大学分子生物学期末考试大题.doc

.1.试比较原核生物和真核生物启动子结构的差别。答：原核生物启动子：Pribnow box（-10序列）：共同序列TATAAT，-4-13bp之间。决定转录的方向，是RNA pol的牢固结合位点，称为结合位点。Sexfama box（-35序列）：共同序列TTGACA，TTG十分保守，RNA pol全酶依靠因子的起始识别位点，也称识别位点。 真核生物启动子：TATA box：TATAAAA，两侧富含GC，位于-26-34，-30左右，决定转录起始的选择。CAAT box：GGC/TCAATCT，位于-75，-70-80，开头两个G的重要性等于CAAT部分，非常保守，可能是真核生物RNA pol II的结合部位，决定转录起始的频率。GC box：GGGCGG，位于-80-110，GC区与sp1等转录因子结合，可提高转录起始的频率。2.试比较原核生物和真核生物基因转录的差异RNA pol的差别：原核生物只有一种DNA pol负责转录所有类型的RNA；而真核生物有三种RNA pol（RNA pol），负责不同类型基因的转录，合成不同类型的RNA。转录产物的差别：原核生物的初始产物与Pr序列成线性关系。真核生物的初始产物包含内含子序列，因此转录产物需经过剪切，连接等过程除去内含子。转录产物的加工：真核生物转录产物要经过修饰作用，即与5端帽化和3端聚合化。与基因结构相吻合，原核生物mRNA是多顺反子，而真核生物mRNA是单顺反子。时空差异：原核生物的转录和翻译在细胞的同一部位进行。真核生物成熟的mRNA转移到细胞质内参与Pr的生物合成，转录和翻译相对独立。3.什么是基因表达？可用哪些技术来检测一个基因是否表达？基因表达，指生物基因组中结构基因所携带的遗传信息经转录和翻译等一系列过程，合成特定的蛋白质，进而发挥其特定的生物学功能和生物学效应的全过程。转录水平上的表达检测：Northern杂交、RTPCR、荧光定量PCR蛋白水平上的表达检测：Western杂交、含量、酶活等。4.mRNA前体加工中加尾和加帽的生物学功能有哪些？加尾的功能：有利于mRNA穿过核孔；稳定mRNA；增强翻译效率。加帽的功能：mRNA稳定；增加蛋白质合成效率；帽子结构对mRNA前体剪接是必需的。1.论述PCR技术的基本原理及其应用。依据体内DNA的半保留复制机理及DNA分子在不同温度下双链和单链可以相互转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，使双链DNA变成两条单链DNA，单链DNA用4种dNTPs在引物和DNA pol的作用下合成新生的DNA互补链。包括高温变性、低温退火和适温延伸三个阶段。PCR的应用：在分子生物学中的应用；在临床医学中的应用；在法医鉴定方面的应用。1.什么是C值矛盾，C值矛盾具体表现在哪些方面一般而言，随着生物的进化，生物体的结构与功能越复杂，其C值也越大。但真核生物中DNA含量并不与生物的复杂性相一致，这种反常现象称为C值矛盾。C值矛盾表现在：1）、结构、功能相似的同一类生物中，甚至亲缘关系十分接近的物种之间，它们的C值可相差10倍乃至上千倍。2）、较低等生物的C值大于较高等生物的C值3）、真核生物的C值之大，远远超过其基因编码所需试比较原核生物基因组和真核生物基因组的特点原核生物基因组的特点：不具备明显的核结构，只有核类，即DNA相对集中的区域.基因组小，一般只有一个染色体，大多为双链环状，少数为单链或线形.染色体DNA并不于Pr固定地结合，不具核小体结构.结构简练，重复序列和非编码序列很少，体现经济原则.功能密切相关的基因构成转录单元，并常转录成含多基因信息的mRMA分子，称为多顺子反子mRMA.有重叠基因：同一段DNA片段可以编码2-3中Pr分子.真核生物基因的特点：结构复杂，基因极庞大。有若干个染色体，一般不呈环状，DNA与Pr紧密结合形成染色体，具多个复制起始点。存在核膜，DNA的转录和翻译存在时空差别。有很多不编码序列或介入序列。有大量的重复序列功能上密切相关的基因集中程度中程度不如原核生物高，大多分散在不同的染色体上，但有许多基因家族和假基因存在。有细胞器基因，chl-DNA mit-DNA，其密码子有特异性。如何确定RNA提取的质量？测OD值，A260/280为1.8-2.0之间说明纯度可以，还可将RNA跑个电泳，一般来说要有较清晰的三条带，分别为5s,18s,28s rRNA，如果条带弥散看不清，说明RNA有降解现象。1.简述DNA复制过程中需要哪些酶和蛋白质参与，各具何作用。并以大肠杆菌为例，简述DNA复制的起始过程。DNA聚合酶：DNA合成。引物酶和RNA聚合酶：合成引物。解螺旋酶：解开螺旋SSB：使解开的螺旋保持单链状态。DNA连接酶：冈崎片段的连接旋转酶：超螺旋变为负超螺旋1、DnaA结合到OriC右侧的4个9bp共同序列上，直到达20-40个DnaA单体蛋白结合成一个核心。然后DnaA蛋白作用于OriC左侧的3个13bp重复序列上，这几个位点的DNA融化解链，形成开放复合物。2、DnaB和DnaC以聚集体的形式与开放复合物偶联，形成一个复合物。3、每个DnaB六聚体结合6个DnaC单体，产生的蛋白聚集体为480KD，直径6nm球状体。4、DnaA旋转酶使解旋产生的正超恢复为负超，SSB使产生的单链保持单链状态。5、DNA pol从Ori区阅读，并在Ori区终止，产生一段RNA引物，其3-OH引导DNA pol的合成反应。试阐述原核生物DNA复制与真核生物DNA复制的异同点：相同点：都是保留和半不连续复制，复制过程都有起始，延长和终止三阶段，都必须有相应功能的Pr（如SSB）和DNA pol参加。不同点：DNA pol，其中DNA pol是主要的DNA pol。真核生物有DNA pol、，其中DNA pol、DNA pol是主要的DNA pol；复制起点和速度不同：原核生物只有一个复制起点，而真核生物