流动相pH值对地西泮、艾司唑仑、氯氮卓、三唑仑HPLC色谱行为的影响.pdf

化学工程师 C h e mi ca l E n g i n e e r 2 0 1 1年第 8 期 簿 糯 溯 谶 文章编号 1 0 0 2 1 1 2 4 2 0 1 1 0 8 0 0 2 6 0 3 流动相 p H值对地西泮 艾司唑仑 氯 氮卓 三唑仑HP L C色谱行为的影响 王蔚昕 张春水 黄星 公安部物证鉴定 中心 北京 1 0 0 0 3 8 摘要 在其它 H P L C分析条件不变的前提下 本实验考察了地西泮 艾司唑仑 氯氮卓 三唑仑 4种苯 二氮卓类药物保留时间 拖尾因子 峰面积 3 个指标随流动相水相 P H值改变而变化的趋势 初步总结了流动 相 p H值对 4种药物 HP L C色谱行为的影响 关键词 地西泮 艾司唑仑 氯氮卓 三唑仑 流动相 p H值 HP L C色谱行为 中图分类号 0 6 5 7 7 文献标识码 A I mp a ct o f p H v a l ue o n t h e ch r o m a t o g r a p h y b e h a v io r o f f o u r k in d s o f Be n z o d ia z e p in e s b y I t P LC W ANG We i x i Z HANG Ch u n s h u i HU ANG Xin g I n s t i t u t e o f F e r e ms i e S ci e n ceMi n i s t r y o f P u b l i c S e cu rit y B e i j i n g 1 0 0 0 3 8 C h i n a Ab s t r a ct F ix in g o t h e r p a r a me t e r s t h e ch a n g e o f t h e d ia z e p a m E s t a z o l a m C h l o r d ia z e p o x id e a n d t r ia z o l a m in r e t e n t io n t ime t a il in g f a ct o r a n d p e a k a r e a w it h P H v a l u e w e r e s t u d ie d in r e v e rse d p h a s e h ig h p e r f o r ma n ce l iq u id ch r o ma t o g r a p h y An d t h e imp a ct o f P H v a l u e o n t h e ch r o ma t o g r a p h y b e h a v io r o f t h e f o u r d r u g s w a s s u mma ri z e d p r e l imin a ri l y Ke y wo r d s d i a z e p a m e s t a z o l a m ch l o r d ia z e p o x id e t r i a z o l a m p H v a l u e o f l i q u i d p h a s e HP LC ch r o ma t o g r a p h y b e h a v io r 地西泮 艾司唑仑 氯氮卓 三唑仑属于苯二氮 卓类药物 具备抗焦虑 催眠 抗痉挛等广泛卓越的 药理特性和 良好 的安全性 但同时长期服用此类药 物也会产生依赖性 导致该类药物的滥用现象I 地 西泮 艾 司唑仑 氯氮卓 三唑仑都为我国精神药品 品种目录收载药品 受国家管制 但截至目 前 在法 庭科学领域还缺乏对 4种药物高效液相分析方法 的系统研究 本实验综合考察了流动相 P H值对苯 二氮卓类药物 H P L C色谱行为的影响 以期通过基 础性数据 的积累 为苯二氮卓类药物高效液相方法 的开发提供参考依据 1 实验部分 1 1 试剂与标准 品 地西泮 艾司唑仑 三唑仑 氯氮卓标准品 0 1 M 磷酸缓冲液 H P 0 4 N a H 2 P O N a 2 H P O 乙腈 收稿 日期 2 0 1 1 0 6 2 8 项 目基金 基本科研业务费专项资金重点项目 2 0 0 9 J B G G 0 0 1 作者简介 王蔚昕 1 9 8 3 一 女 医学硕士 实习研究员 主要从事毒品 分析与鉴定工作 1 2 主要仪器及实验条件 日本岛津 L C 2 0 A D液相色谱仪 S P D M 2 0 A二 极管阵列检测器 C T O 一 2 0 A柱温箱 S I L 一 2 0 A自动 进样器 L C s o l u t io n高效液相色谱管理系统 色谱 柱为 in e r t s il O D S S P 5 4 6 X 1 5 0 mm p H 适用范围为 P H 2 7 5 柱温为 4 0 流动相组成 有机相为乙腈 水相为 0 1 M磷酸缓冲液 洗脱程序 为有机相 水相比例由2 5 7 5 经 2 0 ra i n 梯度洗脱至 4 5 5 5 并在此 比例上维持 5 m in 流速 1 0 m L m in 进样量 l L 舒乐安定 三唑仑检测波长为 2 2 0 n m 安 定 检 测 波 长 为 2 3 0 n m 氯 氮 卓 检 测 波 长 为 2 65 n m 1 3 实验 操作 1 3 1 标准溶液的配制称取地西泮 艾司唑仑 三唑仑 氯氮卓标准物质各适量 分别放人 1 0 m L容 量瓶 中 加人 5 mL甲醇振荡溶解后 用 甲醇稀释至 刻度 配制成约 1 0 m g m L 标准溶液 l 3 2 缓冲溶液的配制 2 0 1 1 年第O 8 期 王蔚昕等 流动相p H值对地西泮 艾司唑仑 氯氮卓 三唑仑HP L C色谱行为的影响 2 7 表 1 缓冲溶液的配制 T a b 1 P r e p a r a t io n o f b u f f e r s o l u t io n 1 3 3 分析过程分别以不同 p H值 O 1 M磷酸缓 冲液作为流动相 的水相 取上述标准溶液在上述实 验条件下进样分析 考察保 留时间 拖尾 因子 峰面 积 3 个指标 每个样品相同条件下重复进样 3 次 各指标取平均值 2 结果与讨论 2 1 实验结果 表 2 对地西泮各指标考察结果 T a b 2 I n d e x t e s t r e s u l t o f Dia z e p a m 表 4 对氯氮卓各指标考察结果 T a b 4 I n d e x t e s t r e s u l t o f Ch l o r d ia z e p o x id e 表 5 对三唑仑各指标 考察结果 T a b 5 I n d e x t e s t r e s u l t o f T r ia z o l a m 2 2 讨论与分析 吕 厘 言 函 0 0 5l 1 5 2 2 5 3 3 5 44 5 55 5 66 5 7 p H值 图 1 地西泮 艾司唑仑 氯氦卓 三唑仑保留时间 随流动相水相 p H值的变化 F ig 1 Cu r v e o f pH r e t e nt ion t ime 00 5 1 1 5 2 2 5 3 3 5 44 5 5 5 5 6 6 5 7 p H值 图 2 地西泮 艾司唑仑 氯氦卓 三唑仑拖尾因子 随流动相水相 p H值的变化 F ig 2 Cu r v e o f pH t ail in g f act o r 1 6 O o 0 o l 5 o o o o o O 1 4 0 o 0 o o O 1 3 0 o o O o 0 l 2 o 0 0 0 o o I 1 0 0 0o 0 O 1 o 0 0 0 o o O 匿 0o o 0 00 0 0 0o 00 7 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 5 O o 0 o o 0 4 0 0 0 o 0 3 o 0 O o 0 O 2 0 o 0 0 o 0 0 l 2 3 4 5 6 7 p H值 图 3 地西泮 艾司唑仑 氯氮卓 三唑仑峰面积 随流动相水相 p H值的变化 F ig 3 Cu r v e o f p H p e a k a r e a 加堪 M m 0 勰 拍 加 螺 m 圜啵耀 王蔚昕等 流动相 p H值对地西泮 艾司唑仑 氯氮卓 三唑仑 H P L C色 谱行为的影响 2 0 1 1 年第 0 8 期 2 2 1 流动相 p H值对地西泮 艾 司唑仑 三唑仑 氯氮卓保留行为的影响根据几种苯二氮卓类药 物流动相 p H值 一 H P L C保留时间变化曲线图推测 地西泮 艾司唑仑的 p K a 0 7 4 1 氯氮卓的 p Ka E 3 7 4 5 对于三唑仑 p Ka 7 9 在进一步建立液相方法时 如果需要通过调整 谱峰间距改善分离度 在考虑色谱柱 p H值适用范 围 的基础上 对 于地西泮 艾司唑仑 流动相水相 p H值应限定在 p H值为 2 3的范围内进行变化 对于氯氮卓 p H值可以在 p H值为 3 5的范围内 进行变化 对于三唑仑 p H值在 p H值为 2 6的范 围内进行变化对其保 留时间基本无影响 如果需要减小流动相 p H值对保留行为的影 响 保证方法的重现性 稳定性 在考虑色谱柱 p H 值适用范围的基础上 对于地西泮 艾 司唑仑 流动 相水相 p H值应控制在 5 7 的范围 对于氯氮卓 p H值可控制在 6 7 或 2 2 2的范围 在低 p H值 端其保留时间较高 p H值端明显缩短 但低 p H值端 p H值稳定范围过窄 在实际应用中应综合考虑保 留时间及操作稳定性两个因素 选择合适 p H值范 围 p H值在 2 7的范围内 三唑仑 的保留行为都 较为稳定 2 2 2 流动相 p H值对地西泮 艾司唑仑 三唑仑 氯氮卓峰形的影响流动相水相p H值控制在 2 2 6 4的范 围内 地 西泮 艾司唑仑 三唑仑都能得到 较好峰形 且其拖尾因子值基本不随 p H值的改变 而变化 流动相 p H值的改变对氯氮卓的峰形影响较 大 在 p H值小于 3 2 时 氯氮卓成分峰形较差 p H 上接第 l 2页 值控制在 3 2 6 4的范围内 氯氮卓也可得到较好 峰形 且拖尾因子值基本稳定 峰形不好可能导致 理论塔板数测定不准确 分离度降低 定量不准确 2 因此 氯氮卓 H P L C 定量分析方法的开发不适合在 流动相水相 p H值 2 3的范围内进行 2 2 3 流动相 p H值对地西泮 艾 司唑仑 三唑仑 氯氮卓 D A D检测器响应值的影响在流动相水相 p H值为 2 2 3 2的范围内 地西泮 艾 司唑仑 氯 氮卓的单位响应值随 p H值增大而增大 氯氮卓单 位响应值变化尤为明显 在流动相水相 p H值为5 6 6 4的范围内 地西泮 艾司唑仑 氯氮卓的单位响 应值基本不随 p H值的改变而变化 稳定保持在较 高值 在流动相水相 p H值为 2 2 6 4的范围内 三 唑仑的单位响应值不随 p H值的改变而变化 保持 稳定 待检药物单位响应值的高低对其检测限有较 大影响 且其单位响应值的稳定性也显著影响实验 数据的长期可比性 为了降低苯二氮卓类药物的检 测限 提高检测数据长期可比性 苯二氮卓类药物 H P L C分析方法应该在流动相水相 p H值为 5 7的 范围内进一步开发 参考文献 1 童振华 徐嗣荪 苯二氮卓类药物依赖 J 中国民政医学杂志 1 9 9 5 7 5 2 9 8 3 0 0 2 L R 森德尔 J J 柯克兰 J L 格莱吉克 实用高效液相色谱法的建 立 M 北 京 华 文出版社 2 0 0 1 2 2 1 2 2 2 参考文献 1 杨培霞 安茂忠 田兆清 高度有序多孔阳极氧化铝模板的制 备f j 材料科学与工艺 2 0 0 7 1 5 1 8 7 9 4 2 P a l i b r o d a E A l u mi n u m p o r o u s o x i d e g r o w t h o n t h e r a t e d e t e r mi n i n g s t e p l J j E l e ct r o ch i mi ca A ct a 1 9 9 5 4 0 8 1 0 5 1 1 0 5 5 3 P a l i b r oda E F a r ca s T L u p s a n A A n e w im a g e o f p o r o u s a l u mi n i u m o x i d e J Me t e r i a l s S ci e n ce a n d E n g in e e r i n g 1 9 9 5 B 3 2 1 5 4 朱绪飞 多孔阳极氧化铝形成机理的研究 D 南京理工大学 2 O 0 7 2 3 5 L e e W j i R G d s e l e U N i e l s e h K F a s t f a b r ica t i o n o f l o n g r ang e o r d e r e d p o r o u s a l u m i n a m e m b r a n e s b y h a r d a n odi z a t i o n J N a t u r e Ma t e r 2 0 0 6 5 7 4 1 4 7 6 李淑英 宋琛 多孔阳极氧化铝膜的最佳制备工艺研究 J j 表面