【doc】 不分流进样毛细管柱气相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸.doc

不分流进样毛细管柱气相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸2005年9月第7卷第3期september.2005,vo1.7.no.3湖北中医学院journalofhubeicollegeoftcm?37?不分流进样毛细管柱气相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸王文芳,董春洲(湖北中医学院药学院,湖北武汉430064)摘要:目的研究一个新的气相色谱法测定山梨酸和苯甲酸.方法采用不分流/分流进样模式,f】毛细管作色谱分离柱,丙酮作溶解提取物溶剂,对饮料中山梨酸和苯甲酸进行测定结果线性范围为25300肛g/m,相关系数都大于0.999;山梨酸和苯甲酸的检出限分别为0.813g/ml和0.606g/ml;样品3次平行测定的相对标准偏差均小于6.42回收率均在87.o97.8%范围内.关键词:不分流进样毛细管柱气相色谱法;山梨酸;苯甲酸;饮料中图分类号:r284.1文献标识码:a文章编号:1008-987x(2005)03-0037-02determinationofsorbicacidandbenzoicacidinbeveragebycapillarycolumngaschromatographywithsplitlessinjectingsampleswangwen-fang.dongchurrzhou(departmentofpharmacy,hubeicollegeoftraditionalchinesemedicine.wuhan430064)abstract:anovelmethodwasstudiedforthedeterminationofsorbicacidandbenzoicacidinbeveragebygaschromatographywithfid,usingsplitless/split1tlodeofinjectingsamples,ffapcapillapyaschromatographyseparatingcolumnandacetoneassolventdissolvingextractionleavings.thelinearrangeis25300g/trd.thecorrelationcoefficientswerebetterthan0.999.thelimitsofdetectionwere0.813og/mlforsorbicacidand0.606ug/rn1forbenzoicacid.therelativestandarddeviationsfortripleanalysessampleswerenothigherthan6.42%.therecoverieswereallabove87.o%andbelow97.8%.keywords:splitlessinjectingsamples;capillarycoluamgaschromatography;sorbicacid;benzoicacid;beverage山梨酸和苯甲酸是广泛使用于饮料中的食品添加剂,具有挪制或杀灭微生物的作用,但过量使用会损害人体健康,因此国家标准规定了它们在食品中的最大使用限量.国标气相色谱法是目前测定食品中苯甲酸和山梨酸普遍使用的方法l1,也有使用石英毛细管柱测定山梨酸和苯甲酸的报道口.笔者使用不分流进样毛细管柱气相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的含量,结果满意.1实验部分1.1主要仪器与试剂gc7890气相色谱仪配fid检测器和分流/不分流进样器(上海天美公司);sepu3000工作站(杭州谱惠公司);ql型纯净空气泵和q乙型氢气发生器(山东济南应用化工科技开发公司);高纯氮气(99.999,武汉钢铁公司);bs一2l型气体脱氧管(中国科学院大连化物所);30rex0.32mmld.,0.5tmffap石英毛细管柱(中国科学院兰州化学物理研究所).标准溶液:准确称取国家标准物质苯甲酸和山梨酸(gbw(e),国家标准物质研究中心)各loomg,置于5ornl容量瓶中,用优级纯丙酮溶解并定溶至刻度.此液被测物浓度各为2.0n1g/ml,根据实验需要,用丙酮稀释成不同浓度的标准使用液.作者简介:王文芳(i966一),女,i6ij北中医学院药学院实验师.丙酮,无水乙醚,石油醚(306o),盐酸(1+1),40g/l氯化钠酸性溶液和无水硫酸钠均为分析纯试剂l_2色谱条件柱温,起始230以5/rain升至240,保持6min;进样口温度:250;检测器温度:250;载气.高纯氮经净化管后再经脱氧管脱氧,柱前压,150kpa:尾吹气,22ml/min!进样量1l,选样不分流0.3min后再自动转换为分流,分流比26:1.2实验方法取2.5ml饮料置于25m1具塞带刻度比色管中,加0.5ml盐酸(1+1)酸化,用15ml,10ml乙醚提取两次,每次振摇lmin,将上层乙醚提取液吸入另一25ml具塞带刻度比色管中.合并乙醚提取液.用3ml氯化钠酸性溶液(40g/l)洗涤两次,静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25mi容量瓶中.加乙醚至刻度,混匀.准确吸取5ml乙醚提取液于1oml具塞刻度试管中,自然挥干.以上操作参照国标法l1.准确加入2.oml丙酮溶解残渣,供色谱分析用,每次进样1肛l.记录峰面积,标准曲线法定量.3结果3.1色谱分离为达到理想,快速的分离效果,试验了不同升温程序,柱前?38?湖北中医学院2005年第7卷第3期压,分流比和尾吹气流量等条件的分离效果.经大量实验筛选和优化,选定柱前压150kpa,分流比26.1,尾吹气流基22m1/hlin,柱箱升温程序为起始230”c以5/min升至240,保持6min一个分离周期不足10rain.3.2不分流时间的确定用0.11.omin的不分流时间实验,不分流时间为1.omin时,溶剂峰为很宽的巨大平头峰,并与被测物山梨酸的峰相邻很近,被测物峰型较宽,表明色谱柱负载过大,分离效能降低;不分流时间为0.3min时,溶剂峰变得很窄,被测物峰型变窄变高,分离效果明显改善另外,不分流时间由1.omin减少到0.3min时.被测物峰面积虽有减小,但并不显着.当不分流时间小于0.3min时,被测物峰面积显着下降.笔者选择不分流时问0.3min.3.3溶荆的选用实验中发现,用乙醚一石油醚(1+3)混合溶剂作为进样液溶剂时,进样误差较大,5次平行测定山梨酸和苯甲酸的rsd分别为8.6o和10.2.改用丙酮作溶剂,5次平行测定山梨酸和苯甲酸的rsd分别为1.55和2.08.故本实验配制标准溶液和溶解提取物残渣都选用丙酮作溶剂.3.4标准曲线与检出限用25500fg/ml范围的系列标准液做标准曲线,仪器响应值取峰面积,经线性回归分析,两种被测物在25300fg/ml的范围内线性较好(按本实验方法,相当样品浓度范围为0.11.2g/l).其中山梨酸的相关系数r=0.9992;苯甲酸的相关系数r=0.9995.检出限以3倍噪音计算,山梨酸和苯甲酸的检出限分别为o.813g/ml和0.606,ug/n,明显低于分流进样的毛细管气相色谱法.3.5精密度与准确度用青苹果味美年达和玛卡力饮料做加标回收试验.取两种饮料各9份,每份2.5ml,其中3份做本底值测定,用2001和4001含2.omg/m山梨酸和苯甲酸的混合标准液做两个水平的加标回收测定各3份.按实验方法进行样品处理和测定.3次平行测定的相对标准偏差都小于6.42%,回收率范围为87.ooa97.8.测定结果见表1.寰1样品加标回收测定结果(均值,-3)百事可乐轻怡酸梅膏玛卡力青苹果味美年达葡萄味美年达均值rsd均值rsdz均值rsd均值rsdz均值rsd%“nd”表示未检出.4讨论由于毛细管色谱柱容量小,为避免过载,一般在样品进入毛细管色谱柱前要进行分流.分流使大部分被测物流失,大大降低了方法的灵敏度.笔者使用ffap石英毛细管柱,采用先不分流进样,待注入的被测物几乎全部进入毛细管柱后再自动转换成分流的模式,避免了被测物的流失,也避免了色谱柱过载.由于用低沸点的乙醚和石油醚作进样溶剂,易产生进样误差口经对溶剂进行优化,采用丙酮作进样溶剂,不仅使方法的灵敏度高,准确性好,也获得了很高的精密度本法操作简便,准确度高.值得推广.参考文献:1中国预防医学科学院标准处.中华人民共和国标准