ( 1 1w a si m m u n o p r e c i p i t a t e df r o mr a w 2 6 4 7c e l l st r e a t e da sa b o v e w ef o u n dl p sc o u l di n d u c em a r k e d l va c t i v a t i o no fc a m k l lw i t h o u tat i m e d e p e n d e n tm a n n e r ，w h i l en os i g n i 矗c a n tc a m ia c t i v a t i o nw a sd e t e c t e dw h e nm a c r o p h a g e sw e r es t i m u l a t e dw j t hc p go d no rp o l vl ：c t h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a tc a m k l lc o u l db es e l e c t i v e l ya c t i v a t e db yi j s ，t h u si n d i c a t i n gt h a tc a m im i g h tb ei n v o l v e di nr e g u l a t o no ft l rs i g n a l i n g ，e s p e c j a l l yt l r 4s i g n a l i n 昏i nm a c r o p h a g e s p a r ti i r e g u i a t i o no ft l ra g o n i s t - 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