孕妇血清中人类巨细胞病毒DNAppt课件.ppt

孕妇血清中人类巨细胞病毒DNA含量与胎儿宫内感染的关系 1 摘要 目的探讨孕妇血清中人类巨细胞病毒DNA HCMVDNA 含量与胎儿宫内感染发生率的关系 方法 用PCR方法结合荧光探针的体外扩增和检测技术 检测186例HCMV感染孕妇血清 胎儿或新生儿血清 胚胎 绒毛中HCMVDNA拷贝数 2 结果胎儿发生宫内感染及妊娠不良结局与其母亲血清HCMVDNA含量 拷贝值 有关 随着孕妇血清中HCMVDNA含量的增高 胎儿宫内感染及不良妊娠结局的危险性也呈显著增高趋势 结论孕妇血清HCMVDNA含量升高是胎儿感染HCMV并发生妊娠不良结局的重要因素之一 3 关键词 人类巨细胞病毒胎儿宫内感染 垂直DNA 病毒妊娠不良结局 4 TheRelationshipofSerumHCMVDNALoadintheHumanCytomegalovirusInfectionPregnantWomentotheIntrauterineInfectionofNewbornsFUJinhuaetal WeifangPeople shospital Shandongweifang261041 China 5 Abstract ObjectiveTostudytherelationshipofserumHumanCytomegalovirus HCMV DNAloadintheHumanCytomegalovirusInfectionPregnantWomentointrauterineoftheirnewborn MethodsHCMVDNAloadinserumin186HumanCytomegalovirusActiveInfectionPregnantWomenandfetusornewbornandembryo fetalorgansorchorionicvilliweredeterminedbyhumancytomegalovirus CMV PCRfruorogencediagnostickit 6 ConclusionFetalexposuretohighlevelofmaternalHCMVDNAisoneoftheimportantdeterminantofintrauterineinfectionandbadpregnancyoutcome Keywords HCMVDNAloadDiseasetransmission verticalDNA virusBadpregnancyoutcome 7 巨细胞病毒感染 cylomegalovirusinfection 是由巨细胞病毒 cylomegalovirusCMV 引起的人类感染性疾病 近年已列为性传播性疾病 本症特征性病变为感染细胞增大 细胞核及细胞质内分别出现嗜酸性及嗜碱性包涵体 8 CMV具有潜伏期活动的生物学牲 多为潜伏感染 CMV容易发生垂直传播 对胎儿厉害极大 是引起新生儿先天性缺陷和智力发育不全的最主要的病源体之一 9 人类巨细胞病毒是引起宫内感染的最主要的病原体 能导致死胎 畸形 胎儿生长受限 FGR 智力发育落后等严重后果 1 但也有许多孕妇感染HCMV 而未见胎儿及新生儿有异常 由此我们推想孕妇血清中HCMVDNA的含量 拷贝值可能与胎儿及新生儿的感染及不良妊娠结局有关 10 本研究我们用PCR方法结合荧光探针的体外扩增和检测技术检测孕妇血清中的HCMVDNA含量 探讨孕妇血清HCMVDNA含量与胎儿宫内感染及妊娠不良结局的关系 11 资料与方法 12 一 研究对象1995年 2002年在我院产前门诊筛选人类巨细胞病毒DNA HCMVDNA 阳性的孕妇186为研究对象 51例HCMVDNA阴性的孕妇为对照组 13 于孕妇流产 早产 刮宫或分娩前采集静脉血 胚胎期查绒毛 中孕胎儿外观无异常并且要求保留胎儿者抽取脐带血或羊水 死胎者取器官组织 足孕分娩取脐血 与孕妇血清同时查HCMVDNA的拷贝值 14 二方法 15 1 血清学检测 孕妇血清HCMVDNA指标检测 脐带血HCMVDHA检测 采集孕妇静脉血 胎儿脐动脉血2ml 收集于无菌离心管中 室温放置30min 凝固后离心 4000rpm 10min 吸取血清40C保存备检 勿吸入红细胞 转入另一无菌离心管中即可用于测试 16 2 取每例尸检婴儿脑 肝 肾脏 肺的病理标本 胚胎停育用绒毛为标本 处理方法 取1g组织或绒毛入1 5ml试管中 用0 9 NS洗涤后离心 4000rpm 10min 弃上清 再加100ul0 9 NS研碎后离心 10000rpm 10min 吸上部匀浆备检 17 3 检测方法 采用深圳匹基公司生产的HCMVDNA荧光定量试剂盒 操作步骤按说明书进行 18 4 HVMVDNA定量方法 根据测得的HVMVDNA拷贝值将其分为5个等级 0级 1000 m1 1级 10 000 ml 2级 100 000 ml 3级 1 000 000 ml 4级 1 000 000 ml 19 5 统计学方法等级资料采用线性趋势分析 数据EPI 5 0版 软件处理 20 结果 21 一 宫内感染的发生情况186例HCMVDNA阳性孕妇的胚胎 绒毛 胎儿组织 羊水或血清经检测 有34例为阳性 阳性率为18 27 而对照组51例中 无一例发生HCMVDNA先天性感染 母儿感染情况的配对检测结果相关 说明HCMV宫内垂直传播确实存在 22 而在此34例先天感染儿中有8例生后即表现先天畸形 占23 52 与非HCMV感染孕妇的畸胎发生率1例 1 8 差异显著 P 0 001 异常妊娠结局 流产 早产 畸形 死胎等 19例 55 88 19 34 23 其中流产与死胎10例 早产3例 畸形8例 对照组51例中 足月分娩43例 异常妊娠结局 流产 早产 死胎等 8例 15 68 与研究组相比较 有显著差异 24 随访2年内 研究组出现感觉神经性耳聋1例 癫痫1例 精神和智力异常2例 体格发育迟缓后遗症2例 总共6例 占17 64 43例无感染儿随访 智力发育迟缓1例 余无发育均正常 占2 3 故先天性HCMV感染与儿童的生长发育亦有显著的相关性 两组差异亦有极显著性 P 0 001 25 二 孕妇血清HCMVDNA含量与胎儿宫内感染 26 胎儿宫内感染率 随着孕妇血清HCMVDNA含量的增加而呈增高趋势 x2 13 49 P 0 001 因0级宫内感染为0例 故将0级与1级合并 再计算各层OR值 OR值从5 72升至62 39 也呈增高的趋势 见表1 27 表1孕妇血清HCMVDNA分级与胎儿宫内感染的关系表宫内感染DNA分级总例数例数百分数 OR值0级2800 00 1级6433 265 722级35617 1423 423级29931 0340 214级301653 3362 39 28 表中可见 随着孕妇血清HCMV DNA含量增加 宫内感染的发生率呈增加趋势 宫内感染的危险性也逐渐升高 当拷贝值达4级以上水平时 其宫内感染的风险率比达62 39 29 三 症状性感染与宫内感染186例感染性孕妇中 有39例出现症状性感染 其中有宫内感染的34例中29例 85 29 有发热 低热居多 疲倦无力 头痛 咽痛 肌肉酸痛 白带增多 颈部淋巴结肿大 多发性神经炎 单核细胞增多等不同的症状 而8例畸形儿的母亲 孕期均出现症状性感染 30 讨论 31 1孕妇HCMV活动性感染的情况HCMV感染在全世界流行广泛 各地孕妇感染率与地理环境 经济和卫生条件 人群构成及检测手段有关 HCMV具有隐匿感染的特点 多数免疫功能正常的成年人HCMV感染为亚临床型 32 本研究调查发现 胎儿宫内感染的孕妇85 29 孕期曾有临床症状 8例畸形儿 包括早产儿患儿的母亲孕期均反复出现发热 类似 感冒 症状 33 结果提示上述症状可能是孕妇HCMV活动性并且病毒感染量较重的表现 并可能有较高宫内传播危险性 应重点监测母儿HCMV感染的病毒数量 34 2孕妇HCMV的宫内传播目前普遍认为从脐血或产后早期新生儿器官 绒毛及胚胎中检出HCMV IgM或HCMVDNA即可诊断为先天性HCMV感染 35 本研究中调查186例HCMV感染的孕妇的胎儿 新生儿 HCMV宫内感染34例 感染率为18 27 而51例非感染孕妇中的胎婴儿无一例发生HCMV先天性感染 母儿感染情况的配对检测结果相关 说明HCMV宫内垂直传播确实存在 36 有条件的医院应对孕妇进行HCMVDNA常规的筛查 阳性者 特别对DNA拷贝值较高的孕妇应反复进行产前诊断 37 3先天性HCMV感染对胎婴儿的影响胎儿免疫系统不成熟 不能充分识别抗原成分 HCMV侵入后得以在胎儿体内复制 侵袭和损害中枢神经系统 心血管系统 肺 肝 肾等器官而造成死胎 流产 畸胎 新生儿严重疾病甚至死亡 38 据报道 HCMV宫内感染胎儿中 10 0 为症状性感染 死亡率高达30 0 2 3 幸存者几乎均有神经系统损害 智力发育迟缓 脉络膜视网膜炎 4 39 本研究调查186例HCMV感染孕妇的胎儿 新生儿 绒毛 器官及脐血 HCMV感染率为18 27 而感染儿中出现妊娠不良结局的发生率为55 88 40 其中流产与死胎10例 早产3例 畸形8例 51例无感染儿妊娠不良结局率为15 68 畸形一例 差异显著 这些都说明先天性HCMV感染与胎儿不良结局有非常密切的关系 可能因为病毒直接杀伤组织细胞或造成脉管炎 干扰器官的正常发育 5 41 也有学者提出病毒可能通过干扰遗传物质的稳定性和遗传信息的表达而产生致畸效应 6 故感染胎儿中出现妊娠不良结局的风险显著增高 42 据报道 90 以上幸存者的有症状先天感染儿和10 无症状感染儿可在1年后出现感染神经性耳聋 癫痫 精神或体格发痛迟缓等后遗症 本研究随访HCMV感染孕妇所生婴 幼儿34例 月龄2 48个月 43 存活的11例先天感染儿中 2年内出现感觉神经性耳聋1例 癫痫1例 精神和智力异常2例 体格发育迟缓后遗症2例 共6例 占54 54 随访43例非先天感染儿42例身体指标和智力与同龄儿正常标准比较未见明显异常 44 1例智力发育迟缓 2 3 先天性感染儿生后体格 智力发育异常率显著高于非先天感染儿 P 0 05 有学者认为这可能与HCMV宫内感染导致婴幼儿受累器官的慢性感染和持续损害 7 以及细胞免疫功能受抑制 使患儿易合并其它感染性疾病 8 有关 45 4先天性HCMV感染的产前诊断及优生处理HCMV先天感染是致畸和导致智力低下的主要原因之一 目前尚无特效安全的治疗方法 而孕妇HCMV感染只有小部分传播给胎儿造成危害 仅凭母血的HCMV IgM和HCMVDNA阳性并不足以作为终止妊娠的指征 46 因此产前诊断宫内HCMV感染极为重要 本研究应用PCR方法结合荧光探针的体外扩增检测技术 对孕妇和胎儿血清 胚胎 胎儿器官进行产前HCMVDNA定量诊断 47 研究表明 随着孕妇血清HCMVDNA含量的增加 胎儿发生宫内传染的危险性也增高 血清HCMVDNA含量标志着HCMV传染性的强弱 48 当孕妇血清中HCMVDNA含量达4级 1 000 000 ml时 其宫内感染的发生率高达53 33 风险率达 62 39 由此推论 因血清HCMV含量高 而传染性强 而孕妇传染性强是宫内感染的重要原因 49 故定量检测母血中HCMVDNA的含量 可以反映孕妇传染性