左旋多巴合成研究进展.pdf

化 工 进 展 2013 年第 32 卷 第 6 期 C H EM IC A L IN D U STR Y A N D EN G IN E E R IN G PR O G RE SS I367 左旋多巴合成研究进展 马强强 赵广荣 天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室 天津 300072 摘要 左旋多巴是治疗帕金森病的首选药物 在临床 中应用广泛 本文评述了近年来左旋多巴合成的相关研究 进展 包 括全化学合成 天然植物中 提取 生物酶转化以及代谢工程策略 全化学合成左旋多巴由于步骤多而且 不对称性合成 存在工艺复杂和环境污染等问题 植物提取制备左旋多巴产量低 受到资源限制 生物转化包括 酪氨酸酚解酶 酪氨酸酶及转氨酶等催化苯类前体合成左旋多巴 提出随着合成生物学的发展 构建代谢工程微 生物 发酵生产左旋多巴是一种高效 环境友好的新方法 具有良好的应用前景 关键词 左旋多巴 全化学合成 植物提取 生物转化 代谢工程 中图分 类号 Q 815 文献标志码 A 文章编号 1000 6613 2013 06 1367 05 D o I 10 3969 i ssn 1000 66 13 2013 06 028 R esearc h p rogress i n L D O PA syn thesi s M A Q i angqi ang ZH A O G uangrong K ey L ab orato ry o f S y stem s B i o en g i neeri ng M i n i stry of E du c ati o n S c ho ol of C h em i c al E ng i neering an d T ec hn ol ogy Ti anji n U ni versi ty T i an ji n 300072 C hi na A b strac t L d op a has been w i del y u sed i n c l i ni c al treatm ent for P arki nson S d i sease T h e m etho ds fo r L D O PA produ c ti on i nc l u di ng total c hem i c al synth esi s extrac ti on fr om p l ants en zym e bi oc onv ersi on and m etabol i c eng i n eeri n g w ere su m m ari zed i n th i s revi ew T h e total c hem i c al sy nthesi s of L dopa w as c om p l i c ate due to i ts asym m etri c proc ess and assoc i ated w i th c ertai n env i ron m ental i ssu es E xtr ac ti ng L dopa from p l ant su ff ered l ow yi el d an d w as l i m i ted by pl ant resourc e B i oc onversi on o f p henol s to L d opa ha s been c atal yzed by en zym es tyrosi ne ph en ol l yase tyrosi nase and tr ansam i nase It i s sug gested that w i th th e devel opm ent of synth eti c b i o l o gy ferm entati on o f L dopa by c on struc ti n g m etabol i c al l y eng i n eered m i c ro organ i sm s w ou l d be a new hi gh effic i ent and env i ronm ent fr i en dl y m etho d w hi c h dem onstrates a p ro m i si ng proc ess K ey w ords L d opa tota l c h em i c al synthesi s p l an t extrac ti on bi oc onversi o n m etabo l i c eng i n eeri n g 左旋多巴 L D O PA 化学名为 B一 3 4一 二羟苯 基 c c 一 丙氨酸 3 4 2di hydroxyl phenyl al ani ne 图 1 a 又名 3一 羟基 L 酪氨酸 为 白色结晶性粉 无臭无味 不溶于乙醇 氯仿和丙酮 易溶于稀酸 左旋多 巴 为前体药物 其作用机理为左旋多巴能通过血脑屏 障 到达中枢神经系统 在脱羧酶的作用下 转变 为多巴胺 图 2 b 进而发挥治疗帕金森综合症的作 用 1 左旋多巴于 1970 年被美国食品药品监督管理 局批准为治疗帕金森综合症的药物L2J 在 2007 年世 界畅销药中排名第 100 名 2008 年销售金额突破9000 万美元 左旋多巴具有广阔的市场前景 N H 2 H 0 H O a 左旋多巴 b 多巴胺 图 1左旋多巴和 多巴胺分子结构 收稿 日期 2012 11 27 修改稿 日期 20 13 01 17 基金项目 高等学校博士点基金项 目 20090032 1100 15 第一作者 马强强 I985一 男 硕士研究生 联系人 赵广荣 教 授 博士生导师 E m ai l grzhao tju edu c n 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 1368 化 工 进 展 2013 年第 32 卷 目前左旋多巴的制备方法主要有化学合成 植 物提取 生物酶催化 以及微生物发酵 由于化学合 成和植物提取方法具有一定的局限性 20 世纪 60 年代末 国内外一些学者开始探索生物酶法合成左 旋多巴 日本学者 Y am ada 等L4J通过菌种选育及发 酵条件的优化合成左旋多巴 其研究成果 己用于工 业化生产 彭珍荣等L5J在国内开展微生物法合成左 旋多巴方面 的研究 左旋多巴的产量 已经达到 了 250 t a 微生物酶法合成左旋多巴的生产效率 己达 到 11 1 g L h 6J 本文重点针对生物酶催化和微生 物发酵生产左旋多巴的研究进行评述 并对左旋 多 巴合成的研究方向进行了展望 2 天然植物中提取左旋多巴 天然植物中存在左旋多巴 1913 年生物化学家 G uggenhei m从蚕豆中提取得到左旋多巴 之后在 很 多植物 中均发现存在左旋 多巴 如猫豆 藜豆 等 l 1 其 中猫豆中的左旋多巴含量最高达到 6 4 9 是提取左旋多巴最主要的原料 通过改 良提取 技术 使得猫豆中左旋多巴的提取得率 从 1 5 己 提高到 3 4 纯度达到 99 9 l l 引 虽然从植物中直 接提取左旋多巴是 目前的一种方法 但是 由于受到 原料来源 的限制 并且提取步骤繁杂 产量小 远 不能满足市场需求 1 化学合成左旋多巴 3 生物酶转化合成左旋 多巴 19 11 年 Funk C 首次利用 3 4 碳酰二氧苯 甲醛 为原料合成左旋多巴 7 左旋 多巴中含有一个不对 称碳原子 因此在合成 的过程 中有必要保持其较高 的 旋 光 值 Know l es 8J发 现 双 膦 配 体 D i PA M P phospH i ne l i gand D i PA M P 的催化氢化 可 以取 得较高的对映选择性 而且 D i PA M P 第一次在脱氢 氨基酸的不对称氢化取得了大于 95 ee 的高对映选 择性 随后该思路应用于左旋多巴的不对称合成 并且得到了 97 5 ee 的左旋多巴 王伟文等 9 成功 以愈创木酚为原料 经过八步合成反应得到多巴 且具有较高的纯度与收率 图2 目前 工业化生产左旋多巴多以香草醛和乙内 酰脲为原料 经过 8 步的反应制得 尽管 目前商品 化左旋多巴主要通过不对称法合成 但化学合成过 程中需要大量的金属催化物 并且过程繁杂 产物 的转化效率和旋光活性均较低 同时具有成本高 环境污染严重等 问题 1 所以开发新的合成方法和 思路是今后研究的重点和方向 一 H 3C O N O l C H 3 一 H i l l l H C O N H C O O H 3 生物酶转化法主要 以 L 酪氨酸或酚类物质为 底物 通过来源于微生物 的酶体外制取左旋多巴 目前己报道 3 种酶可以催化多巴的生成 酪氨酸 酚解酶 该酶以邻苯二酚 氨水以及丙酮酸为底物 酪氨酸酶 该酶 以酪氨酸为底物 羟化酪氨酸生 成左旋多巴 转氨酶 该酶将来源于天冬氨酸或 谷氨酸上的氨基转移至 3 4 二羟基苯丙酮酸 生成 左旋多巴 3 1酪氨酸酚解酶法合成 酪氨酸酚解酶 tyrosi ne phenol l yase TPL E C 4 1 99 2 可催化苯酚 丙酮酸和氨水生成酪氨酸 该反应为可逆反应 若将苯酚置换成邻苯二酚 该 酶即可催化生成左旋多巴 图 3 催化反应过程中 需要磷酸吡哆醛 胺 为辅酶 钾离子和氨离子为 辅因子 131 该酶广泛存在于多种微生物中 如假单 胞菌属 真菌 链霉菌 16 等 其中草生欧文 氏 菌 Erw i ni a herbi c ol a 弗氏柠檬酸菌 C i trobac ter freundi i 中的酪氨酸酚解酶活性较高 H 3C O C C C O O H l l l H I H 3C O N HC O C H 图 2 以愈创木酚为原料合成多巴 一 一 岫莹 1 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 第 6 期 马强强等 左旋多巴合成研究进展 1369 H c H CHCO H CHsCOCOOH岫 n o C H C O O H H 20 m C H 3C O C O O H 洲 H0 N H2 H d Lee 等 用来源于 Sym bi obac teri um sp SC 一 1 的 酪氨酸酚解酶 T PL 将邻苯二酚 丙酮酸和氨转 化为左旋多巴 反应 15 h 以后 左旋多巴的产量可 以达到 65 g L 收率可达到 92 上述催化体系中 当邻苯二酚及丙酮酸的浓度较高时会对 T PL 产生 抑制作用甚至不可逆失活 在发酵体系中加入一些 硼酸根离子可以减轻邻苯二酚对酶的抑制作用L1 然而该催化体系存在一些缺点 引 反应时间长 转 化效率不高 分离成本高 原料比较昂贵 3 2酪氨酸酶法合成 酪氨酸酶 tyrosi nase 以酪氨酸直接作为底物 催化合成左旋多巴 图 4 该酶同时具有单酚氧化 酶和二酚氧化酶氧化还原作用 其中单酚氧化酶催 化单酚羟基化 二酚氧化酶可将二酚类化合物氧化 为 醌 类 化 合 物 K ri shnaveni等 UJ利 用 真 菌 A c rem oni um ruti l um转化酪氨酸合成左旋多巴 该 菌具有较高的酪氨酸酶生产能力 经过优化培养条 件后 连续培养 120 h 最大产量是 0 89 m g m L H o 等 2l J将来源于蘑菇 的酪氨酸酶通过固定化 的方 法转化合成左旋多巴 酪氨酸酶用聚苯 乙烯一 聚酰胺 苯乙烯 P SN H 和聚甲基氯苯 乙烯 PSC L 固定 催化的最适 pH 值和最适温度分别为 5 5 和 60 3 0 和 7O 反应 36 h 后 两种 固定化方式催化生 成左 旋 多 巴的产 率分 别为1 44 m g L h 和 2 33 m g L h 这两种固定方式中 PSC L 上的酪氨酸酶 稳定性 明显高于 P SN H A tes 等L2 将酪氨酸酶固定 一 N P I2 H 3 4一 二羚基苯丙酮酸 谷氨酸 LU co o H H c INH2 C 0 H H OH咝 鲤 酪氨酸酶 O H H H 0 H O 丫 0 NH 2 图 4 酪氨酸酶催化酪氨酸合成 L D O PA 于含铜离子的海藻酸钠中 运用填充床酶法的方法 生产左旋多巴 产量达 1 2 m g L 若在反应体系中 引入空气 左旋多巴产量可以提高 6 4 倍 左旋多 巴生产效率达到 1 10 m g L h 然而这一过程需要 耗费大量还原剂 同时产物左旋多巴不容易分离 由于酪氨酸酶具有二酚氧化还原酶 的活性 会 将左旋多巴继续氧化生成多巴醌 为防止左旋多 巴 被氧化 可 以引入化学还原剂 如抗坏血酸 2 23 N A D H 或者羟胺L2 向多巴醌供应电子使其重新还 原为左旋多巴 M i na 等 对这一方法进行了改进 将 酪氨酸酶包被组 成酪氨酸酶 碳纳米一 多吡咯 电 极 由电极供应还原多巴醌的电子 左旋多巴的产 率提高 95 9 达到 27 m g L h 3 3转氨酶法合成 转氨酶 transam i nase 可将 L 一 天冬氨酸或 L 一 谷氨酸 中的氨基转移到 3 4一 二羟基苯丙酮酸上 进 而生成左旋多 巴 图 5 Sandi er 等 6 认为在左 旋 多 巴 中转 氨基 作 用是 非 常重要 的一步 随后 坚 暑 厂 H 一 H 左旋多巴 口 一 酮戊二酸 筮 氢 堕 H 广 H c oH H c 一 8一 c O0H HO H 图 5 转氨基 作用合成 多巴 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 1370 化 工 进 展 2013 年第 32 卷 N agasaki 等 一 研 究 了E nterobac ter c l oac ae N B 320 A l c al i genesfaec al i s 转氨基作用生成左旋多 巴的能力 然而由于转氨作用存在诸多问题 随后 相关利用转氨酶生成左旋多巴的研究比较少见 4代谢工程策略合成左旋多巴 李华钟等 2 lj uI将来源于 Ci trobac ter freundi i的 酪氨酸酚解酶基因导入大肠杆菌中进行异源表达 并对发酵培养基进行了优化 优化 的反应体系中添 加了底物丙酮酸 邻苯二酚及 0 1 ED TA 0 2 亚 硫酸钠 氨水调节 pH 8 15 反应 16 h 左旋多 巴的产量可达 15 36 g L K atayam a 等 4 l l对 Erw i ni a herbi c ol a 进行代谢工程改造 合成左旋多巴 他们 发现 TVrR 是酪氨酸酚解酶基因的转录激活因子 通过随机突变筛选得到 TvrR 突变体 TyrV 67A Y 72C E20 1G 提高酪氨酸酚解酶基因的表达量 进而提 高左旋多巴的生成 发酵末期左旋多巴产率由 0 357 g L h 提高到 了 1 1 1 g L h K urt 等 2l将来源于 Vi treosc i l l a 血红素基因导入 C i trobac ter freundi i 和 Erw i ni a herbi c ol a 中 左旋多巴的产量分别由未导 入之前的 30 4 m g L 和 33 8 m g L 提高到 112 m g L 和 9 7 m g L M unoz 等 3j改造大肠杆菌代谢通路合成左旋 多巴 他们首先敲除葡萄糖磷酸转移酶基因和过表 达转酮醇酶基 因 增加磷酸烯醇式丙酮酸和 4一 磷酸 赤藓糖的积累 为酪氨基酸合成提供足够前体 结 果显示 L 酪氨酸比生产速率提高 3 倍 敲除酪氨酸 合成代谢中的抑制因子基因 L 酪氨酸比生产速率 提高 1 9 倍 解除酪氨酸的反馈抑制 将代谢通量 由磷酸烯醇式丙酮酸引向合成 L 酪氨酸 进一步通 过表 达 分支 酸变 位酶 基 因和来 源 于 Zym om onas m obi l i s 的环 己二烯脱羟酶基因 增大该代谢通路的 通量 在基本盐培养基 中发酵 左旋多巴比生产速 率达 13 6 m g g h 得率为 51 7 m g g 在发酵罐中 发酵结果显示左旋多巴产量达 1 51 g L 5 总结和展望 随着我国人口老龄化速度的加快 左旋多巴的 需求将迅速增加 随着代谢工程 合成生物学的发 展 天然产物药物的异源生物合成已经成为可能并 受到越来越多的关注 由于化学合成和植物提取存 在很多问题 通过生物转化法和微生物发酵法合成 左旋多巴是今后研究的重要方向 1 开发新型高效的生物酶催化体系 为生物 转化提供技术支撑 挖掘新型高效催化合成左旋多 巴相关酶 对 已有酶进行突变 高通量筛选高活性 酶 探索高效酪氨酸酚解酶和酪氨酸酶 的固定化方 法 进一步提高酶的寿命和使用周期 2 运用代谢工程和合成生物学的思路 从细 胞整体角度 从头设计左旋多巴的微生物合成途径 探 明左旋多巴生物合成中的限制因素 并对其进行 系统改造 构建高效生产左旋多巴的工程微生物 目前 植物来源的紫杉醇和青蒿素前体在大肠杆菌 和酵母中得到高效合成 为左旋多巴工程菌创建具 有示范价值 同时开发新型左旋多巴的工程菌株 如在链霉菌中发现了具有合成左旋多巴的基因 可 改造使其具有较高的工业化应用潜力 3 开发新型左旋多巴衍生物的生物合成路 线 左旋多巴的很多衍生物如甲基多巴 氧 甲基多 巴 卡比多巴 左旋多巴酯 咪唑啉酮等均具有重 要的生理功能和临床应用 探索这些衍生物的生物 转化 或者 微生 物合 成路 线 也是今 后研 究 的一 个 方向 参考文献 1 Poew e W A ntoni ni A Z ijl m ans J et al Levodopa in the treatm ent of Parkinson S di sease A n ol d drug sti l l goi ng strong J C l i ni c al In terven ti o n s in A g e in g 2 0 1 0 5 22 9 2 3 8 2 A bbott A Levodopa The hi story SO far J N ature 20 10 466 S6一 S 7 3 H uynh The Par ki nson S di sease m arket J N ature Revi ew s D rug D i sc o ve ry 2 0 1 1 10 5 7 1 57 2 4 Yam ada H K um agai H Synthesi s of L tyrosi ne related am i no ac i ds by p tyrosi nase J A dvanc es i n App l i ed M i c robi ol ogy 1975 l 9 24 8 2 8 8 5 彭珍荣 万品珍 L 酪氨酸合成L 多巴的研究 J1 氨基酸杂志 1989 4 1 2 6 K oyangi T K atayam a T Suzuki H et a1 H yperproduc ti on of 3 4一 di hydroxyphenyl L al ani ne L D O PA usi ng E rw i ni a herbi c ola c el l s c arryi ng a m utant transc ri pti onal regul ator tyrR J B i osc i enc e B io tec hn o l ogyt a nd B i oc he m i stry 2 0 0 9 7 3 5 12 2 1 122 3 7 H ornykiew i c z O L D O PA From a bi ol ogic al l y i nac ti ve am i no ac i d to a suc c essful th erapeuti c agent J A m i no A c i ds 2002 23 65 70 8 K now l es W S A sym m etri c hydrogenati on J A c c ount of C hem i c al R es ea rc h l 9 8 3 16 1 06 1 12 9 王伟文 惠云身 左旋多巴合成工艺研究 J 西北药学杂志 1994 9 4 172 173 10 Val desR H PuzerL G om es M et a1 Produc ti on of L D O PA under heterogeneous asym m etri c c atalysi s J Catalysi s C om m uni c ati ons 20 0 4 5 10 63 1 6 34 11 B ehera A Sankar D G M oi tra S K et a1 Isol ati on c harac teri zati on an d q u an ti fi c ati o n of l ev od o p a i n se ed s of M uc un a p ruri en s an d herbal form ul ati on by spec trophotom etry J P harm A nalysi s and Q ual i ty A ssuranc e 20l 1 2 135 146 12 黄增琼 蒋伟哲 巫世红 毛豆的研究 J 进展药学专论 2008 17 2 4 5 16 学兔兔 w w w x u e t u t u c o m 第 6 期 马强强等 左旋多巴合成研究进展 1371 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Fi tzpatri c k P F M ec hani sm of arom ati c am ino ac i d hydr0 xy1ati on J1l B i oc hem i stry 2003 42 48 14083 14091 彭珍荣 假单胞菌属细菌产酪氨酸酶的研究 氨基酸杂志 1990 l 7 9 H ap I A l i S Q adeer M A B i osynthesi s of L D O PA by Aspergi l l us oryzae J B i oresourc e Tec hnol ogy 2002 85 1 2 5 29 N eu sser D S c h m i d t H Sp i zek J et a1 T h e gen e s l m bB 1 an d lm bB 2 o f Strep to m y c es l i n c o l n en si s en c o d e en zy m es i n v ol v ed i n th e c o n ve rsi o n o f L ty rosi n e to p rop y l pro l an e d uri n g th e b i o sy n th esi s of the anti bi oti c l i nc om yc i n A J l A rc hieves of M ic robi ol ogy 1998 164 4 3 2 2 3 3 3 L ee S G H ung S P S u ng M H D ev e l op m en t o f an en z ym ati c sy stem for the produc ti on of dopam i ne J Enzym e and M i c robi al Te c hn o l ogy 19 9 9 2 5 2 9 8 3 02 K um agai H Y am ada H M atsui H et a1 Tyrosi ne phenol l yase I puri fi c ati on c rystal l i zati on and properti es J The Journal of B i o l og i c a l C he m try 19 70 2 4 5 17 6 7 17 7 2 H u an g S Y S h en Y W C h an H S D ev e l op m en t o f a b i o re ac tor operation strategy fo r L D O PA produc ti on usi ng Stizol obi um hassjoo suspensi on c ul ture J E nzym e and M i c robi al Tec hnol og 2002 3O 6 7 7 9 79 1 K ri shn aven i R R ath od V T h aku r M S et a1 T ransform ati o n of L tyrosi ne to L d op a by a n ov el fi m gu s A c rem o ni u m ruti l um un d er su bm erg ed ferm entati on J C urrent M i c robiol ogy 2009 58 2 122 128 H o P Y C h i o u M S C ha o A C P ro d uc ti on o f L D O P A by ty ro si n ase im m obi l i zed on m odi fi ed pol ystyrene J App l i ed B i oc hem istry and B i otec hnol ogy 2003 1l l 3 139 152 A tes S C o rten l i og l u E B ayrak tar E e t a1 P ro d uc ti on o f L D O PA u si n g C u al g i na te g el i m m ob i l i zed tyro si na se i n a b atc h an d p ac k ed bed reac tor J E nzym e and M ic robi al Tec hnology 2007 40 4 6 8 3 6 8 7 M ari am I A l i S R eh m a n A et a 1 L A sc o rb ate a stron g i n du c er o f L dopa f3 4一 di hydroxy L phenyl al ani ne produc ti on from pre grow n m yc el i a of A sp erg il l us oryzae N R R L 一 1560 J1 B iotec hnol ogy and App l i ed B i oc hem istry 2010 55 3 13 1 137 24 Seetharam G S avi l l e B A L D O PA produc ti on fr om tyrosi nase i m m obi li zed on Z eol i te J E nzym e and M i c robi al Tec hnol ogy 2002 3 1 6 7 4 7 7 53 25 M i na K Parkb D H Y oo Y J E lec troenzym ati c synthesi s of L D O PA J Journal of B i otec hnol ogy 20 10 146 40 44 26 San di er M Johnson R D R uth ven C J et a1 Transam i nati on i s a m ajor pathw ay of L dopa m etabol i sm fol l ow i ng peri pheral dec arboxyl ase i nhi bi ti on J N ature 1974 247 364 366 27 N agasaki T Sugiti a M Fukaw a H et a1 D O PA produc ti on w i th Enterobac ter c l oac ae N B 320 by transam inati on reac ti on J A g ri c ul ture B i ol o gya nd C h em is try 19 75 39 2 3 6 3 3 6 9 28 N agasaki T Sugi ti a M F ukaw a H Studi es on D O PA transam i nase of A l c al igenesfaec al J Agri c ul ture B i ol ogy and C hem try 1973 37 170 1 17 0 6 29 李华钟 孙伟 刘吉泉 等 弗氏柠檬酸细菌酪氨酸酚解酶基因在 大肠杆菌中的克隆与表达 J 工业微生物 2001 31 3 9 12 3O 李华钟 孙伟 王树英 等 重组大肠杆菌合成左旋多巴条件的优 化 工业微生物 2002 32 2 5 9 3 1 K atayam a T Suzuki H K oyanagi T et a1 C l oni ng and random m utag en esi s o f th e E rw i n i a h erb i c o l a ty rR g en e fo r h i gh l ev el expressi on of tyrosi ne phenol ly ase J Appl ied and En vi ronm ental Mi c ro b i ol o gy 20 0 0 6 6 1 1 4 7 64 47 7 1 32 K urt A G Aytan E O zer U et a1 Produc ti on of L D O PA and do p am i n e i n rec o m b i na nt ba c teri a b eari n g th e Vi treos c i l l a hem ogl obi n gene J B i otec hnol ogyJournal 2009 4 7 1077 1088 33 M un oz A J Chavez G H A nda R et a1 M etabol i c engi neeri ng of E sc h e ri c h ia c ol i fo r i m p ro v i n g L 一 3 4 d i h y drox y p he ny l a l an i ne L D O PA synthesi s fr om gl uc ose J Journal of Industri al M i c ro b i ol o gy a nd B i o te c h no l o gy 2 0 11 3 8 1 1 184 5 18 52 罐 上接第 13l 2 页 43 44 45 46 47 48 49 T i S n O 2 S b 20 3一 N b 2O s P bO 2 th in fi l m s a s el ec tro d e m ateri al for th e degradati on of phenol J Journal ofH azardous M ateri al s 2009 l 6 4 3 67 3 73 Y ao Y i n gw u Z h ao C hu n m ei Z h u Ji n P re pe ra ti on a nd c har ac teri zati on of PbO 2一 ZrO 2 nanoc om posi te elec trodes J E l ec tro c h i m ic a A c ta 2 0 12 6 9 146 15 1 T o n g S P M a C N F e n g H A n ov el P b O 2 el e c tr od e p rep ara ti on a nd i ts appl i c ati on i n organ i c degradati on J E l ec troc hi m i c a A c ta 2008 5 3 3 0 02 30 0 6 D uan X i ao yu e Ma F an g Y u an Z h on g x i n et a1 C om p arati v e studi es o n th e el ec tro c ata l yti c ox i d ati o n p erfo rnl an c e o f su rfa c tan t c arb on nanotube m od ifi ed PbO 2 el ec trodes J Journal of E l ec troanal yti c al C h em is try 2 0 12 6 77 6 80 9 0 10 0 付芳 杨卫华 王鸿辉 聚乙二醇改性钛基 P bO 2 电极的制备及性 质研究 无机材料学报 20 10 25 6 653 658 Y a n g W ei h u a Y an g W u ta o L i n X i ao ya n R e se ar c h o n P E G m o di fied B i dopi ng l ead di oxi de el ec trode and m ec hani sm J Appl i ed Surfac e S c i e ne e 2 0 12 2 5 8 57 16 5 7 22 杨卫华 付芳 杨武涛 聚乙烯吡咯