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修复酶 基因多态性与 晚期肺癌化疗敏感性的关系研究 基金项目 江苏省科技发展计划项目 编号 江苏省肿瘤防治研究所分子流行病室 江苏省肿瘤防治研究所胸外科 南京 江苏省肿瘤防治研究所肿瘤内科 史美祺 高长明 吴建中 曹海霞 冯继锋 许 林 陆建伟 王 丽 摘 要 目的 研究 修复酶 基因 和 多态性与肺癌患者对铂类药物为基础的化疗敏 感性的关系 方法 收集经病理学确诊的晚期肺癌 例 所有病例化疗前抽静脉血 提取白细胞 用多聚酶链反应 限制 性片段长度多态性 分析技术检测 基因型 所有患者均经铂类药物为基础的化疗方案治疗 结果 在肺癌患者中 和 基因型者分别为 例 例 和 例 基因型者分别为 例 例 和 例 经化疗后 例患者 有效 总有效率 基因型者的有效率为 显著高于 基因型者 前者的化疗敏感性是后者的 倍 同时拥有 和 基因型者的有效率为 显著高于其他基因型者 结论 基因 多态性与晚期肺癌对铂类药物为基础的化疗敏感性相关 检测 基因型可以预测晚期肺癌化疗的敏感性 关键词 肺癌 基因多态性 化学治疗 中图分类号 文献标识码 文章编号 铂类药物主要包括顺铂 卡铂 和草酸铂 等 是目前用于治疗晚期肺癌的基 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 本化疗药物 但不同个体对铂类药物敏感性有很大 差异 从而影响这类药物的临床疗效 研究表明 铂 类药物进入细胞后主要通过引起 损伤而发挥 抗肿瘤作用 如果肿瘤细胞 修复能力强 这类 药物的疗效则差 反之疗效则好 是碱基切除修复 单链断裂修复系统中 的重要成分 参与 或 引起的 损伤修 复过程 研究发现 该基因编码区存在导致氨基酸 取代 和 的单核苷酸多态性 这些单核苷酸多态性影响 的活性 因 此研究 基因的多态性对预测肺癌细胞对铂 类药物的敏感性可能具有较高的临床价值 本文采 用分子生物学方法对 例晚期肺癌的 基 因多态性与铂类为基础化疗方案的疗效关系进行了 研究 材料与方法 病例资料 年 月 年 月间 在 江苏省肿瘤防治研究所内科收集经病理学确诊的晚 期肺癌 例 其中男性 例 女性 例 年龄范 围 岁 中位年龄 岁 病例的一般资料及 化疗方案见表 所有病例均经 证实有可测量 肿瘤病灶 化疗前患者血常规 肝肾功能均正常 心 电图无明显异常 功能状况 评分均大于 分 样本收集 所有病例化疗前抽静脉血 毫 升 置乙二胺四乙酸钠抗凝管 分离白细胞层 用 提取试剂盒提取白细胞 置 低温冰箱保存备用 基因型分析 参照文献 方法 用多聚酶链 反应 限制性片段长度多态性 技术检测 研究对象的 和 基因型 检测所用引物为 和 反应 总体积 含引物 各 各 酶 基因组 溶液 反应 条件为 预变性 分钟 秒 秒 秒 共 个循环 延伸 分钟 检测所用引物为 和 反应总体 积 含引物 各 各 酶 基因组 溶液 反应条件为 预变性 分钟 秒 秒 秒 共 个循环 延伸 分钟 产物均用 内切酶在 消化 小时 用 和 琼 脂糖凝胶电泳 溴化乙锭染色分别确定 和 基因型 基因型分为 三种 类 型 基 因 型 分 为 三种类型 表 肺癌患者的基本情况和化疗方案 性别 男性 女性 年龄 岁 岁 细胞学分类 非小细胞肺癌 腺癌 鳞癌 其他 小细胞肺癌 临床分期 化疗方案 铂类 盖诺 铂类 紫杉醇类 铂类 吉西他滨 铂类 其他 治疗方案 所有患者均接受铂类药物为基础 的联合方案化疗 其中接受 治疗者 例 治疗者 例 草酸铂 治疗者 例 洛 铂 治疗者 例 化疗方案包括铂类药物加去 甲长春花碱 或紫杉类药物 和 或 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 吉西他滨 铂类药物 第 天 或 第 天 或 第 天 或 第 天 以上药物均为静脉滴 注 铂类 第 天静脉推 注 铂类 紫杉类 第 天 或 第 天 均为静脉滴注 铂类 第 天静脉滴注 以上方案均 每 周为 周期 所有病例均在化疗 周期后评定 疗效 疗效评定标准 参照 实体瘤近期客观疗 效评定标准分为完全缓解 部分缓解 稳 定 和进展 以 为有效 统计学分析 采用 统计软件进行统 计分析 以 检验或 精确概率法 当出现 期望值 时 检验不同 基因型之间的化疗 疗效的差异 用 非条件 回归模型计算 比值比 及其 可信限 表明不同 基因型个体的化疗敏感性 化疗有效性的预测 结 果 基因型分布及化疗总有效率 例晚期肺 癌患者中 例为小细胞肺癌 例为非小 细胞肺癌 两者的基因型分布统计学差异 无显著性 基因型 例患者 扩增无 结果 该型实际统计例数为 例 所有病例中 基因 和 基因型频度分别为 例 例 和 例 和 基因型频度分别为 例 例 和 例 经铂类为基础的方案化 疗后 获得 例 例 例 例 总有效率 见表 基因型与化疗疗效的关系 不同基 因型患者的化疗有效率见表 携带 基因 基因型的的患 者 客观有效 率分别为 其中 基因型与 基 因型的有效率相比 差异有显著性 携带 基因型患者的化 疗失败风险是携带 基因型个体的 倍 在 基因 基因型携带者中 化疗有 效率分别为 和 三者之间的 差异没有显著性 表 小细胞肺癌与非小细胞肺癌基因型分布比较 例 基因型 注 与 基因型分布比较 表 基因多态性与肺癌化疗的敏感性比较 例 基因型 有效 无效 注 基因型与 基因型的有效率相比 基因 和 多态联合作 用与疗效的关系 我们进一步分析了 基因 与 多态联合作用与化疗疗效的 关系 见表 结果发现携带 同时 携带 基因型者的化疗有效率为 与其它基因型合计值有效率 相 比 差异显著 双侧 与 和 联合基因型有效率 比较 差异也有显著性 双侧 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 表 基因 和 多态联合 作用与肺癌化疗的敏感性比较 例 基因 有效 无效 注 与 联合基因型的有效率与 其他基因型合计值 相比差异显著 双侧 讨 论 是重要的 修复基因 通过与多聚 核糖聚合酶 连接酶 及多聚酶 作用 来修复包括氧化应急在内的各种损害引起的 损伤 编码的蛋白质与 连接酶 相互作 用 修复 单链断裂 并与 聚合酶 一起进 行碱基切除修复 对维持基因组稳定十分关键 在肿瘤的易感性研究中发现 基因多态性与 多种肿瘤风险增高相关 等 报道了 基因多态性与肺癌的风险增加有关 等 发现 基因多态性的高表达 提示有较高的肺癌风险 王中华等分析了 单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌对铂类药物化 疗敏感性的相关性 发现在 基因 表达中 携带 基因型患者化疗失败的风险 几乎是携带至少一个 等位基因患者的 倍 而 携带 或 基因型的患者 对铂类药物化疗失败的风险是 携带者的 倍 在联合基因型中 既携带 又携带 基因型患者化疗有效率进一 步提高 本研究结果提示 基因多态性对预测以 铂类为基础的化疗方案治疗晚期肺癌的疗效具有较 好的临床意义 本研究采用的方法不需要检测癌组 织中 基因的表达 而是直接抽取患者的外周 血 提取白细胞 检测患者的 基因型 采用 技术检测患者的 基因型不 仅具有方法简便 快速的优点 而且不需要收集癌组 织 可以克服未手术治疗的患者 特别是晚期癌症患 者不易取得癌组织的困难 因此具有较高的临床应 用价值 参考文献 蒋祝昌 与 修复 国外医学生物学工程分册 下转第 页 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 未发生严重放射性肺炎 讨 论 肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一 早期肺癌 大多无症状而不为患者所察觉 中晚期肺癌大多数 已不适合手术或因其它原因不能手术 因而只能选 择放化疗 放疗是中晚期非小细胞肺癌的主要治疗 手段 多年来 单纯的放射治疗其 年生存率仅 而应用三维立体定向放射治疗技术特别 是适形调强放疗大大提高了局部肿瘤剂量 肿瘤的 局部控制率得到改善 疗效有所提高 而随着新 的化疗药物的出现 化疗效果也较前提高 方案 是治疗非小细胞肺癌常用的一线方案 对肺癌的总 有效率达 尽管如此 单纯放疗或 化疗后仍有大部分患者不能治愈 失败的主要原因 仍然是局部未控制和远处转移 国内外均有报道将放疗和化疗结合在一起行综 合治疗 并取得了较单纯放化疗更高的治疗效果 但是放化疗的时间安排 可以是序贯 同步 交替 目 前尚无确切依据证明何者最好 而多数研究认为同 步放化疗在提高局部控制率和远期生存率方面更 好 是目前治疗中晚期非小细胞肺癌的主要治疗手 段和发展趋势 我们对已失去手术机会的 例中晚期非小细 胞肺癌患者采用同步和序贯的方法进行治疗 研究 结果表明同步组治疗在有效率方面高于序贯组 毒 副作用可耐受 无治疗相关性死亡 取得了较好的近 期疗效 根据本研究 同步放化疗的主要优势表现 在 放射治疗主要作用于 期的癌细 胞 对 期作用弱 而化疗可作用于各期癌细胞 两 者联用可互补 化疗后肿瘤缩小 局部血供改 善 乏氧细胞减少 放射敏感性增加 化疗后肿 瘤缩小 可使放射治疗的靶区缩小 减少正常组织损 伤 放疗并发症减少 有些化疗药物 特别是铂 类和长春花碱类有放疗增敏作用 铂类可以阻断放 疗致肿瘤细胞 双链断裂的再修复 长春花 碱类如诺维本可以将肿瘤细胞阻滞于 该期对 放射线最敏感 故二药连用有明显的放疗增敏作用 国内在放化疗综合治疗中大多采用以铂类为主 的化疗方案和常规放射治疗相同步 所以患者的毒 副反应较大 治疗难进行下去 近年来 随着三维适 形调强放疗 简称调强放疗 在临床上的应用 使放 射性高剂量区与肿瘤靶区的立体形状一致 并且能 够使靶区内的剂量分布均匀一致 因而能够导致放 疗强度的进一步提高和周围正常组织并发症的减 少 这就在理论上为放化同步治疗的顺利进行 减 轻患者的毒副反应 提高疗效提供了依据 目前有 学者单独应用调强放疗治疗晚期肺癌 其疗效均较 单纯的放疗或化疗好 且毒副反应轻 但这些报道病 例数较少 结果尚不完全一致 总的治疗效果也不能 完全令人满意 我们同步应用调强放疗和 化疗 方案 得到了较好的近期疗效 提高了患者 年生存 率 调强放疗有效地保护了周围的正常组织 减少 了放疗的副作用 未增加化疗所致的毒副反应 明显 提高了病人的治疗耐受性 远期生存率正在随访 之中 适形调强放疗和化疗两者有机地结合 有效地 控制了全身转移灶 提高了局部控制率 该方案可能 是治疗中晚期非小细胞肺癌的有效方法 值得在临 床上进一步观察 参考文献 吴开良 蒋国良 瘳 源 等 非小细胞肺癌三维适形放射治 疗临床 和 期剂量递增试验结果分析 中华放射肿瘤 杂志 张湘玉 孙 燕 孔维红 等 去甲长春花碱加顺铂治疗中晚 期非小细胞肺癌 例 中华肿瘤杂志 宋启斌 胡德胜 徐利明 等 三维适形放疗配合化疗治疗中 晚期非小细胞肺癌 中华肿瘤杂志 收稿日期 修回日期 上接第 页 王中华 缪小平 潭 文 等 单核苷酸多态与晚期非 小细胞肺癌对铂类药物化疗敏感性的相关性 癌症 收稿日期 修回日期 临床肿瘤学杂志 年 月第 卷第 期 dna修复酶xrcc1基因多态性与晚期肺癌化疗敏感性的关系研dna修复酶xrcc1基因多态性与晚期肺癌化疗敏感性的关系研 究究 作者 史美祺 高长明 吴建中 曹海霞 冯继锋 许林 陆建伟 王丽 shi mei qi gao chang ming wu jian zhong cao hai xia feng ji feng xu lin lu jian wei wang li 作者单位 史美祺 冯继锋 陆建伟 王丽 shi mei qi feng ji feng lu jian wei wang li 210009 南 京 江苏省肿瘤防治研究所肿瘤内科 高长明 吴建中 曹海霞 gao chang ming wu jian zhong cao hai xia 210009 江苏省肿瘤防治研究所分子流行病室 许林 xu lin 210009 江苏省肿瘤防治研究所胸外科 刊名 临床肿瘤学杂志 英文刊名 chinese clinical oncology 年 卷 期 2006 11 8 被引用次数 6次 参考文献 13条 参考文献 13条 1 reed e platinum dna adduct nucleotide excision repair and platinum based anti cancer chemotherapy 外文期刊 1998 05 2 shen mr jones lm mohrenweiser h nonconservative amino acid substitution variants exist at polymorphic frequency in dna repnir genes in healthy hmnans 1998 04 3 duarte mc colombo j rossit ar polymorphisms of the dna repair genes xrcc1 and xrcc3 in a brazilian population 外文期刊 2005 03 4 lunn rm langlois rg hsieh ll xrcc1 polymorphisms effects on aflatoxin b1 dna adducts and glycophorin a variant frequency 1999 11 5 蒋祝昌 xrcc1与dna修复 期刊论文 国外医学 生物医学工程分册 2003 05 6 dianov gl sleeth km dianova repair of abasic sites in dna 外文期刊 2003 1 2 7 olshan af watson ma weissler mc xrcci polymorphisms and head and neck cancer 外文期刊 2002 02 8 rybicki ba conti dv moreira a dna repair gene xrcc1 and xpd polymorphisms and risk of prostate cancer 外文期刊 2004 01 9 shen h xu y yu r polymorphism of the dna