左旋肉碱的化学合成.pdfVIP

化学工程师 C h e mi ca l E n g i n e e r 2 0 l1 年第 4期 文章编号 1 0 0 2 1 1 2 4 2 0 1 1 O 4 0 0 3 7 0 6 钚0 迷 左旋 肉碱 的化 学合成 虞斌 张海宏 赵利军 f 东北 制药集 团股份有限公司 辽宁 沈阳 1 1 0 0 2 6 摘要 左旋 肉碱 已经成为重要的保健型氨基酸之一 尤其在减肥 消除脂 肪肝 心脏保 健及医学 等领 域 应用发展较快 它的生产方法主要有 3 种 提取 法 化学合成法与生物合成法 本文主要综述 了化学合成法的 进展情况 并展望 了其工艺技术的发展趋势 关键词 左旋 肉碱 环氧氯丙烷 手性 中图分类号 T Q 4 6 0 6 文献标识码 A Pre par a ti o n o f L car nit ine YU Bi n Z HANG Ha i h o n g ZHAO L i j u n N o r t h e a s t P h a r ma ce u t ica l Gu o u p C o L t d S h e n y a n g 1 1 0 0 2 6 C h in a Ab s t r a ct L Ca r n it in e h a s b e e n o n e o f t h e mo s t imp o r t a n t h e a lt h y a min o a cid s T h e a p p lica t io n h a v e a f a s t d e v e lo p me n t e s p e cia lly in t h e r e g io n o f r e d u ce f a t t y liv e r h e a r t a n d me d ica l a p p lica t io n a s a h y p o lip id e mic a g e n t P r e p a r a t io n me t h o d s in a in ly in clu d e d e x t r a ct ch e mica l s y n t h e s is a n d b io s y n t h e s is T h e d e v e lo p me n t o f ch e mica l s y n t h e s is ma in ly d is cu s s in t h is p a p e r a n d d e v e lo p me n t t r e n d in p r o ce s s t e ch n o lo g y w a s p r o p o s e d Ke y wo r d s L ca r n it in e e p ich lo r o h y d r in ch ir a l 左旋肉碱 也叫 L ca r n it in e L 一卡尼汀 左卡尼 汀 L 一肉碱 维生素 B t 肉毒碱 化学名 R 一 3 一羟 基 一 4 一 三 甲基铵 丁酸 或者 L B一羟 一 y 一三 甲 胺丁酸 英文名 R 一 3 H y d r o x 一 4 一 t r ime t h y la m mo n io b u t y r a t e 分子式 C 7 H1 5 N O 3 C H 3 3 N C H 2 C H O H C H C O O 一 分子量 1 6 1 2 0 外观性状 白色晶体 易吸 湿 略有特殊腥味 不溶于丙酮 乙醚 苯 极易溶于 水 乙醇和碱 水中溶解度 2 5 0 0 g L 比旋光度 旺 2 0 D 一 3 2 C 1 H 2 0 熔 点 2 1 0 左旋肉碱最早是从肌 肉中被提取并分离出来 后来研究发现左旋 肉碱是人体必需物质 并将其命 名为 维生素 B T 进一步研究证实左旋 肉碱是脂肪 酸转运到细胞线粒体内的唯一载体 因而左旋 肉碱 最重要 的功能是促进脂肪酸的 B一氧化 降低血清 胆 固醇及甘油三脂 的含量 提高机体 的耐受力 另 外 左旋肉碱还具有 解毒酰基残 留物 参与支链氨 收稿 日期 2 0 1 1 0 2 1 8 基金项 目 辽宁省 自然科学基金项 目 2 0 0 8 2 0 2 1 作者简介 虞斌 1 9 6 6 一 高级工程师 1 9 8 9年毕业于沈 阳化工学 院 本科 现任 东北制药集 团股份有 限公司运 营部部长 先后 从 事 过 咖 啡 因产 品 维脑 路 通 产 品 前 列腺 素 产 品 P G 0 5 左旋 肉碱产品 的生产 管理和技术创新工 作 尤其 是 1 9 9 7年在国 内第一 个主抓 了左旋 肉碱产 品的工业 化 生产工作 获得成功 基酸代谢 调节糖原生成 促进 A T P转运 等生理作 用ll 1 2 0 1 0年 中华人民共和国食品安全法 批准左 旋肉碱扩大使用范围及使用量 左旋 肉碱的生产方法主要有 3种 提取法 化 学合成法 生物合成法 提取法最早是从肉浸膏 中 分离提取出左旋肉碱 由于提取纯化的步骤较多 且产量较少 难 以形成规模生产 化学合成法 主要 采取两种途径 1 直接用 D L 一混旋体作原料 利用 拆分剂析出左旋体 2 以不同的化学物质为原料进 行合成 生物合成法制备左卡尼汀主要有两种方 法 1 是微生物发酵法 2 是利用酶法转化 目 前 工业上一般采用环氧氯丙烷为原料经过氨化 酸化等几步反应 在反应过程 中进行手性化 得到 左旋体 本文论述该工艺路线的进展情况 1 化学合成 与手性拆分 1 1 混旋体 肉碱 早期化学合成的肉碱是消旋体 以环氧氯丙烷 为原料经过氨化 酸化 氰化 水解及去离子化得到 混旋 的肉碱 D L C it i n e 见图 1 曾用于食欲增 进剂和调整 胃功能的药物 或作为食品添加剂 虞斌等 左旋 肉碱的化 学合成 2 0 1 1 年第 o 4期 OH 一 3 c N 罄 图 1 环 氧氯 丙烷制混旋肉碱 Fig 1 DI 一 ca m it in e 1 2 消旋体拆分制左旋 肉碱 后来发现只有左旋 肉碱具有生理活性 右旋肉 碱对肉碱乙酰转移酶 一 C A T 和肉碱脂肪酰转移酶 F I C 有竞争性抑制作用 采用消旋体拆分法是常 用的旋光物质制备方法 最常见的是用一种光学纯 的碱去拆分一种酸 或用一种光学纯的酸去拆分一 种碱 酸碱形成盐进行重结晶 Y H a m a r i 等利用 一 一扁杉 8 酸 V I a n n e lla I 1 与 H K i r u cb iI l 乖 0 用 一 一 二苯甲酰 一 L 一酒石酸对消旋体 肉碱进行 了拆分制 得左旋肉碱 L C a r n it i n e 见图 2 人 O H c N 毒卟 I O H O L C a m itin e 图 2 利用 一 一 二苯甲酰一 I 一 酒石酸对消旋体 肉碱 拆分制左旋 肉碱 Fig 2 Ra e e ma t e r e s o lu t io n me t ho d O I H I OH 1 3 前体 1 的拆分 G K a t o等 T Mo r is h t a等l6 1 D M Mu ll e r 等f l 利 用 D 一樟脑磺酸 一 一二苯甲酰 一 L 一酒石酸 N 一乙 酰 一 D 一谷氨酸等对前体 1 进行 了拆分 进一步合成 制得左旋肉碱 1 4 前体 2的拆分 R V o e ff r a v 等 采用 L 一 一酒石酸 张红素I 采用 D 一 一酒石酸对前体 2进行 了拆分 再经氰 化 水解制得左旋肉碱 1 5 前体 3的拆分 J a co b s e n等 m I在考察不同金属催化剂对末端环 氧化合物水解拆分效果时 发现 S 一 S a le n C o 催化 剂对环氧氯丙烷的水解拆分效果最佳 得到左旋环 氧氯丙烷 e e 值 9 8 产率 4 4 图 3 目前 化学 合成法生产左旋 肉碱主要采用这一方法得到的左 旋环氧氯丙烷为原料1 2 存在 问题及解决方案 化学合成与手性拆分制备左旋 肉碱过程中存 在使用 N a C N H C N以及 C a C N等有毒物质 拆分剂 及催化剂价格偏高 拆分分离开的另一半旋光体如 何利用 反应步骤多 收率低 成本高 产品价格高 等问题 针对上述问题 开展 了一些有益的工作 2 1 构型反转合成产物 由于通过拆分消旋体 肉碱或其前体来制备左 旋 肉碱的过程 中产生许多右旋肉碱或其前体物 F G ia n n e s s 等 l 2 l f 故了很多工作 将右旋 肉碱前体物转 化成左旋 肉碱 转化过程简单易行 对工业化合成 左旋肉碱作出了贡献 图 4 H R E p ch l o r o h y d r i n S 3 一 Ch lo r o 一1 2 一 p r o p a n e d io l Cl 0H l N a I c N 坐 t z i g l 图 3 S 一 S a le n C o 催化剂拆分环氧氯丙烷制左旋环氧氯丙烷 Fig 3 Ca t aly s t 1 一 Sle n Co r e s o lu t io n e p ie hlo r o h y d r in t o L e p ie hlo r o h y d r in 2 0 1 1 年第 0 4期 虞斌 等 左旋 肉碱的化 学合成 3 9 c c N 誊一 十 O H 一 e L c N c N 一 I H人 OS一02Me H 一 睾 一 OH 0 2 2 回收套用 胥波等 时合成反应 和拆分条件进行了优化 由于拆分的化合物只有一半可利用 而且 s 一型前 体 1 难以用常法消旋 不但浪费了原料而且构成环 境污染 通过设计一种氧化还原消旋化的方法 制 备得到消旋 的拆分前体 使之可回收再用 图 5 a 一 c N OH a 卜 人 c N o0 H Ch ir a l S e p e r a t io n hydrol ysi s一 OH o 一 十 H 十 人 H 图 5 氧化还 原消旋法制备消旋的拆分前体 F ig 5 Re s o lu t io n p r e cu r s o r p r e p a r a t io n b y o x id a t io n r e d u ct io n r a ce miz a t io n 2 3 催化 剂循环 利用 为了更好的回收和再生利用 J a co b s e n等 ms 一 s a le n C o m 催 化剂固载到聚苯乙烯树脂和硅胶 上 应用于环氧氯丙烷 的拆分 多次重复使用后效 果依然显著 重复 5次后的得到 R 一环氧氯丙烷的 ee值为 9 9 转化率为 5 2 K u r e s h y R I 等 制 备 了一种双聚体形式 的 s 一 s a le n C o 催化剂 在反应 6 h后 手性环氧氯丙烷的 产率为 4 9 e e 值为 9 7 并且催化剂的重复利用 性也 比较理想 研究者们 1 制 备了各种形式的 S s a le n C o m 催化剂 从单体 S s a l e n C o I I I 催化剂一直到各种聚 合形式的 S s a le n C o 1 1 I 催化剂的出现 图 6 由于 S s a le n C o m 催化剂 的价格昂贵 如何引入价廉 具有更高催化活性和高重 复利用性 的催化剂仍是 当前乃至今后该领域研究工作的重点 一 虞斌等 左旋 肉碱 的化学合成 2 0 1 1 年第 o 4期 单核 O 0 双核 图 6 S s a l e n C o m 单体及聚合形式催化剂 F ig 6 M o n o m e r a n d co m p o s i t e S s a le n C o I I I 2 4 拆分剩余物利用 王朝阳等 I 9 蘧 过外消旋的环氧氯丙烷经S a le n co 催化剂催化拆分水解 得到 R 一 3 一氯 一 1 2 一丙二 醇 经缩合 取代 醇解得到光学纯的左旋的丙叉甘 负载 油醇 产率为 5 9 4 该路线可以合成左旋丙叉甘油 醇和右旋丙叉甘油醇 其合成路线见图 7所示 这 也为 S 3 一氯 一 1 2 一丙二醇的利用提供了思路 c i C I O H c H C H sC O C H s c CH3 OH OOCCH 3 c H sO N f f a OH 0H 一 C H sC O O N a O O cH 丽 C H 3O H 图 7 外消旋环氧氯丙烷 S a l e n C o 催化拆分水解过程 F 唔 7 R e s o lu t i o n o f L e p ich l o r o h y d r i n b y S s a le n C o I I I 2 5 生物化学法 1 0 0 C h i W J 等 筛选到一株产环氧水解酶的黑曲 许辉辉等 丝 从土壤中筛选到 1 株能产环氧氯 霉菌株 对消旋体的环氧氯丙烷进行手性拆分 生成 丙烷水解酶的微生物 黑曲霉 菌株 C 3 7 5 当拆分时 S 一环氧氯丙烷 间为 1 0 h s 一环氧氯丙烷的对应体过量值达 9 9 0 K im H S 等l2 利用 R h o d t o r u la g l u t i n is 酵母 中 产率为 1 8 6 的产环氧水解酶基 因构建了 P i h ia p t o r i 酵母工 K a b a t 等 通过用 R 一环氧氯丙烷与格 氏试 程菌发酵产酶 在对消旋体的环氧氯丙烷水解过程 剂反应经三甲胺取代 阴离子交换后氧化制得左旋 中 发现酶浓度的增加可显著缩短反应 时间 添加 肉碱 表 面 活 性 剂 可 提 高 s 一环 氧 氯 丙 烷 的 e e值 至 考虑将微生物法与化学合成法相结合 通过将 曲 C N 2 0 1 1年第 0 4期 虞斌等 左旋 肉碱 的化学合 成 4 1 S 一环氧氯丙烷构型反转为 R 一环氧氯丙烷 避免使 用氰化 物路线应该是未来左旋 肉碱生产的发展 方 向 图 8 c S c E p i ch l 0 r o h v d r i n c J r H r w M R I 图 8 R 一 环氧氯丙烷与格氏试 剂反应 制左旋 肉碱 F ig 8 L ca mi t i n e p r e p a r a t io n b y r e a ct i o n o f R 一 e p ich lo r o h y d r in a n d Gr ig n a r d r e a g e n t 2 6其它工业原料 M P a o lo C a s a t i等 笱 以双 乙烯酮为原料 将双烯 酮氯化后立即与拆分剂 L 一苯基氨基乙酸甲酯结合 然后还原拆分 再经两步反应就制得左旋 肉碱 图 9 但文献报道 的收率不高 5 主要原 因是拆分 率不高 要得到光学纯度好的拆分体必须反复重结 晶 收率损失较大 双 乙烯酮 即 3 一羟基丁烯酸 一 B一内酯 纯度 9 8 的价格 1 5 0 0 0元 t 一 与工业环 氧氯丙烷相比价格略便宜 目前 国内生产也可以 满足供应 从无毒化考虑 如果拆分正确 也是可 以 考 虑 的发 展方 向 R 百 卜 L O H 人 0 R I H Chj seperal j 卜 人 人 一 OH n e u t r a liz in g V H 一 I f 1 一 图 9 M P a o lo C a s a t i等制左旋 肉碱工艺过程 F ig 9 T e ch n o lo g y f o r L ca r n it in e b y M p a o lo C a s a t i L a n n e lla V t 1 和李 全等 采用氯 乙酸 乙酯为原 料 先合成 r 一氯乙酰乙酸 乙酯 继续反应得到消旋 体肉碱 以左旋二苯甲酰 一 D 一酒石酸为拆分剂 制 0 0 备了左旋肉碱盐酸盐 图 1 o 但收率仅为 5 过程 中无须使用氰化物和离子交换树脂 c l 人 0 卟 i c 人 人 c 2H 图 1 0 L a n n e l la V等制左旋肉碱真盐酸盐工艺过程 Fig 1 0 Te chn o lo g y f o r L ca m it in e h y dr o ch lo r id e b y La n ne lla V 3 手性原料与化学合成 随着手性技术的进步 手性化合物的种类和产 量逐渐增加 产品价格也随之下降 这为 以手性化合 物为原料制备左旋肉碱提供 了可能 M E J u n g等I 拍 首先 以 V c 为原料经 l0步反应制得了 L 一肉碱 总收 率 l0 K B o ck等I 吩 别以 L 一抗坏血酸和L 一阿拉 伯糖为原料成了左旋肉碱 图 1 1 l2 一 4 2 虞斌等 左旋 肉碱的化学合成 2 0 1 1 年第 0 4期 H0 卜O H M e O H C a 2 H 0 1 A c 0 L OH B泓 一 I OH H i 入人 H ydrol ysi s Neutral i zi ng H2 P d C 卜 Ac OEff Ac0H 图 1 1 M E J u n g 等 以 L 一 抗坏备的制左旋 肉碱工艺过程 F ig 1 1 T e ch n o l o g y f o r L ca r n i t i n e w i t h L a s co r b i c a ci d b y M E J u n g 02 牛 I H f N 一 L Ca r n it in e 图 1 2 M E J u n g等以伯糖为原料制左旋 肉碱工艺过程 F ig 1 2 T e ch n o l o gy for L ca mi t in e w it h a r a b in o s e a ci d b y M E J u n g 目前 全球 V C原料药生产能力约为 1 5万 t 除 荷兰 D S M公 司在苏格兰 的达瑞工厂拥 有 2 3万 t 生产能力外 其余 l2 7 万 t 生产能力主要集中在我 国的东北制药 石药集 团 华北制药 江山制药以及 淄博鲁维食品生物有限公司等 5家企业 产业集 中 度一直较高 随着国内又有一新企业投资年产 2万 0H B 姒 M t V C项 目 V C国内产能严重过剩 新项 目的上马无 疑使得 V C供应进一步加大 预计价格还有下跌空 间 目前 内销价格下降至 4 2 元 k g F D B e lla my 圳以 D 一苹果酸为原料 经 6步反应 合成了左旋肉碱 图 1 3 收率可达 3 5 4 0 是 目 前收率较高的合成路线 H 0 H P P Na BH4 H OH 0 P OH O P N M e3 O H 0 H 2 P d C P 4 不对称合成 H I o n E x ch a n g e 图 1 3 F D B e ll a m y以 D 一 苹果酸为原料制左旋肉碱工艺过程 F ig 1 3 T e ch n o lo gy f o r L ca mit in e wit h ma lic a cid b y F D B e lla my 不对称合成是 一个有机反应 其 中底 物分子 整体 中的非手性单元 由反应剂以不等量地生成立 体异构产物的途径转化为手性单元 反应剂可 以 是化学试剂 催化剂 溶剂或物理因素 目前 不对 称合成在药物合成和天然产物合成 中都有 十分重 要的地位 但无疑 现在最完善的不对称合成技术 O H H j L0 要数存在于生物体内的酶 能否实现像酶一样高效 的催化体系 是对人类智慧的挑战 M K i t a m u r a 1 以氯乙酰乙酸乙酯为原料经不对 称催化氢化制得高光学纯度 的 R 一 4 一氯 一 3 一羟基 丁酸乙酯 进而转化为左旋肉碱 图 1 4 他们采用 0 0 5 mo 1 的 R u O C O M e 2 S 一 b i n a p 为催化剂 在 1 0 M P a lo 0 下反应 5 m in即可制得所需的 R 一产 物 光学收率为 9 7 产率可达 9 7 c 苫 帅 酐 L J 舯 舯 2 0 1 1年第 o 4期 虞斌等 左旋 肉碱 的化学合 成 4 3 I 百1 十 5 结论 图 l4 M K i t a mu r a以氯 以酰乙酸乙酯为原料 制左旋 肉碱工艺过 程 F i g 1 4 T e ch n o l o g y f o r L ca r n it i n e w it h a ce t y l p e r c h l o r a t e b y M k it a mu r a 左旋肉碱的市场需求增加是无疑 的 加快开发 合成新技术 扩大生 产能力是 当今 主要任务 采 用 便宜的原料 减少反应步骤 使用无毒试剂 非昂贵 的催化剂 以及拆分分离另一半旋光体的利用等 成 为左旋肉碱合成的研究重点 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 O 1 2 1 3 1 4 1 5 参考文献 金抒 汪昌国 L 一肉碱的合成 J 合成化学 2 0 0 0 8 2 1 0 7 1 2 3 Ha ma r i Y J P 5 9 2 3 1 0 48 1 9 8 4 I a n n e l la V p roce s s f o r t h e p r e p a r a t io n o f L Ca r n it in e h y d r o ch lo rid e a n d o f L 一 C a r n i t i n e in n e r s a l t lPj E P 1 4 1 4 0 8 1 9 8 5 Kik u ch i H DE 3 5 3 6 0 93 1 9 8 6 Ka t o G Ho s e in E A S y n t h e s is o f is o me r o f a c e t y lca r n it y lcho lin e a nd o t h e r ca r n i t i n e d e riv a t i v e s J j C a n J o f C h e m 1 9 6 9 4 7 l 1 7 7 1 1 8 7 Mo fi s h it a T Ka wa mu r M Ak u t s u S e t a 1 J P 6 2 2 8 6 9 5 9 1 9 8 7 M n lle r D M4 q t r a c k E L o r e n z l x a ce ma t s plal t u n g v o n D L C a mp h e r s u l fon s a u r e J j J P r a k t C h e m 1 9 7 5 3 1 7 4 6 8 9 6 9 3 Vo e ff r a y K P e r lb e r g e r J C T e nu u L Ca r n it in e No v e l S y n t h e s is an d D e t e r mi n a t io n o f t h e O p t i ca l P u rit y J 1 He l v C h e m A ct a 1 9 8 7 7 0 2 0 58 2 O 6 4 张红素 L 一肉毒碱的合成与应用 J 贵州化工 2 0 0 1 2 6 4 1 5 1 7 S ch a u s S E B r a n d e s B D L a r r o w J F e t a lHi g h ly s e l ec t iv e h y d ml ic k in e t ic r e s o lu t io n o f t e r min a l e t x id e s ca ta ly z e d b y ch ir al s a le n C o co m p l e x e s J J A m C h e m s o c 2 0 0 2 1 2 4 7 1 3 0 7 1 3 1 5 沈大冬 朱锦桃 L 一 一 一肉碱 的合 成 J 中国医药工业杂 志 2 0 0 6 3 7 1 2 8 0 1 8 0 2 Gia n n e s s i F B o lo g n e s i M L Tin t i M 0 e t a 1 p r o ce s s for man u f a c t u fin g L 一 一C a r n it in e f r o m a wa s t e p r o du ct h a v in g o p p o s it e co n fig u r a t i o n lPj C A 2 l1 1 8 9 8 1 9 9 4 胥渡 程 国侯 R 一卡 尼丁 的合成 和改进 J j 化 学世 界 2 0 0 0 f 9 45 9 4 7 2 A n n i s DA J a co b s e n EN P o l y me r s u p p o r t e dch i r a lco s al e n co n p le x e s S y n t h e t ic a p p lica t io n s an d me cha n is t ic in v e s t ig a t io n s in t h e h y d r o l y t i c k i n e t ic r e s o l u t i o n o f t e r mi n a l e pox i d e s lj J A m C h e m S o c 1 9 9 9 1 2l 1 7 41 47 41 5 4 Ku r e s h y R I S in g h S Kh a n N U H e t a 1 impr o v e d c a t a ly t ic a ct iv it y o f h o mo chir al d ime r ic Co b al t S al e n Co mp le x in h y d r o ly t ic k in e t ic r e s o l u t i o n o f t e r mi n al r a ce mi c e p o x i d e s J j C h i r a li t y 2 0 0 5 1 7 5 9 0 5 9 4 1 6 R e a d y d M J a e o b s e n E N Ap r a ct i cal o l i g o m e ric s a l e n C o ca l a l y s t for a s y mm e t ri c e pox i d e rin g o p e n i n g r e a ct i o n s l J j A n g e w C h e m I n t E d 2 0 0 2 4 1 8 1 3 7 4 1 3 7 7 1 7 Wh i t e D E j a co b s e n E N N e w o l i g o me r i c ca t a l y s t f o r t h e h y d r o l c k in e t ic r e lu t io n o f t e r min al e po x id e s u n d e r s o lv e n t fre e co n d i t i o n s J T e t r a h e d r o n A s y mm e t r y 2 0 0 3 1 4 2 2 3 6 3 3 3 6 3 8 I 8 卢定强 涂清波 凌岫泉 等 手性环氧氯丙烷的制备及其药物 应用 J 有机化学 2 0 0 9 2 9 8 1 2 0 9 1 2 1 6 1 9 王朝阳 王燕 宋光伟 等 合成左旋和右旋叉甘油醇的新方法 J 应用化学 2 0 0 8 2 5 1 1 1 3 7 5 1 3 7 7 1 2 0 j C h o i W J Hu h E C P a r k H J e f a k i n e t i c r e s o l u t i o n for o p t i ca l l y a ct i v e e pox i d e s b y mi cr o b i al e n a n t i o s e l e e t i v e h y d r o l y s is J B i o t e ch n o l g y T h n iq u e s 1 9 9 8 1 2 3 2 2 5 2 2 8 2 l J K im H S L e e d H P a r k S e t a b i o e a t al yti e p r e p a r a t i o n o f e h i r al e pi e h lo r o h y d r in s u s in g r e co mb in a n t p ie hia p as t o r is e x p r e s s in g e o x i d e h y d r o la s e o f r h o d o t o r u l a g l u t in is J B io t e ch n o l o g y and B i o p r o e e s s E n g in rin g 2 0 0 4 9 6 2 6 4 2 2 许辉辉 陈月圆 胡忠策 等 手性拆分环氧氯丙烷菌株的筛 选 鉴定及产酶条件研究 J 微生物学杂志 2 0 0 9 2 9 2 3 3 3 8 2 3 j K a h a t M M D a n i e w s k i A R B u r g e r W A co n v e n i e n t s ynt h e s is