毕业论文(医学类)IL13对哮喘大鼠肺部炎症的影响.pdf

1 1 0 9 9 6 1 分类号 密级 i l 1 3 对哮喘大鼠肺部炎症的影响 单位代码 学号 1 0 1 1 4 2 0 0 4 3 7 6 e f f e c to fa n t i 一1 3a n t i b o d yo ni n f l a m m a t o r ya i r w a yo fa s t h m a t i cm o u s e 研究 指导教 师 奎建强熬援 申请学位门类级别 亟 堂焦 专业名 称 哩噬由型 研究方 向 竖嗤殴鱼瘗诅苴 所在学院 筮三蝤廑匡堂暄 2 0 0 7 年5 月8 日 山西医科大学硕士学位论文 i l 1 3 对哮喘大鼠肺部炎症的影响 中文摘要 目的 探讨抗i l 一1 3 抗体对哮喘大鼠肺部炎症的影响 以及在哮喘发病时 基质金 属蛋白酶一9 在肺部沉积的影响 从而了解外源性抗原抗i l 1 3 抗体对哮喘的治疗价值 方法 健康w i s t a r 大鼠3 0 只 随机分为3 组 正常对照组给予生理盐水 哮喘组 分别于第1 7 1 4 天给大鼠经腹腔注射o v a i o ug 第1 5 天 2 0 天为实验的激发阶段 持 续6 天 干预组在每次激发前3 0 分钟给予抗i l 一1 3 抗体 抗鼠多克隆i l 1 3 中和抗体 静脉注射1 5 0 pg 检测指标 1 测定肺泡灌洗液 b a l f 中t h 2 型细胞因子i l 一4 i l 一1 3 酶联免疫法 含量 2 免疫组织化学法检测基质金属蛋白酶一9 在肺部沉积的情况 3 肺组织学检查 4 酶联免疫吸附实验 e l i s a 检测外周血总i g e 水平 结果 哮喘组肺泡灌洗液中i l 一4 i l 1 3 的水平明显高于对照组 p 0 0 5 基质 金属蛋白酶9 在肺部的沉积也明显多于对照组 外周血总i g e 水平明显高于对照组 p o 0 5 而抗i l 一1 3 抗体干预组i l 4 水平以及外周血总i g e 水平明显低于哮喘组 p 0 0 5 肺组织病交减轻 删p 9 的沉积也明显减少 p 0 0 5 结 仑 用卵清蛋白和氢氧化铝共同免疫大鼠两周后 给予5 o v a 气雾剂雾化吸入 大鼠出现哮喘样症状 经过一系列检测指标检测 证实哮喘模型成功 抗i l 一1 3 抗体能明 显减轻哮喘大鼠肺部炎症 在气道建立起新的t h l t h 2 平衡 抗i l 1 3 抗体能减少外周血 总i g e 水平 以及哮喘组肺泡灌洗液中i l 4 的量 说明抗i l 1 3 抗体能减轻过敏性哮喘 的发病程度 减少基质金属蛋白酶9 在肺部的沉积 延缓气道重塑的发展 关键词 哮喘 抗 1 3 抗体 基质金属蛋白酶9 i l 一4 i l 1 3 山西医科大学硕士学位论文 e f f e c to fa n t i 一1 3 a n t i b o d y o n i n f l a m m a t o r ya i r w a y o f a s t h m a t i cm o u s e a b s t r a c t o b j e c t i v e t oi n v e s t i g a t ee f f e c to fa n t i 1 3a n t i b o d yo ni n f l a m m a t o r ya i r w a yo f a s t h m a t i cm o u s e a n dd e p o s i t i v ee f f e c to f m e t a l l o p r o t e a s e 9w h e np a t i e n tf a l li na s t h m a t h e r e b yw e c a l lg e tt h et h e r a p e u t i cv a l u em e s s a g eo f e x o g e n o u sa n t i g e na n t i 1 3a n t i b o d t oa s t h m a m e t h o d f o r t yh e a l t h yw i s t e rr a tw e r ed i v i d e dr a n d o m l yi n t ot h e r eg r o u p s n o r m a l c o n t r o lw a sg a v ei s o t o n i cn ac h l o r i d e t h eg r o u po fa s t h m aw a s i n t r a p e r i t o n e a l 蝎e c t i o no v a l o p gd e f e r e n t l ya tf l r s td a y s e v e n t hd a y f o u r t e e n t hd a y t h ef i f t e e n t h d a yt ot w e n t i e t hd a yw e r ee x p e r i m e n t a ls u s c i t a t i o ns t a g e a n dt h es t a g ew a sk e 印o ns i x d a y s t h eg r o u po fi n t e r v e n t i o ni n t r a v e n o u si n j e c t i o na n t i 1 3a n t i b o d y1 5 0 p gb e f o r e3 0 m i n u t e so f s u s c i t a t i o n i n d i c a t r i xo f d e t e c t i o n 1 t h ec o n t e n t so f t a p yo f t h 2c y t o k i n e l l 一4b r o n c h o a l v e o l a rl a v a g ef l u i d e u z y m e l i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y 2 d e t e c t m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9d e p o s i ti nb e l l o w s i m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o d 3 i n s p e c t i o no fb e l l o w sh i s t o l o g i c a la n a t o m y d e t e c tt h ec o n t e n t si g eo fp e r i p h e r a l b l o o d e l i s a r e s u l t s t h eg r o u po fa s t h m a sl e v e lo fi l 4i nb r o n e h o a l v e o l a rl a v a g ef l u i ds u p e rt h a n c o n t r o lg r o u p p 0 0 5 t h ed e p o s i to f m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9i na s t h m am o r et h a n c o n t r o lg r o u p t h ec o n t e n t s i g eo fp e r i p h e r a lb l o o ds u p e rt h a nc o n t r o lg r o u p p o 0 5 h o w e v e r t h ec o n t e n t so fi l 4a n dl e v e lo fi g ei ng r o u po fi n t e r v e n t i o nw e r e l o w e rt h a ni na s t h m a p o 0 5 a f f e c t i o no fb e l l o w sh i s t o l o g i c a la n a t o m yw a s r e l i e v e a l t h o u g h tm a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9d e p o s i tw a sd e c r e a s e d b u tt l l e yh a v en o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c ep o 0 5 c o n c l u s i o n s u s ee g ga l b u m i na n da l u m i n i u mh y d r o x i d ea l li m m u n er a tt w ow e e k s a n d g a v e5 o v aa e r o s o la t o m i z a t i o nb r e a t h ei n t h e nr a ts h o wu ps y m p t o mo fa s t h m a f u r t h e r n l o r e b yas e r i e so fd e t e c t i o n w ec o n f l r m e dt h a tt h es a m p l eo fa s t h m aw a sw e l l a n t i 1 3a n t i b o d yc a nl e s s e nt h ei n f l a m m a t i o no fa s t h m a a n dt os e tu pn e wb a l a n c eo f t h l t h 2i na i rt u b e a n t i 1 3a n t i b o d yc a nd e c r e a s et h el e v e lo fi g ei np e r i p h e r a l b l o o d a n dd e c r e a s et h ec o n t e n t so fi l 4i nb r o n c h o a l v e o l a rl a v a g ef l u i d t od e m o n s t r a t e a n t i 1 3a n t i b o d yc a nl e s s e n t h ei n v a s i o nd e g r e eo fa l l e r g i ca s t h m a t h ed e p o s i to f m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 一9h a v ed e c r e a s eo b v i o u s l y p o 0 5 k e y w o r d a s t h m a a n t i 1 3a n t i b o d y m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9 i n t e r l e u k i n 4 i n t e r l e u k i n 1 3 2 山西医科大学磺士学位论文 前言 哮喘是呼吸系统的常见病和多发病 全球约有1 6 亿患者 我国的患病率约为1 一4 一般认为儿童的发病率高于成人 到目前为止 哮喘的发病机制还不是很清楚 多认 为是与多基因遗传有关的疾病 近年来研究发现 气道炎症是哮喘的本质 初次诊断哮喘 的患者中即可出现气道炎症 甚至在轻度间歇性哮喘患者和哮喘缓解期间都存在气道 炎症 哮喘的发病与t h l t h 2 细胞失衡有关 是多种炎症细胞参与反应的一种慢性气 道炎症 以气道高反应性和可逆的气道阻塞为特点 由于t h 2 型细胞过度释放细胞因子从 而诱导i g e 产生 嗜酸性粒细胞脱颗粒 引起气道速发性过敏反应和以嗜酸性粒细胞浸润 为主的慢性炎症 同时 气道上皮损伤也是显著的 表现为上皮脱落 纤毛细胞再生 杯 状细胞再生 上皮层炎性细胞浸润 以及上皮下纤维化 哮喘患者的气道炎症反应是慢 性的 持续的过敏原刺激导致持续气道炎症状态 i l 1 3 是一个重要的介导变态反应的 t h 2 型细胞因子 参与调节t h l 和t h 2 细胞功能 在抑制炎症反应中有重要的作用 i l 1 3 对b 细胞有促进作用 可以刺激b 细胞的增殖 促进抗i g 抗体和抗c d 4 0 单抗激活的b 细 胞增生 i l 1 3 可以激活人b 细胞产生i g m i g c i g g 4 i g e 而不刺激产生i g a 其中对 于i g e 的作用较强 这就决定了i l 1 3 在i g e 介导的i 型变态反应中具有重要的意义 实 验发现在增加i l 1 3 水平的同时 i g e 水平也会增加 这样的关系不随年龄的变化而变化 而且 h u b e r 和k o e s s l e r 两位学者发现死性哮喘患者气道壁和平滑肌明显增厚 即 气道重塑 虽然激素能明显抑制气道炎症 但它不能有效的控制气道重塑的病理改变 有研究发现哮喘患儿在哮喘症状发作之前就可出现气道重塑 已有研究表明m m p 9 参与 哮喘时气道平滑肌的重塑 本研究通过比较抗i k 1 3 抗体对不同哮喘模型组的作用情况 了解抗i l 一1 3 对于哮喘大鼠发病的影响 从而探讨其临床治疗价值 山西医科大学磺士学位论文 材料和方法 一 材料 一 实验动物 健康清洁w i s t a r 大鼠3 0 只 雌雄各半 山西医科大学动物实验中心提供 体重约 1 5 0 9 左右 鼠龄1 0 周左右 二 主要的实验设备 试剂 药品 1 清洁动物实验室本校实验动物中心提供 2 吸入雾化泵山西医科大学第二临床医学院呼吸科 3 卵清蛋白罗氏公司 4 氢氧化铝天津三厂 5 抗i l 1 3 抗体武汉博士德公司 6 大鼠i l 4 定量e i a 试剂盒美国b i o s o u r c e 公司 上海森雄进口分装 7 大鼠i l 1 3 定量e i a 试剂盒美国b i o s o u r c e 公司 上海森雄进口分装 8 i g e 测定试剂盒 北京邦定泰克生物技术有限公司 9 m m p 9 检测试剂盒武汉博士德公司 i 0 二抗及显色剂武汉博士德公司 1 1 酶标仪 n o v a p a t h t m b i o i l a d 日本 二 实验方法 1 动物模型的建立 健康w i s t a r 大鼠3 0 只 体重1 5 0 2 0 0 9 雌雄不限 来源于山西医科大学动物实验 中心 随机分为3 组 正常对照组 哮喘模型组 抗i l 1 3 抗体干预组各1 0 只 正常对照组给予生理盐水 模型分别于第1 7 1 4 天给大鼠经腹腔注射o v a 2 0 lg 与氢氧化铝1 0 0 lg 混悬液 此为抗原的致敏阶段 第1 5 天一2 0 天为实验的激发阶段 将 大鼠放在5 l 的密闭容器中 通过雾化器吸入5 o v a 进行雾化吸入激发 每天一次 每次 2 0 分钟左右 观察大鼠吸入o v a 后的表现 直到出现哮喘样症状为止 如烦躁不安 呼吸 急促 腹肌痉挛 两便失禁等 持续6 天 雾化动力为5 l 分钟的压缩空气 干预组在每次 o v a 激发前3 0 分种给予抗i l 一1 3 抗体 抗鼠多克隆i l 一1 3 中和抗体 静脉注射1 5 0 ig 2 检测指标及方法 2 1 肺组织学检查 水合氯醛麻醉大鼠后开胸 分离气管及肺组织 取出 右侧肺 组织经1 0 甲醛固定 常规石蜡包埋 切成5u m 厚制成肺组织切片 he 染色后用普通 光学显微镜观察 4 2 2 细胞计数检测 给大鼠行气管插管 i m l 生理盐水灌洗肺组织 回收灌洗液约0 8 m l 收集的灌洗液1 5 0 0 转 m i n 离 b l o 分钟 收集上清 7 0 保存 重复灌洗2 次 离心后弃上 清 细胞0 8 m l 液重悬 取0 1 m 1 于血细胞计数台测定细胞总数 取0 2 m l 涂片 瑞吉 w r i g h t g i e m s a 染液染色 至少用3 0 0 个细胞作细胞分类计数 2 3 测定肺泡灌洗液i l 一4 i l 1 3 的水平 酶联免疫法 分别采用不同的试剂盒 标本收集同前 1 设标准孔8 孔 每孔中加入样品稀释液1 0 0 l i1 第一孔加标准品i 0 0 u1 混匀后用 加样器吸出1 0 0 u1 移至第二孔 如此反复作对倍稀释至第七孔 最后从第七孔中吸出 1 0 0 l il 弃去 使之体积均为1 0 0 l l1 第八孔为空白对照 2 在待测孔中每孔加入待测血清样品1 0 0 p1 3 将反应板置3 7 度恒温箱1 2 0 分钟 4 洗板 用洗涤液将反应板充分洗涤4 6 次 向滤纸上印干 5 每孔中加第一抗体工作液1 0 0 i i1 6 将反应板混匀后置3 7 度6 0 分钟 7 再洗板 方法同第四步 8 每孔加酶标抗体工作液1 0 0u1 9 将反应板3 7 度6 0 分钟 1 0 洗板 1 1 后每孔加底物工作液1 0 0 l l1 3 7 度暗处反应5 1 0 分钟 1 2 每孔加5 0 pl 终止液混匀 1 3 在4 9 2 r 瑚处测吸光值 结果的计算与判断 所有的o d 值都减去空白值后再进行计算 以标准品i 0 0 0 5 0 0 2 5 0 1 2 5 6 2 5 3 2 1 6 0 p g m l 之0 d 值在半数对数纸上做图 画出标准曲线 根据样品 o d 值在该曲线图上查出相应大鼠的i l 4 含量 2 4 酶联免疫吸附实验 e l i s a 测外周血总i g e 水平 水合氯醛麻醉大鼠后 尾静 脉取血 肝素抗凝后离心取血浆负7 0 度保存 测外周血i g e 水平 e l i s a 方法 步骤同前 2 5 免疫组化法检测基质金属蛋白酶一9 在肺部的沉积 右侧肺组织经1 0 甲醛固定 常规石蜡包埋 切成5u m 厚制成肺组织切片 载玻片采用防脱片 以保证切片紧密粘附 1 切片常规脱蜡至水 2 3 0 h z 0 2 一份加蒸馏水十份混合 室温5 1 0 分钟以灭活内源性酶 蒸馏水洗3 次 3 热修复抗原 将切片浸入0 0 1 m 枸橼酸盐缓冲液 p h 6 o 微波炉加热至沸腾后 断电 间隔5 分钟后 反复两次 冷却后p b s p h 7 2 7 6 洗涤两次 4 滴加5 b s a 封闭液 室温2 0 分钟 甩去多余液体 不洗 5 滴加适当稀释的一抗 3 7 度1 小时左右或2 0 度2 小时左右 也可以4 度过夜 山西医聿 大学硕士学位论文 p b s 洗2 分钟 3 次 6 滴加生物素化山羊抗小鼠i g g 2 0 3 7 度2 0 分钟 p b s 液洗2 分钟 3 次 7 滴加试剂s a b c 2 0 3 7 度2 0 分钟 p b s 洗5 分钟 4 次 8 d a b 显色 使用d a b 显色试剂盒 a r l 0 2 2 取l m l 蒸馏水 加试剂盒中a b c 试剂各1 滴 混匀后加至切片 室温显色 镜下控制反应时间 一般在5 3 0 分钟之间 9 苏木素轻度复染 脱水 透明 封片 显微镜观察 结果判断 4 0 0 倍光镜下采集图像 应用图象分析软件测量器官周围阳性细胞的平均光密 度以反映m m p 9 的染色深度进而表示其相对含量 基质金属蛋白酶9 的阳性表达为胞浆内星 棕黄色颗粒样改变 每张切片随机选取6 个具有代表性的视野 分别测定基质金属蛋白酶9 的阳性染色面积及其占所选视野面积的百分比 即相对染色面积 以此代表支气管肺组 织中基质金属蛋白酶9 的相对含量 3 统计学分析 所测数据以均数 标准差表示 应用s p s s 统计软件做方差分析 以p o 0 5 为差异 有显著性 6 山西医科大学硪士学位论文 一 哮喘模型的建立 结果 1 肺组织病理形态改变 光镜观察 生理盐水对照组大鼠肺组织形态基本正常 见图i 哮喘组肺组织明显的 炎性改变 炎症细胞聚集 气道粘膜下组织水肿 微血管通透性增加 支气管内分泌物贮 留 痰栓形成 支气管平滑肌痉挛 呈花瓣样改变 纤毛上皮剥离 有的可见支气管壁明 显增厚 气道重构等 见图2 2 肺组织损伤指标t 2 1 细胞计数分类 表1 b a l f 中细胞计数和分类 与哮喘组比较甲 0 o l 大鼠b a l f 中的细胞数量显著不同 哮喘组与对照组相比 细胞总数显著增加 并且 嗜酸性粒细胞 淋巴细胞和中性粒细胞百分比明显增加 p 0 o t a n t i i l l 3 a b 组则 明显降低 b a l f 中降低的细胞总数以及嗜酸性粒细胞 淋巴细胞 中性粒细胞的百分比 与哮喘组比较有统计学差异 p 0 0 1 2 2 b a l f 液中i l 1 3 i l 4 水平测定 表2b l f 液中l l 一1 3 i l 4 含量 与哮喘组比较 0 o l 与生理盐水组比较 哮喘组t h 2 型细胞因子i l 4 i l 1 3 显著升高 p o 0 1 与哮 喘组比较 抗体干预组b a l f 液中i l 一1 3 i l 4 水平明显降低 p o 0 1 见表2 山西医科大学硕士学位论文 2 3 外周血中i g e 水平检测 表3 外周血中i g e 水平检测 与哮喘组比较 p o 0 1 2 4 m m p 9 的沉积 与哮喘组比较l p 0 o l 与哮喘组相比 对照组明显表达较低 p o 0 1 说明在雾化一周后 哮喘组的i e 4 p 9 表达明显升高 干预组与哮喘组相比明显下降 p 0 0 5 山西匿科大掌磺士学位论文 讨论 1 9 9 3 年发现的自细胞介素1 3 i l 1 3 是近年来研究的热点之一 认为与哮喘发病 关系密切 人i l 1 3 h i 卜1 3 是由1 3 2 个氨基酸组成的非糖基化蛋白 相对分子质量 1 i r 为1 2 1 0 3 h i l 一1 3 蛋白和h l l 4 蛋白有2 5 同源性 i l 1 3 和i l 4 享用一条 受体链和信号传导系统 因此i l 1 3 和i l 一4 功能有部分重叠 并在哮喘发病过程中存在一 定的相互关系 i l 4 能促进b 细胞分泌i g e 促进t h i 细胞向t h 2 细胞分化 从而促进i l 4 i l 一5 和i l 1 3 分泌 本实验结果显示 从哮喘大鼠模型的支气管肺泡灌洗液中测的 i l 一1 3 i l 一4 含量明显高于生理盐水对照组 而低于干预组 以此可以推论 哮喘造成的 大鼠肺部免疫炎症反应与i l 4 i l 一1 3 的升高有密切关系 而干预组由于给了抗i l 一1 3 抗体 使得i l 4 含量下降 而有实验证明i l 1 3 和i l 4 有部分功能的重叠 可以看出哮喘发作时 i l 一1 3 和i l 4 对其有的共同的促进作用 抗i l 1 3 抗体能明显的减轻炎症反应的情况 从而 减轻哮喘发作的程度 b l e a s e 等 分别用i l 1 3m c a b 单克隆抗体 和i l lm c a b 干预 治疗霉菌诱发的小鼠哮喘模型 结果发现i l 4 m c a b 可抑s t j i l 一1 3 产生 而i l 1 3m c a b 对 i l 4 的产生无抑制作用 该实验结果与本实验结果有不同 可能是由于诱发剂不同 而 且他们的实验模型是小鼠 这些对实验结果都有不同程度的干预 但是b l e a s e 的实验同时 证实了i l 1 3 m c a b 在治疗哮喘症时可能比i l 一4 m c a b 更有吸引力 因它引起机体免疫功能紊 乱的程度可能较i l 一4 为小 这点与本实验证实的抗i l 1 3 抗体的作用是相同的 大鼠外周血i g e 水平在哮喘组明显升高 经过抗体干预后明显降低 它作为一个免 疫反应过程中重要的部分 其作用已经被很多实验所证实 它能比较正确的反映免疫炎症 的程度 哮喘组大鼠肺部的病理切片显示有丰富的炎症细胞聚集以及气道结构的改变 t h 2 反应介导的嗜酸性粒细胞更被认为是哮喘气道炎症的一个显著特征 本实验结果同样 证实了这点 附图 在本实验中 与对照组相比 哮喘组大鼠受到0 v a 连续激发两周后 出现气道炎症细胞浸润和结构改变的同时 肺组织中的 岍一9 表达增加 基质金属蛋白酶 m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e s m m p s 是一组结构相似的基质降解蛋白酶家族 可降解 细胞外基质的多种蛋白成分 如胶原 层粘连蛋白 纤维结合素 蛋白多糖和弹性蛋白等 目前已经发现2 3 种m m p m m p 一9 是其中最主要的成员 m m p 9 可以特异的降解 型胶原 而 内皮和上皮基膜的主要成分是 型胶原 所以推测姗p 一9 可能通过降解上皮基膜和及内 皮的 型胶原而破坏上皮基膜和内皮 p a r t r i d g e 等报道 e d p 一9 通过降解血管内皮细 胞中的明胶进而增加微血管内皮的通透性 并且其降解的基质片断还具有对炎症细胞的趋 化作用 而促进炎症反应的加重 气道的炎症可以引起气道的损伤 进而引起气道的 修复和重塑 气道重塑已被证明与气道高反应和持续的气流阻塞相关 1 气道重塑还能 削弱糖皮质激素逆转气道阻塞的能力 临床研究表明 抑制气道重塑的进展可以改善 肺功能进行性下降 而且气道上皮下纤维化减少程度与气道高反应性的下降相关 近 9 山西医科大学硕士学位论文 些年来 很多研究者认为气道的慢性炎症导致气道重塑 但是也有人提出气道炎症和气道 重塑是两个相互独立的因素 不一定是因果关系 甚至有学者认为气道重塑可加重 气道炎症的发展和持续 本实验在给予模型组抗体后 免疫组化切片上 删p 一9 的沉积 比模型组有所减少 抗i l 1 3 抗体可以明显抑制气道炎症细胞聚集 减少气道粘液的分泌 进而可以减少痰栓形成 因此在某种程度说也可以减少气道阻塞的程度 而且在本实验过 程中可以看出 给予抗体后模型组大鼠激发时的症状明显缓解 说明其对气道高反应也有 一定程度的控制 咿一9 对炎症细胞的趋化作用 可以促进炎症反应的加重 气道的炎症 可以引起气道的损伤 进而引起气道的修复和重塑 抗i l 一1 3 抗体是通过直接抑制炎症反 应还是同过减少n 恤i p 9 的沉积来减轻气道重塑 有待于进一步研究 但抗i l 1 3 抗体确实明 显减少了 v i p 9 的沉积 马秀琴等 人用中药雷公藤多甙来作为干预剂 同样可以抑制 m 硼p 9 在肺组织的表达 地塞米松虽不能完全抑制埘p 一9 的升高 但是地塞米松作为一种 免疫抑制剂 其对哮喘不论是发作时的治疗还是预防发作都有着确切的效果 这一点已经 得到临床应用的证实 故有文献报道说地塞米松可以延缓气道重塑的发展 但是早期使用 地塞米松不能预防气道重塑的发生 山西医科丈掌硕士学位论文 小结 1 通过给予大鼠o v a 和氢氧化铝造模两周后 o v a 雾化吸入一周 造模成功 病理组织 切片显示明显的炎症细胞浸润 2 哮喘组i l 4 i l 1 3 水平明显升高 外周血i g e 水平也明显升高 给予抗体干预后各 指标水平均明显下降 说明抗i l 1 3 抗体对于哮喘免疫炎症反应有明显抑制作用 为临床 治疗哮喘提供更过的信息 3 m m p 一9 在模型组沉积明显 说明姗p 9 在哮喘的发生与发展过程中有着不可忽视的作 用 抗i l 一1 3 抗体对其有明显抑制作用 故理论上推导它对哮喘有一定的治疗价值 山西医科大学硬士学位论文 图1 图2 1 附图 生理盐水对照组1i 也x 2 0 0 倍 钾a 组1h e x l o o 倍 气管壁周围明显的炎症细胞浸洞 山西医科大学硕士学位论文 图2 2 图3 o v a i 2 i i e x1 0 0 f i 支气管痉挛 呈花瓣样改变 抗体干预组髓 1 0 0 倍 山西医科大学硕士学位论文 图4 抗体干预组m m p 9 1 4 山西医科大学琢士学位论文 参考文献 1 j o h n s o n s k n o x a u t o c r i n ep r o d u c t i o no fm a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 2i sr e q u i r e df o r h u m a n a i r w a ys m o o t h m u s c l ep r o l i f e r a t i o na mjp h y s i o l 1 9 9 9 2 7 7 6 l l1 0 9 l 111 7 2 w i l s o nj w l i n 地m e a s u r e m e n to fr e t i c u l a rb a s e m e n tm e m b r a n ea n ds u b m a c o s a l c o l l a g e n i n t h ea s t h m a t i c a i r w a y c l 协e x p a l l e r g y 1 9 9 7 2 7 4 3 6 3 3 7 1 3 h u a n gj o l i v e n s t e i nr t a b a e ta l e n h a n c e dp r o t e o g l y c a nd e p o s i t i o ni n t h ea i r w a yw a l l o f a t o p i ca s t h m a t i c a m j r e s p i r c r i t c a r e m e d 1 9 9 9 1 6 0 2 7 2 5 7 2 9 4 h o s h i o nm s a k a m u r ay s i m je ta l b r o n e h i a ls u b e p i t h e l i a lf i b r o s i sa n de x p r e s s i o no f m a t r i xm e t a l l o p r o t e n i n a s e 9i na s t h m a t i ca i r w a yi n f l a m m a t i aja l l e r g yc l i ni m m u n o l 1 9 9 8 1 0 2 5 7 8 3 7 8 8 5 m i n s h a l le m l e u n gd ym a r t i ni uc t a l e o s i n o p h i l a s s o c i a t e dt g f b e t a l m r n a e x p r e s s i o n a n da i r w a y sf i b r a s i si nb r o n c h i a la s t h m aa mj r e s p i r c e l lm o l b i o l 1 9 9 7 1 7 3 3 2 6 3 3 3 6 c h e t t a a f o r e s i a d e l d o n n o me ta 1 a i r w a y sr e m o d e l i n gi sad i s t i n c t i v ef e a t u r eo f a s t h m a a n d i sr e l a t e d t o v e r i t y o f d i s e a s e c h e s t 2 0 0 1 1 1 1 4 8 5 2 8 5 7 7 l yn p l iy s r e d ld i e ta 1 e l e v a t e da l l e r g e n i n d u c e di l 1 3s e c r e t i o np r e d i c t si g ee l e v a t i o ni n c h i l d r e na g e2 5 y e a r j c l i ni m m t m 0 1 2 0 0 5j u l 2 5 4 3 1 4 3 2 0 8 f l o o d p a g ep m e n z i e s g o wa p h i p p s s e ta l a n t i 一几 5t r e a t m e n tr e d u c e sd e p o s i t i o no f e c mp r o t e i n si nt h eb r o n c h i a ls u b e p i t h e l i a lb a s e m e n tm e m b r a n eo fm i l da t o p i c a s t h m a t i c s j c l i n i n v e s 9 2 0 0 3 1 1 2 7 t 0 2 9 1 0 3 6 9 k e l l ye a b u s s ew w j a r i o u rn mi n c r e a s e dm a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e 9i nt h ea i r w a ya f t e r a l l e r g e nc h a l l e n g e a mj r e s p i r c f i t c a r e m c d 2 0 0 0 1 6 2 3 1 1 5 7 1 1 6 1 1 0 v o g e lg i n t e r l e u k i n 2 1 3 sk e yr o l ei na s t h m as h o w n s c i e n c e 1 9 9 8 2 8 2 2 1 6 8 1 l s t e i n k ej w b o r i s hl t h 2c y t o k i n e sa n da s t h m a i n t e d e u k i n 4 i t sr o l ei nt h e p a t h o g e n e s i so f a s t h m a a n dt a r g e t i n gi tf o ra s t h m at r e a t m e n tw i t hi n t e r l e u k i n 2 4r e c e p t o r a n t a g o n i s t s r e s p i rr e s 2 0 0 1 2 6 6 7 0 1 2 b l e a s ekj a k u b z i c kc w e s t w i c kj e ta 1 t h e r a p e u t i ce f f e c to f i l 1 3 i m m u n o n e u t r a l i z a f i o nd u r i n gc h r o n i ce x p o r i m e n t a lf u n g a la s t h m a ji m 2 m u n o l 2 0 0 1 1 6 6 5 2 1 9 5 2 2 4 1 3 o h y a m aks e y e r 删 r a g h o w e ta 1 e x t r a e e l l u l a rm a t r i xp h e n o t y p eo fr a tm e s a n g i a l c e l l si nc u l t u r e b i o s y n t h e s i so fc o l l a g e nt y p e si va n dal o wm o l e c u l a rw e i g h t c o l l a g e n o u sc o m p o n e n ta n dt h e i rr e g u l a t i o nb yd e x a m e t h a s o m e jl a bc l i nm e d 1 9 9 0 l1 6 2 2 1 9 2 2 7 1 4 m u r p h ygd o c h e r t ya m n em a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s c sa n dt h e i ri n h i b i t o r s a m j re s p i r 1 5 山西医科大学焉士学位论文 c e l lm 0 1 b i o l 1 9 9 2 7 1 2 0 1 2 5 1 5 p a r t r i d g ec a j e f f r e yj j m a i ka b a 9 6 k d ag e l a t i n a s ei n d u c e db yt n f ac o n t r i b u t e st o i n c r e a s e dm i c r o v a s c u l a re n d o t h e l i a lp e r m e a b i l i t y a m j p h y s i o l 1 9 9 3 2 6 5 l 3 4 8 l 4 4 7 1 6 s e n i o r r m jc l i ni n v e s t 1 9 8 0 6 6 8 5 9 8 6 2 1 7 n i i m ia m a t s u m o t oh a m i t a n t t i c ta la i r w a yw a l lt h i c k n e s si na s t h m aa s s e s s e db y c o m p u t e dt o m o g r a p h y r e l a t i o nt oc l i n i c a l i n d i c e s a mjr e s p i rc r i tc a r em e d 2 0 0 0 1 6 2 4 1 5 1 8 1 5 2 3 1 8 b o s s e m c h a k i r j r o u a b h i am s e r u m m a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e 9 t i s s u e i n h i b i t o r o m e t a l l o p r o t e i n a s e 1 r a t i o nc o r r e l a t e sw i t hs t e r o i d r e s p o m i v e n e s s i nm o d e r a t et os e v e r ea s t h m a a mjr e s o i rc d tc a r em e d 1 9 9 9 15 9 2 5 9 6 6 0 2 1 9 k u m a rr k h e r b e r tc t h o m a sp se ta 1 i n h i b i t i o no fi n f l a m m a t i o na n dr e m o d e l i n gb y r o f l u m i l a s ta n dd e x a m e t h a s o n ei nr o u t i n ec h o n i ca s t h m a jp h a r m e c o l e x p t h e r 2 0 0 3 3 0 7 1 3 4 9 3 5 5 2 0 j e k i n sha c o o lc s z e f l e rs j h i s t o p a t h o l o g yo f v c r ec h i l d h o o da s 0 1 m aae a s es e r i e s c h e 瓯2 0 0 3 1 2 3 3 4 1 7 4 2 2 2 1 v i g n o l aam m i r a b e l l af c o s t a n z oge t a l a i r w a yr e m o d e l i n g i na s t h m a c h e s t 2 0 0 3 1 2 3 3 4 1 7 4 2 2 2 2 b e c k t tp a h o w a r t hp h p h a r m a c o t h e r a p y a n d a i r w a yr e m o d e l i n g i n a s t h m a t h o r a x 2 0 0 3 5 8 2 1 6 3 1 7 4 2 3 马秀琴 黄茂 郭锡烙 雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶9 及其抑制1 表达的影响 中国l 晦床康复 2 0 0 5 9 4 3 1 1 7 1 2 0 1 6 山西医科大学碰士学位论文 综述 il 一13 和哮喘发病的研究进展 摘要 研究表明 哮喘的发病是由于t h 2 型细胞过度释放细胞因子诱导i g e 产生 导致 肥大细胞和嗜酸性粒细胞脱颗粒 引起气道速发性过敏反应和以嗜酸性粒细胞 肥大细 胞 t 淋巴细胞等多种炎症细胞参与的气道慢性炎症 关键词 i l 1 3 支气管哮喘 抗i l 1 3 抗体 n e wp r o g r e s s i o no fi n t e r i e u k i n 1 3i na s t h m a d e p a r t m e n to fr e s p i r a t o r y n 0 2 c l i n i c a lh o s p i t a lo fs h a n x i m e d i c a lu n i v e r s i t y t a i y u a n a b s t r a c t t h 2 一t y p ec e l lo v e r r e l e a s et h ec y t o k i n e w h i c hc a ni n d u c e g e n e r a t i o no fi g ea n dr e s u l ti nm a s tc e l l s e o s i n o p h i l eg r a n u l o c y t e c e l ld e g r a n u l a t i o n a l lt h e s ec a u s ea i r w a yt a c h ya l l e r g i cr e s p o n s e a n dc h r o n i ci n f l a n a u a t i o np a r t i c i p a t eo fm u 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