【精品】学习和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鉴定技术方法.ppt

学习和初步掌握油菜苗期菌核病抗性鉴定技术方法 一 目的 实验室苗期菌丝接种鉴定法方法简单易行 鉴定周期短 不受自然环境影响 适于对大量材料的筛选 另据初步研究 苗期菌丝接种鉴定表现抗菌材料 在花期仍表现抗病 在本实验中只学习和掌握苗期菌丝块接种鉴定法 二 内容说明 一 用品油菜不同品种种子 包括抗病品种如中油821 感病品种如84039的种子 生长室 平底塑料盘 60 30 4cm 园土 绿高一号液 北京北农绿高科技发展有限公司出产 马铃薯 纱布 葡萄糖 琼脂胶 试管 三角瓶 解剖刀 接种环等 三 所需用品和操作方法 1 土壤准备 取较肥沃的菜园土 清除石块 晒干敲碎 然后装入塑料盘中 需装满 二 主要作法 1 供试苗的种植 2 油菜播种 保证出苗后能保留生长一致苗30株 每10个品种设对照 二 主要作法 1 供试苗的种植 3 土壤消毒 播种后用2000 3000倍的绿亨一号溶液浇透土壤进行消毒 二 主要作法 1 供试苗的种植 4 播后管理 播后将塑料盘放于生长室内 在出苗期间 室内温度控制在20 以下 在出真叶后 控制20 24 左右 每2天喷水一次 二 主要作法 1 供试苗的种植 生长室 生长室外管理 1 pda培养基的制作 取马铃薯200g 洗净去皮切碎 加水1000ml 煮沸30min 用纱布过滤 将滤液加水补足到1000ml 加葡萄糖10 20g和琼脂胶17 20g 加热溶化 用纱布过滤 然后依需要 分别装入试管 用作贮藏菌种 或装入培养皿 用作培养菌丝接种菌 然后在高压灭菌锅内进行灭菌 二 主要作法 2 菌丝的培养 2 菌丝的培养 取贮存平板菌核病的菌丝 在无菌条件下移下装有pda培养基的培养皿上 每皿一小块 放在培养皿中间 在22 25 下培养3 4天 以菌丝长满 而又没有结核为宜 二 主要作法 2 菌丝的培养 1 接种 待油菜苗3 5片真叶时 将菌丝平板以无菌解剖刀切成0 5 0 5cm小块 将有菌丝的一面贴于叶片上 注意不要贴在叶脉上 每株接种1片叶 每叶接种1小块 见下图 二 主要作法 3 菌丝块的接种与管理 2 管理 接种后在23 26 温度和85 95 相对湿度下培养5 7天后即可调查 注意接种后前2天相对湿度应保持95 以上 以确保发病 后3 5天保持85 左右 使接种菌不致于腐烂 二 主要作法 3 菌丝块的接种与管理 在试验中当感病品种的发病率超过40 以上方为有效鉴定 一般将病害等级分为5个等级 即 0级 无病 1级 病斑面积占接种叶面积10 以下 2级 病斑面积占接种叶面积10 30 3级 病斑面积占接种叶面积30 50 4级 病斑面积占接种叶面积50 以上 二 主要作法 4 病害等级调查 1 计算发病率 二 主要作法 5 统计方法和抗性分级标准 2 计算病情指数 式中 gi为病害级别 ni为调查株数 i为0 1 2 k gk为最高级别 二 主要作法 5 统计方法和抗性分级标准 3 计算相对抗性指数 rri 式中 m为供试材料 ck为对照 rri 即relativeresistantindex 二 主要作法 5 统计方法和抗性分级标准 4 抗性分级标准 二 主要作法 5 统计方法和抗性分级标准 1