2017年2月眼科微生物诊室患者接诊.doc

眼科微生物诊室患者接诊及各检查项目操作流程濮阳市第二人民医院（市眼科医院）检验科2017年2月眼科微生物诊室患者接诊及各检查项目流程 注意事项： 1、门诊进门，接身份证或就诊卡，刷卡，查看检查项目及余额后，交还给患者。 2、在不同登记本上登记患者信息：姓名，性别，年龄，检查项目，眼别，开单医生，保存。一 角膜刮片患者 1、流程： 2、适应症：角膜溃疡，及角膜外伤怀疑细菌感染时。3、信息登记及准备：登记一般信息后，开始给患者连续点0.5%丁卡因滴眼液局部麻醉。共滴眼3次。同时询问患者病程，病因，治疗过程，联系方式，登记身份证信息及住址，固话或手机号（2个）。期间准备真菌培养基，细菌培养基（增菌肉汤），血平皿，载玻片，并一一进行标记。注意：标记号码与登记本相对照。4、取材：裂隙灯下，刮取角膜溃疡组织，以11号尖刀片，刀刃垂直于角膜面，轻轻刮取角膜溃疡组织。涂片：涂二个片，一个做Giemsa染色，一个做10%KOH湿片，显微镜下观察。5、染色: 先滴加甲醇，然后加入Giemsa染液工作液，染色3-5min，自来水冲洗，烘干或晾干显微镜油镜下观察。6、Giemsa工作液配置：将工作液瓶及吸管清洗干净，滤过水冲洗2遍，然后以贮存液：水（1：10）比例配置，混合均匀。7、10%KOH湿片 载玻片滴加10%KOH溶液，用棉签无棉花端轻轻按压，显微镜暗视野10-40倍观察。 8、分离培养注意事项： 严格执行无菌操作规程； 用无菌棉拭子（湿）擦拭溃疡面或伤口处来回擦拭2次取材； 放无菌试管内送检实验室。9、真菌分离标本留取：刮取角膜溃疡组织，用无菌棉签擦拭刀刃及尖部，以无菌流程放入培养管：即酒精灯火焰上轻轻烧培养管口周围，将手无接触部分棉签头部放入试管，折断棉签，并将棉签头部按压接触培养基。10、细菌分离标本留取：无菌棉签擦拭刮后角膜溃疡组织面，先在血平皿上擦拭接种，然后以同上相似的无菌方法将棉签头部放入增菌肉汤。11、观片：观察所有已取组织，查找病原体（真菌，细菌，棘阿米巴等）12、报结果：角膜刮片镜检，看见真菌菌丝或者细菌，或者未见真菌菌丝和细菌13、特别注意： 在观片过程中，对于所看到的典型图片照相保存。如真菌菌丝，细菌。 每个角膜刮片患者都必须保留真菌培养和细菌培养的标本，除非病灶很小或者极不配合的患者。14、具体操作：先开电脑，再开摄像机器开关。等摄像机器绿灯不再闪烁，单击电脑屏幕NIS-Elem BR3.0，界面打开，单击屏幕上方绿色，设定倍数x10,x20,x40,或x100，图像调整清晰后，单击相机标志，保存。文件夹选择和登记本患者相同的编号，可添加姓名和诊断。编号必须有。二患者培养登记信息 1、角膜溃疡患者，取材自角膜，其真菌培养+药敏和细菌培养+药敏，要登记患者姓名，性别，年龄，住院号，病床号，眼别，门诊刮片序号，开单医生，最好加联系电话。取材同上。 2、结膜囊细菌培养+药敏，门诊患者，要登记患者姓名，性别，年龄，眼别，临床诊断，开单医生。 3、结膜囊细菌培养+药敏，住院患者要登记患者姓名，性别，年龄，临床诊断，眼别，开单医生，住院号。三. 结膜细胞学检查 1、适应症：眼睛干涩、眼结膜充血肿胀、各类结膜炎症、眼分泌物过多时以及结膜外伤怀疑细菌感染时。 2、登记：姓名，性别，年龄，眼别，检查项目，联系电话，开单医生 3、取材： 给患者连续点0.5%丁卡因滴眼液至少2次，翻开上睑，刀刃垂直于结膜面取材，然后转移至载玻片，甲醇固定，Giemsa染色； 镜检之后，登记检查结果，并出检验报告，报上皮细胞情况，所见最多细胞，较多细胞，嗜酸性细胞要报，有细菌或真菌孢子要报出。 4、取材注意事项： 严格执行无菌操作规程； 用无菌棉拭子（湿）擦拭溃疡面或伤口处来回擦拭2次取材； 放无菌试管内送检实验室。四免疫组织化学标本采取登记、局部麻醉和取材同结膜细胞学，转移至载玻片后，福尔马林固定，然后送实验室进一步染色。五. 泪液渗透压检查 1、检测：患者取坐位，嘱眼球向上看，以无菌移液器枪头轻轻放进下结膜囊，吸取泪液。可多次吸取泪液，至少6ul用来检查。 2、检查：打开渗透压仪开关，拉出测量孔，将干燥滤纸片放孔正中，加入6ul泪液，推入测量孔，关上开关，80s后读取渗透压值。 3、结果报告： 泪液渗透压：右眼 左眼 参考范围：296-318mmol/kg 4、仪器校准：渗透压仪进行校对，用290mmol/kg标准液取滤纸片于渗透压仪测量孔，加入290mmol/kg标准液6ul,关上机器，测量，80s后观察数值； 按压select，出现界面，不动； 按压ENTER键，出现290mmol/kg； 打开开关，清洗测量孔，继续放入滤纸片，进入下一个测量； 校对4-5次，直至数值在290mmol/kg附近波动。六. 泪液蕨样变试验 1、吸取泪液，操作同泪液渗透压。 2、取少量泪液，1-3ul滴至载玻片上，干燥后显微镜下观察，物镜10-20倍观察。 3、结果报告 结晶样的分枝蕨样表现分为4级： 1级为较大，统一紧密的连续树枝状分布； 2级为稀小，稀疏分散的树枝状分布； 3级极少有树枝状分布，同时伴有大量空泡； 4级则完全丧失蕨样表现，只有成簇的粘液。一般认为1、2级为正常泪液结晶表现，3、4级为泪液异常。七. 泪液溶菌酶检查 吸取泪液，操作同泪液渗透压，至少吸取8 ul，以12 ul为佳在微球菌平皿中先放置2-3个无菌滤纸片，每个滤纸片滴加泪液4 ul，35放置24h，测量抑菌环直径，取平均数值后套入标准公式， 计算泪液溶菌酶（mg/ml） 标准范围4-10 mg/ml。注意：在制作溶菌酶培养皿时，每批均需制作标准曲线。将标准品配置多个浓度，每个浓度需测3个值，即滴加3个纸片，每片加标准液4ul，测量抑菌环直径，制作标准曲线。八. 睑缘螨虫检查 1、患者坐于裂隙灯显微镜前，前额下额贴紧头托，双目微闭。 2、以无菌睫毛镊选取睫毛根部油腻，鳞屑，病变睫毛，带根拔出，放置于载玻片，记住眼别（一般右眼近磨砂端），每个眼拔睫毛6-8根。 3、滴加甘油，加盖玻片，显微镜10-20倍观察，并数螨虫数量。 4、报告时报左右眼各有毛囊蠕形螨或皮脂蠕形螨数量。九. 结膜印迹细胞学取材 1、患者取坐位，登记一般信息 2、0.5%丁卡因局部麻醉，5分钟内连续滴眼3次 3、无菌滤纸条吸干结膜囊泪液 4、分别取灭菌、干燥的6mm硝酸纤维素滤膜放下睑结膜中央、颞侧球结膜距角膜缘2mm处，以玻棒平头按压滤膜10s，取出放有孔蜡片盒内，迅速放福尔马林固定。并做好左、右眼标记。 5、送实验室PAS染色。十. 实验用