主管检验技师考试临床医学检验微生物检验讲义第13章病原性球菌及检验.doc

病原性球菌及检验 考点葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属 生物学性状 微生物学检查法 临床意义（致病性、所致疾病）【内容讲解】普及共性，单记个性生物学性状 形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。 培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。 生化反应：特殊生化。 抗原： 分类：致病性 致病物质 所致疾病微生物学检查：针对生物学性状和致病性。一、葡萄球菌属一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。（一）生物学特性1.形态与结构G+，球形，0.51.5m，呈葡萄串状成堆排列（在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列），无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适pH为7.4，最适温度为3537。普皿：圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为23mm。可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。血琼脂平板：几乎所有的葡萄球菌可产生、和溶血素。液体培养基：生长迅速呈均匀混浊状。3.生化反应触酶试验（+）；多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气；分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶（多数致病性葡萄球菌）。4.抗原（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：A型多糖抗原；B型多糖抗原；C型多糖抗原。5.分类（1）伯杰系统细菌学手册（2）古典分类法6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐。是抵抗力最强的无芽胞细菌。（二）临床意义葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。（1）金黄色葡萄球菌致病物质：血浆凝固酶；葡萄球菌溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮溶解毒素；毒性休克综合征毒素。（2）表皮葡萄球菌存在于皮肤的正常栖居菌，为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。（3）腐生葡萄球菌导致尿路感染的常见病原菌之一。（三）微生物学检查标本采集（不同疾病采集不同标本）：脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。鉴定试验：报告：检出“XXX葡萄球菌”耐药性检测检测耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。（四）治疗原则由于耐药菌株日益增多，治疗葡萄球菌感染时，应根据体外药敏试验选择抗生素。如果是危、急、重症感染，应首先根据经验选药，如万古霉素等，待体外敏感试验结果回报后，再调整用药，针对治疗。二、链球菌属（一）生物学特性1.形态与染色G+，圆形，0.81.0m，呈链状排列（在液体培养基中易成长链。在脓汁标本中为短链，成双或单个散在）。无鞭毛、无芽胞，某些菌株在血清肉汤中可有荚膜。2.培养特性大多为需氧或兼性厌氧菌，少数微需氧及专性厌氧。营养要求较高。最适温度为3537，最适pH为7.47.6，在5%CO2环境下生长更好。液体培养基：溶血性菌株呈絮状或颗粒状沉淀生长。上层液体澄清，可有菌膜。不溶血菌株则均匀浑浊生长。血琼脂平板：灰白色、圆形、凸起、细小菌落，不同溶血环。3.生化反应触酶试验（-），能分解葡萄糖产酸不产气，对其他糖类的分解因不同菌株而异。4.分类（1）根据溶血能力分类： 甲型（）溶血性链球菌：本菌为条件致病菌。 乙型（）溶血性链球菌：该型细菌致病性最强，常引起人和动物多种疾病。 丙型（）链球菌：一般无致病性。（2）根据链球菌细胞壁抗原（即C抗原）分类，即常用Lancefield血清分型法：将链球菌分为A、B、C、DT等18个群（其中I和J缺），对人类有致病性的90%属A群，B、C、D、G群链球菌感染较少见。5.对理化因素的抵抗力不强，对各种常用消毒剂敏感，60加热30分钟即可杀灭。（二）临床意义A群溶血性链球菌致病物质所致疾病链球菌溶血素急性化脓性感染（丹毒、痈、蜂窝组织炎、咽炎、鼻窦炎、中耳炎、脑膜炎、产褥热）透明质酸酶链激酶，链道酶致热外毒素猩红热M蛋白变态反应性疾病（风湿热，肾小球肾炎）草绿色链球菌：属条件致病菌，常与亚急性心内膜炎相关。B群链球菌：是新生儿肺炎、脑膜炎和败血症的病原体。D群链球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。治疗原则：A群链球菌感染，青霉素G被列为首选。B群链球菌常常采用青霉素G和一种氨基糖苷类合用。（三）微生物学检查标本采集（不同疾病采集不同标本）：可采集脓汁、咽拭、痰、血、尿等标本。鉴定试验：三、肺炎链球菌（一）生物学特性1.形态与染色G+，球菌，呈矛尖状、钝面成双排列，有时呈短链状，0.51.25m，有荚膜（在人或动物体内易形成），无鞭毛，无芽胞。2.培养特性需氧或兼性厌氧；最适的温度为3537；最适的pH 7.68.0；营养要求较高。血琼脂平板：形成灰色扁平、中心凹陷（因菌落发酵所致）直径为0.51.0mm的菌落，周围有草绿色溶血圈。液体培养基：均匀混浊。但培养时间过长，可因产生自溶，培养液可变澄清，管底沉淀。3.生化反应多数菌株分解菊糖、胆汁溶解试验阳性、Optochin敏感试验阳性。（肺炎链球菌与草绿色链球菌的鉴别）。（二）临床意义致病物质：荚膜。所致疾病：大叶性肺炎、支气管炎。可继发胸膜炎、脓胸，也可引起中耳炎、鼻窦炎、脑膜炎及败血症。（三）微生物学检查1.标本采集2.试验方法及鉴定（1）直接涂片检查：经革兰染色，镜检见革兰阳性矛尖状双球菌。（2）分离培养：血液、脑脊液需增菌培养，呈均匀混浊，而且有绿色荧光。脓汁或脑脊液沉渣接种血琼脂，置5%10%C02环境中培养。（3）鉴定试验1）胆汁溶解试验（+）2）菊糖发酵试验（+）3） 0ptochin敏感试验（+）4）荚膜肿胀试验（+）5）动物试验：小白鼠对肺炎链球菌极为敏感。6）快速乳胶凝集试验（+）四、肠球菌属肠球菌属是肠道的正常栖居菌。（一）生物学形状1.形态和结构G+，成双或短链状排列的卵圆形球菌，无芽胞，无荚膜，部分肠球菌有稀疏鞭毛。2.培养特性营养要求高，需氧及兼性厌氧。在胆汁七叶苷和含6.5%NaCl培养基中可以生长（此点可与链球菌鉴别）。血平板上主要表现为-和-溶血。3.生化反应触酶（-），多数肠球菌能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR）。与同科链球菌的显著区别：能在高盐（6.5%NaCl）、高碱（pH9.6）、40%胆汁培养基上和1045环境下生长；对许多抗菌药物表现为固有耐药（如复方增效磺胺、头孢菌素、克林霉素和低浓度的氨基糖苷类）。（二）临床意义肠球菌是G+菌中仅次于葡萄球菌属的重要医院感染病原菌。最常见的为尿路感染，其次为腹部和盆腔等部位的创伤和外科术后感染。临床上分离率最高的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌。肠球菌致病基因：主要有细胞溶解素激活基因、明胶酶基因、表面蛋白基因、胶原蛋白黏附素基因、聚集物质基因和粪肠球菌心内膜炎基因等。（三）微生物学检验采集标本：如尿液、脓汁、胆汁、分泌物或血液等。方法：以直接涂片进行初步检查。分离培养后，挑取可疑菌落，进行涂片、染色、镜检、触酶试验、胆汁七叶苷试验和6.5%NaCl耐受试验，可鉴定到属。耐药性检测：一般要测试对-内酰胺类尤其是青霉素类（如青霉素、氨苄西林）、万古霉素和氨基糖苷类（如庆大霉素）的敏感性。同时也应对-内酰胺酶进行测试。（四）结果评价药敏结果中必须注明-内酰胺类（如青霉素G、氨苄西林）的敏感性。庆大霉素的耐药水平（是否为高水平耐药）万古霉素的敏感性以及-内酰胺酶测试结果。（五）治疗原则一般采用-内酰胺类和氨基糖苷类联合治疗，氧氟沙星与氨苄西林有协同作用。必要时还要改用万古霉素或替考拉宁。五、奈瑟菌属G-，双球菌，无鞭毛，无芽胞，有菌毛。专性需氧，氧化酶阳性。本属主要有9个种。其中对人致病的是脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。脑膜炎奈瑟菌简称脑膜炎球菌，是引起流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。1.生物学特性（1）形态与染色：G-，菌体呈肾形，坦面相对，成对排列，0.61.5m，在患者的脑脊液中位于中性粒细胞内。（2）培养特性：营养要求高，属苛养菌。最适温度为3537，最适pH为7.47.6。（3）生化反应：绝大多数菌株能分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气（因淋病奈瑟菌不分解麦芽糖，借此与之鉴别）；不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖，硝酸盐还原试验阴性不分解尿素、不产生H2S和靛基质；触酶试验阳性，氧化酶试验阳性。（4）抗原及分型：主要有四种抗原：荚膜多糖群特异性抗原、外膜蛋白型特异性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。根据群特异性荚膜多糖抗原不同，将本菌分为A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。目前，对人致病的主要是A群，偶见B群、C群及1916群引起散发病例。2.临床意义致病物质：菌毛，荚膜，内毒素。所致疾病：脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎的病原菌。主要表现发热，皮肤瘀斑，脑膜刺激症状。存在于携带者或病人的鼻咽部，借飞沫经空气传播，冬末春初为流行高峰。3.微生物学检验（1）标本采集：血液；瘀斑渗出液；脑脊液；鼻咽分泌物。注：因本菌能产生自溶酶，易自溶，故采集的标本不宜置冰箱，应立即送检。（2）检验方法及鉴定：1）直接涂片检查：取脑脊液离心后沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定后革兰染色。若发现中性粒细胞内（或胞外）革兰阴性双球菌，呈肾形成对排列，可初报。2）分离培养：将标本增菌培养液直接接种于血琼脂平板、巧克力琼脂或EPV琼脂，置5%10%C02环境中，35培养1824h后可见圆形、灰褐色、湿润、光滑、边缘整齐、直径12mm的小菌落。3）鉴定：细菌染色形态： G-，菌体呈肾形，坦面相对，成对排列。氧化酶试验（+）触酶试验（+）分解葡萄糖、麦芽糖产酸不产气荚膜多糖抗原直接凝集试验4.治疗原则：青霉素G为首选，三代头孢对脑膜炎奈瑟菌也具有很强的抗菌活性。青霉素过敏的病人可考虑选用三代头孢或氯霉素。淋病奈瑟菌简称淋球菌，是淋病的病原体，人类是其唯一的天然宿主和传染源。1.生物学特性（1）形态与染色：G-，球形或肾形，成对排列，0.60.8m。在脓汁标本中，通常位于中性粒细胞内，而在慢性淋病时常位于细胞外。从患者体内新分离的菌株可有荚膜和菌毛，无芽胞和鞭毛。（2）培养特性：营养要求较高，国内常用血液琼脂、巧克力琼脂、EPV琼脂等培养基。最适pH为7.5，最适温度为3537。初次分离时，须置5%10%CO2条件下才能生长发育。菌落：表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直径0.51.0mm的圆形菌落。（3）生化反应：对糖类生化活性最低，本菌可发酵葡萄糖、产酸，但不酵解麦芽糖（常借此与脑膜炎奈瑟菌相鉴别）。氧化酶和触酶试验均阳性。（4）主要抗原：菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。（5）抵抗力：对外界抵抗力极低。2.临床意义：淋病奈瑟菌是常见的性传播疾病淋病的病原菌，主要通过性接触直接侵袭感染泌尿生殖道，口咽部及肛门直肠的黏膜。如单纯性淋病、盆腔炎、淋菌型结膜炎。3.微生物检验（1）标本采集：脓性分泌物，尿道拭子，宫颈口分泌物，眼结膜分泌物，血液。（2）检验方法及鉴定1）直接涂片检查：收集标本后立即涂片、革兰染色，镜检时见中性粒细胞内数对革兰阴性双球菌，可初诊。2）分离培养：细菌培养仍是目前世界卫生组织推荐的筛选淋病患者的唯一方法。及时接种含有两种以上抗生素（万古霉素和多黏菌素等）的营养培养基上。3）鉴定：生化反应：氧化酶阳性，仅分解葡萄糖产酸；不发酵麦芽糖与蔗糖，30%H2O2试验阳性可与脑膜炎奈瑟菌等相鉴别。免疫学方法：荧光抗体染色法、协同凝集试验。核酸探针杂交法。4.治疗原则对青霉素和四环素耐药的淋病奈瑟菌越来越多，目前一线用药一般为三代头孢菌素，氟喹诺酮类、大观霉素可作为替代药物。对氟喹诺酮类、大观霉素的耐药也有报道。六、卡他布兰汉菌 G-，双球菌，约0.61.0m，无芽胞，无鞭毛。 营养要求不高，在普通培养基上1820即可生长，借此可与脑膜炎奈瑟菌鉴别。需氧，菌落光滑，直径约13mm，不透明，灰白色，菌落易从培养基上刮下。 氧化酶和触酶阳性，产DNA酶，大部分菌株还原硝酸盐和亚硝酸盐，借此可与奈瑟菌属相鉴别。 可致中耳炎、鼻窦炎、肺炎。【例题】SPA是A.肠杆菌科的细菌的抗原B.葡萄球菌细胞壁的蛋白成分C.沙门菌的表面抗原D.核蛋白抗原E.链球菌属表面抗原答疑编号502389130201【正确答案】B【例题】鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌可用A.外斐试验B.肥达试验C.乳糖发酵试验D.菊糖分解试验E.血浆凝固酶试验答疑编号502389130202【正确答案】D【例题】B群链球菌不引起下列哪种疾病A.败血症B.肺炎C.脑膜炎D.咽喉炎E.风湿热答疑编号502389130203【正确答案】E【例题】引起剥脱性皮炎的细菌是A.肺炎球菌B.链球菌C.金黄色葡萄球菌D.脑膜炎奈瑟菌E.肠球菌答疑编号502389130204【正确答案】C【例题】淋病奈瑟菌与脑膜炎奈瑟菌鉴别用A.葡萄糖发酵试验B.麦芽糖发酵试验C.氧化酶试验D.触酶试验E.革兰染色答疑编号502389130205【正确答案】 B【例题】一位老年患者因外伤