人教版教学基因工程的操作一轮复习ppt课件.ppt

基因工程的操作 1 掌握基因操作的工具2 掌握基因操作的基本步骤3 了解获取目的基因的方法 掌握PCR技术与细胞内DNA分子复制的异同4 掌握基因操作的工具在构建基因表达载体过程中的重要意义5 掌握农杆菌转化法的过程 了解其它转基因的方法6 掌握目的基因检测的方法 复习目标 1 基因工程的操作步骤 目的基因的检测与鉴定 获取目的基因 构建基因表达载体 将目的基因导入受体细胞 2 第一步 获取目的基因 获取目的基因的方法 从基因文库中获取目的基因 基因文库包括 和 基因组文库 cDNA文库 利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术所需要的条件 人工合成目的基因 条件是 基因比较小 且核苷酸序列已知 模板 原料 能量 酶 引物 3 关于PCR技术中的原料和能量 问题 PCR技术也是合成DNA分子的过程 属于合成反应 是消耗能量的 但图1 8中未提到能量 图1 8分析 PCR的原料是dCTP dGTP dATP dTTP 这四种物质并不是必修二中我们熟悉的四种游离的脱氧核苷酸 而是脱氧核苷酸连接上了两个磷酸 和ATP一样 是高能化合物 在PCR过程中是可以提供能量的 试题中 若指出原料是dCTP dGTP dATP dTTP 则条件中不再另写能量 若原料是四种游离的脱氧核苷酸 则另外还需要ATP提供能量 4 PCR技术和DNA分子复制比较 5 构建基因表达载体 基因表达载体的组成 包括 构建基因表达载体的条件 目的基因 启动子 终止子 标记基因 目的基因 运载体 限制性内切酶 DNA连接酶 6 关于限制酶的问题 一般来说 不同的限制酶有不同的识别序列 有不同的切点位置 切出不同的黏性末端 但也有两种特殊情况 1 不同的限制酶有不同的识别序列 但可以切出相同的黏性末端 如以下两种酶处理得到黏性末端均为AATT 酶I 识别序列 GAATTCCTTAAG 酶II AAAATTTTTTTTAAAA 两种酶经常用于同一个基因工程中 7 限制酶的选择使用 例题 基因工程中 需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒 便于重组和筛选 已知限制酶 的识别序列和切点是 G GATCC 限制酶 的识别序列和切点是 GATC 根据下图示判断下列操作正确的是 A 目的基因和质粒均用限制酶 切割B 目的基因和质粒均用限制酶 切割C 质粒用限制酶 切割 目的基因用限制酶 切割D 质粒用限制酶 切割 目的基因用限制酶 切割 8 限制酶的选择使用 变式训练1 抗四环素基因 EcoB BamH HinD BamH 应选择哪种限制酶 HinD 9 限制酶的选择使用 变式训练2 抗四环素基因 EcoB HinD BamH 抗青霉素基因 10 关于限制酶的问题 2 不同的限制酶有相同的识别序列 但可以切出不同的黏性末端 如 酶I 识别序列 GGAATTCCCCTTAAGG 酶II GGAATTCCCCTTAAGG 黏性末端 GAATTC AATT 这两种酶不会在同一个基因工程中采用 11 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 最常用的方法是 除此外还有 和 农杆菌转化法 基因枪法 农杆菌转化法是将含目的基因的重组质粒先转入 细胞 再转移至 最后经 技术培养成转基因植物 花粉管通道法 农杆菌 受体细胞 植物组织培养 12 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入动物细胞 最常用的方法是 显微注射法 感受 受精卵 DNA 受体细胞一般选择 将目的基因导入微生物细胞 一般选择原核细胞如大肠杆菌作受体细胞 原因是 繁殖快 多为单细胞 遗传物质含量相对较少等 Ca2 转化过程中需要使用 处理大肠杆菌 使其转变成能吸收周围环境中 的 态