(公开课)动物细胞融合与单克隆抗体.ppt.ppt

通化市靖宇中学生物组姜秀2012 3 14 2002年12月30日 两场筹备了10年的 太空婚礼 首次在神舟四号飞船上举行 植物细胞 新人 是黄花烟草和革新一号烟草叶肉细胞的原生质体 动物细胞 新人 是小鼠b淋巴细胞和骨髓瘤细胞 两批新人同时在 产房 电融合仪内孕育新生命 太空婚礼 中国新闻网 时间 2002 12 30 这两场 太空婚礼 实质是哪两项细胞工程技术 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术 sts 知识回顾 再分化 一 原理 细胞膜的流动性细胞的全能性 二 诱导方式 物理法 化学法 三 用途 获得杂种植株 核心问题1 动物细胞融合是怎样的过程呢 a细胞 b细胞 人工诱导 1 1动物细胞融合的概念 杂交细胞 动物细胞融合 也称细胞杂交 是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程 一 动物细胞融合 细胞膜的流动性 物理法 化学法 生物法 问题2 诱导的方法 问题3 融合后细胞的类型 问题4 ab杂交细胞遗传物质有什么特点 三种aa ab bb 含两种生物的遗传物质 1 2动物细胞融合过程 问题1 融合的原理 注意 两个核的融合是在杂交细胞第一次有丝分裂时进行的 1 2动物细胞融合过程 问题5 什么是灭活的病毒 为什么灭活的病毒能作诱导剂 灭活的病毒丧失了感染性 但保留抗原结构 知识拓展 已成功的动物细胞融合实例还有哪些 需经常查阅更多科研报道 1 3动物细胞融合技术的意义和应用 打破生殖隔离 使远缘杂交成为可能 研究细胞遗传 细胞免疫 肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 重要用途 制备单克隆抗体 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理法 电刺激等 化学法 聚乙二醇 物理法 电刺激等 化学法 聚乙二醇 生物法 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 例1 能使动物细胞融合的特有的诱导因子是 a 离心b 灭活的病毒c 电刺激d 振动 例2 融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点 具有原来两个或多个细胞的遗传信息b 能无限增殖c 可形成新个体d 培养过程会贴壁 例3 动物细胞融合的作用中最重要的是 a 克服远源杂交不亲和b 制备单克隆抗体c 培育新物种d 生产杂种细胞 b b 初试牛刀 a 核心问题2 如何大量制备单克隆抗体 抗体的传统生产方法 二 单克隆抗体 抗原动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗原不纯 抗体不纯 特异性差 纯度低 产量低 反应不够灵敏 传统方法生产的抗体 从动物的血清中分离抗体 反复注射 抗原 存在缺陷 读下面一段资料 概括出单克隆抗体的概念 人们发现 在动物发生免疫反应的过程中 体内的b细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体 但是每个b细胞只分泌一种化学性质单一 特异性强的抗体 要想获得大量的单一抗体 必须用单个b细胞进行无性繁殖 即克隆 2 1单克隆抗体的概念 单克隆抗体 单个b细胞克隆产生的化学性质单一 特异性强的抗体 2 2单克隆抗体的制备 一个b淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交细胞 动物细胞培养技术 设计方案 动物细胞融合技术 单克隆抗体 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 材料 b细胞 效应b细胞 t细胞 效应t细胞 骨髓瘤 可无限增殖 peg 问题1 为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白 问题2 会有几种融合方式 问题3 杂交瘤细胞是如何筛选出来的 有何特点 问题4 是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体 问题5 如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体 bb b瘤 瘤瘤 b 瘤 一选 选择性培养基 只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的b细胞 二选 选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞并克隆 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点 既能产生特异性抗体 又能大量增殖 单克隆抗体 杂交细胞 杂交瘤细胞 骨髓瘤细胞 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的b淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程 特点 既能产生专一抗体又能大量繁殖 特点 特异性强灵敏度高可大量制备 单克隆抗体的制备过程分哪几步 请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来 你学会了吗 2 3单克隆抗体的应用 1 体外诊断试剂 最广泛应用准确 高效 简易 快速 单克隆抗体最主要的优点 特异性强 灵敏度高 并能大量制备 生物导弹 单克隆抗体 药物 2 治疗疾病和运载药物 主要用于癌症治疗 单克隆抗体作为载体 运载抗癌药物 形成 生物导弹 准确杀伤癌变细胞 导向 单克隆抗体弹头 药物 两个过程 动物细胞培养过程 单克隆抗体制备过程 三个 一 一种诱导细胞融合的新方法 灭活病毒 一种新细胞 杂交瘤细胞 一个优势 单克隆抗体特异性强 灵敏度高的优势 本节小结 重点 例4 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合 得到杂交细胞 经培养可产生大量的单克隆抗体 与骨髓瘤细胞融合的是 a 经过免疫的b淋巴细胞c 经过免疫的t淋巴细胞b 不经过免疫的t淋巴细胞d 不经过免疫的b淋巴细胞 例5 单克隆抗体是由下列哪种细胞产生 b淋巴细胞b t淋巴细胞c 骨髓瘤细胞d 杂交瘤细胞 a 初试牛刀 d 例6 用动物细胞工程技术获取单克隆抗体 下列实验步骤中错误的是 a 将抗原注入小鼠体内 获得能产生抗体的b淋巴细胞b 用纤维素酶处理b淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞c 用聚乙二醇作诱导剂 促使能产生抗体的b淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合d 筛选杂交细胞 并从中选出能产生所需抗体的细胞群 培养后提取单克隆抗体 b 初试牛刀 例7 单克隆抗体制备过程中使用的骨髓瘤细胞是一种缺陷型细胞 在含有次黄嘌呤 氨基嘌呤和胸腺嘧啶的培养基 hat 中无法生长 而小鼠脾细胞是正常细胞 在hat培养基上可正常存活 用聚乙二醇诱导细胞融合后 经过数代培养 最终可在hat培养基上存活并能产生单克隆抗体的细胞是 a 骨髓瘤细胞之间形成的融合细胞b 脾细胞之间形成的融合细胞c 骨髓瘤细胞与脾细胞之间形成的融合细胞d 脾细胞 c 例8 多选 1975年米尔斯坦和柯勒成功地获得了单克隆抗体 下列细胞中与单克隆抗体的制备有关的是 a 效应b细胞b t淋巴细胞c 骨髓瘤细胞d 杂交瘤细胞 abcd 谢谢 1 若a细胞是小鼠骨髓瘤细胞 则b细胞是取自小鼠体内的细胞 从小鼠体内提取分离该细胞之前 应给小鼠注射 类物质 2 d过程是一个 过程 该过程的进行常用 或 的诱导 3 假设仅考虑某两个细胞的融合 则可形成种类型的c细胞 因此需用 培养基筛选出d细胞用于培养 d细胞的名称是 其特点是 效应b 抗原 细胞融合 聚乙二醇灭活的病毒 选择性 3 既能无限增殖又能产生特异性抗体 杂交瘤细胞 结合下图完成相关习题 4 在培养时通过 分裂方式大量繁殖 d细胞体外培养需要注意的条件是 要求答5项 5 单克隆抗体在疾病的诊断 治疗和预防方面 与常规抗体相比 其特点是 特异性强 灵敏度高 有丝 无菌 无毒的环境 充足的营养 适宜的温度和ph 适宜的气体环境 15 1 单克隆抗体是指 2 制备单克隆抗体的步骤 将 注入小鼠体内 从小鼠脾脏中获得淋巴细胞 其中至少1个淋巴细胞带有抗该抗原的抗体 将步骤 获得的b淋巴细胞与步骤 培养的骨髓瘤细胞在 的诱导下融合 将诱导后产生的多种细胞 放在 培养基的多孔培养板上培养 筛选 这样获得的杂交瘤细胞既具有b淋巴细胞 的能力 又具有 的本领 检测和分离带有抗x抗体的阳性细胞 培养板中每孔放一个细胞进行培养 将阳性细胞进行增殖 从而制备出大量抗该抗原的单克隆抗体 化学性质单一 特异性强的抗体 抗原 聚乙二醇 选择性 无限增殖 产生专一抗体 3 大量制备单克隆抗体的方法主要有两种 体外培养法 可获得10 g ml的抗体 动物体内诱生法可获得5 20mg ml的抗体 你选择的方法及原因是 4 用本法制备出的单克隆抗体仍具有局限性 因为它是用小鼠的 细胞制备的 其化学本质是 应用于人体 会作为产生 解决这个问题的方法是 大量生产选 小规模生产选 效应b 蛋白质 异物 免疫反应 采用人的效应b细胞制备 1