高锰酸钾亚硫酸钠流动注射化学发光体系测定美洛昔康.docx

高锰酸钾 - 亚硫酸钠流动注射化学发光体系测定美洛昔康叶桦珍 1 , 2 , 邱 彬 1 , 陈1 , 陈国南 1( 1. 福州大学化学化工学院 食品安全分析与检测技术教育部重点实验室 , 福建 福州350002;2. 福建卫生职业技术学院药学系 , 福建 福州350101 )摘要 : 基于美洛昔康在硫酸酸性介质中对 km no4 - n a2 so3 体系化学发光的增强现象 , 建立了测定美洛昔康的流动注射化学发光法. 美洛昔康溶液的浓度在 6. 0 10 - 8 2. 0 10 - 5 mo l /l 范围内与化学发光强度呈现良好的线性关 系 , 方法的检测限为 4. 8 10 - 8 mo l /l. 该法用于美洛昔康片剂的含量测定 , 平均回收率为 97. 8%.关键词 : 流动注射 ; 化学发光 ; 美洛昔康 ; 高锰酸钾 ; 亚硫酸钠中图分类号 : o657. 7文献标识码 : ad e term ina t ion of m e lox icam by po ta ss ium perm an gana te2sod ium su lf itef low2in jec t ion chem ilum in e scen ce sy stemye h ua - zhen1 , 2 , q iu b in1 ,( 1. co llege of chem istry and chem ica l enginee ring,ch en j ing1 , ch en guo - nan1fuzhou u n ive rsity, fuzhou, fu jian 350002, ch ina; 2. d e2p a rtm en t of pha rm acy, fu jian co llege of m ed ica l o ccup a tion and techno logy, fuzhou, fu jian 350101 , ch ina)a b stra c t: a new flow 2in jec tion chem ilum ine scence m e thod fo r a ssay m e loxicam wa s se t up. it is ba sed on the p henom enon tha t in the m ed ium of su lfa te ac id m e loxicam can sen sitize the chem lium ine scence of km no4 - n a2 so3 system. m e loxicam have good linea r re la tion w ith chem ilum ine scence in ten sity ove rthe concen tra tion range of 6. 0 10 - 8 2. 0 10 - 5 mo l /l and the lim it of de tec tion of th is m e thod wa s4. 8 10 - 8 mo l /l. the m e thod wa s app lied to de tec t m e loxicam in tab le t and the re su lt of ave rage re2cove ry te st wa s 97. 8 %.keyword s: flow 2in jec tion; chem ilum ine scence; m e loxicam; po ta ssium p e rm angana te; sod ium su lfite美洛昔康 (m e loxicam , c14 h13 n3 o4 s2 , mlx)是一种新型昔康类非甾体抗炎药物 ( non - ste ro ida l an ti -inflamm a to ry d rugs, n sa id s) 1 , 2 . 它通过选择性抑制环氧合酶 -2 ( cox - 2 )而阻止致炎的前列腺素的合成 , 发挥消炎 、止痛和退 热的作用 , 同时 , 不影响环氧合酶 - 1 ( cox - 1 )的活性 , 避免了其它非甾体抗炎药的消化道溃疡 、出血及肾脏损伤等副作用 . 它主要应用于类风湿性关节炎 ( ra )和骨关节炎 (oa )的治疗 , 也可图 1 美洛昔康分子结构f ig. 1 the mo lecu la r struc tu re of mlx用于解热镇痛 . 美洛昔康化学名为 4 - 羟基 - 2 - 甲基 - n - ( 5 -甲基 - 2 - 噻唑 ) - 2 氢 - 1 , 2 - 苯并噻嗪 - 3 - 甲酰胺 - 1 , 1 -二氧化物 , 相对分子质量为 351. 41 , 其化学结构如图 1 所示 .美洛昔康的含量测定方法有高效液相色谱法 3 、紫外分光光度法 4 、电化学方法 5 , 6 、毛细管电泳法 7 、荧光法 8 和化学发光法 9 等 . 本实验利用美洛昔康增强高锰酸钾 - 亚硫酸钠体系化学发光的性质 ,建立了高锰酸钾 - 亚硫酸钠 - 美洛昔康流动注射化学发光法 , 并将该法用于片剂中美洛昔康含量的测定 ,平均回收率达到 97. 8 %.收稿日期 : 2006 - 11 - 20作者简介 : 叶桦珍 ( 1973 - ) , 女 , 博士研究生 , 讲师 .基金项目 : 福建省教育厅科研资助项目 ( jb06052)761第 5 期叶桦珍 , 等 : 高锰酸钾 - 亚硫酸钠流动注射化学发光体系测定美洛昔康1 实验部分1. 1 仪器和试剂iffm - e 型流动注射化学发光分析仪 (西安瑞迈分析仪器有限公司 ) ; 美洛昔康 (mlx)标准溶液 ( 1. 010 - 4 mo l /l ) : 准确称取美洛昔康标准品 (中国药品生物制品检定所 ) 0. 003 6 g, 用 0. 1 mo l /l n aoh 溶液 溶解 , 并定容于 100 ml 容量瓶 , 避光冷藏 ; 高锰酸钾溶液 ( 2. 0 10 - 2 mo l /l ) ; 亚硫酸钠溶液 ( 5. 0 10 - 3 mo l /l ) ; 美洛昔康片 (南通飞马药业有限公司 , 批号 051101 ) ; 其他试剂均为分析纯 , 实验用水均为二次 蒸馏水.1. 2 实验方法流动注射化学发光分析仪流程图如图 2所示 . 将一定量的美洛昔康溶液经 a通道进入采样环内 , b通 道中的酸性亚硫酸钠溶液作为载液流经采样阀并携带美洛昔康溶液与 c通道的高锰酸钾溶液混合后进入流通池. 混合溶液在流通池中产生的化学发光由光电倍增管检测. 美洛昔康溶液加入系前后的化学发光峰高差值与美洛昔康浓度呈线性关系 , 据此进行定量分析 .km no4- n a2 so3 体图 2 流动注射化学发光分析仪流程图f ig. 2 f low cha rt of flow - in jec tion chem ilum ine scence ana lysis2 结果与讨论2. 1 化学发光反应的动力学性质按图 1所示流程图进行实验 , 加入美洛昔康前后的化学 发光图谱如图 3 所示 , 体系中其它物质浓度为 : c ( km no4 )= 3. 0 10 - 4 mo l /l , c (n a so= 6. 0 10 - 3 mo l /l ,)2 3c (n aoh ) = 0. 1 mo l /l. 结果表明 : 曲线 2 化学发光峰约 2 s达到最大值 , 出峰历时约 6 s, 可见该化学发光反应为快速发 光反应. 比较 2条曲线的高度及形状可知美洛昔康对高锰酸 钾 - 亚硫酸钠体系的化学发光有增敏及延长发光时间的作 用 .2. 2 仪器参数对发光强度的影响美洛昔康浓度为 1. 0 10 - 5 mo l /l (其中氢氧化钠浓度为0. 1 mo l /l ) 、亚硫酸钠浓度为 5. 0 10 - 3 mo l /l (其中硫酸浓 度为 1. 0 mo l /l )和高锰酸钾浓度为 4. 0 10 - 4 mo l /l 的条件 下进样 , 考察了仪器参数对体系化学发光强度的影响 .2. 2. 1 采样时间对发光强度的影响图 3 体系化学发光曲线f ig. 3 cu rve s of chem ilum ine scence system研究了图 2 中 p1 的泵速为 30 r /m in 时 5和 10 s的采样时间对发光强度的影响 . 结果表明 , 5 和 10 s采样时间的发光强度无明显差异 , 但进样 10 s的样品消耗量大 , 故本实验选用采样时间为 5 s. 1994-2013 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved. 762福州大学学报 (自然科学版 )第 35 卷2. 2. 2 流速对发光强度的影响在化学发光体系中 , 图 2中 p2 的泵速决定了高锰酸钾 、亚硫酸钠 、美洛昔康的混合溶液到达检测器的时间 , 流速太慢会导致最大发光信号产生在进入流通池之前 , 流速太快则导致最大发光信号产生在通 过流通池之后 , 两种情形都可导致测定灵敏度的下降. 实验结果显示 , 随着 p2 的泵速加快 , 化学发光强 度随之增强 , 达 70 r /m in之后发光强度无明显增强 . 考虑到样品的消耗损失 , 本实验选用 p2 的泵速为 70 r /m in进行以下实验.2. 2. 3 光电倍增管参数对发光强度的影响考察了当电压为 600、800、900和 1 000 v 时及增益为 1和 2时体系的化学发光强度 , 结果显示 , 随着 电压和增益的增大 , 发光峰强度明显增强 , 基线也随之升高 . 兼顾测定的灵敏度和稳定性 , 选择光电倍增 管电压为 1 000 v , 增益为 1进行以下实验.2. 3 溶液参数对发光强度的影响2. 3. 1 高锰酸钾溶液的浓度对发光强度的影响高锰酸钾作为体系中的氧化剂 , 其浓度是影响化学发光强度的主要因素. 考察高锰酸钾溶液的浓度 在 1. 0 10 - 4 8. 0 10 - 4 mo l /l 对体系化学发光的影响 , 结果如图 4 所示 . 结果表明 , 当高锰酸钾溶液的浓度为 3. 0 10 - 4 mo l / l 时 , 样品体系与空白体系的化学发光信号差值最大.的高锰酸钾进行以下实验 .3. 0 10 - 4 mo l / l故选用2. 3. 2 亚硫酸钠溶液的浓度和酸度对发光强度的影响考察在 1. 0 mo l /l 硫酸中 , 浓度在 4. 0 10 - 3 1. 0 10 - 2 mo l /l 亚硫酸钠溶液对体系发光的影响 , 如 1994-2013 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved. 763第 5 期叶桦珍 , 等 : 高锰酸钾 - 亚硫酸钠流动注射化学发光体系测定美洛昔康图 5 所示 . 结果表明 , 随着亚硫酸钠浓度的不断增大 , 空白体系和样品体系的发光强度均减小 , 但两体系的发光强度差值呈先增大后减小趋势 , 当亚硫酸钠溶液的浓度为 6. 0 10 - 3 mo l /l 时 , 本底体系和样品体 系的发光强度差值达最大 . 硫酸在体系中除了中和美洛昔康中的氢氧化钠 , 还影响着高锰酸钾的氧化能力 . 在以上最优条件下 , 考察在 0 2. 5 mo l /l 硫酸浓度对体系发光强度的影响 , 结果如图 6 所示. 结果 表明 , 随着硫酸浓度的增大 , 空白体系和样品体系的发光强度差值先增大后减小 . 因此 , 选用 6. 0 10 - 3 mo l /l 的亚硫酸钠 、2. 0 mo l /l 的硫酸进行以下试验.2. 3. 3 氢氧化钠浓度的影响氢氧化钠在体系中作为美洛昔康的溶剂 , 也影响化学发光反应的 ph 值. 在 0. 01 1. 0 mo l /l 范围内 改变氢氧化钠浓度进行实验 , 结果如图 7 所示 . 结果显示 , 氢氧化钠介质的浓度为 0. 1 mo l /l 时 , 空白体系和样品体系的发光强度差值最大 , 故以下实验选用氢氧化钠的浓度为 0. 1 mo l /l.2. 4 工作曲线 、精密度和检出限2. 4. 1 工作曲线- 4- 3在选定的最佳实验条件下 ( c ( km no4 ) = 3. 0 10mo l /l , c (n a2 so3 ) = 6. 0 10mo l /l , c ( h2 so4 )= 2. 0 mo l /l , c (n aoh ) = 0. 1 mo l /l ) , 按照实验方法对不同浓度的美洛昔康标准溶液的发光强度进行测 定 , 绘制工作曲线 . 结果表明 , 美洛昔康溶液的浓度在 6. 0 10 - 8 2. 0 10 - 5 mo l / l 范围内 , 体系的化学 发光强度 ( i)与其浓度 ( c)呈良好的线性关系 . 为了提高测定准确度 , 对工作曲线分段绘制 , 在 6. 0 10 - 81. 0 10 - 6 mo l /l , 线性回归方程为 : i = 6. 888 3 107 c + 120. 19 ( r2 = 0. 998 2 ) , 曲线如图 8 ( a)所示 ;在 1. 0 10 - 6 2. 0 10 - 5 mo l /l , 线性回归方程为 : i = 0. 999 0 107 c + 179. 36 ( r2图 8 ( b)所示.= 0. 998 3 ) , 曲线如图 8 美洛昔康工作曲线f ig. 8 ca lib ra tion cu rve of mlx2. 4. 2 精密度测定在所选定的最佳条件下 , 按照实验方法对含量为 1. 0 10 - 6 mo l /l 的美洛昔康溶液进行 11 次平行测 定 , 11次平行测定的相对标准偏差 r sd 为 1. 30 %.2. 4. 3 检出限测定在所选定的最佳条件下 , 按照实验方法对体系空白溶液的发光强度进行 11 次平行测定 , 得标准偏差s 为 1. 1, 由公式 d = 3s / k ( s 为测定的标准偏差 , k为工作曲线的斜率 )计算求得该方法检出限为 4. 8 10 - 8 mo l /l.2. 5 干扰实验配制浓度为 1. 0 10 - 5 mo l /l 的美洛昔康溶液 , 在最优的实验条件下进行干扰试验. 结果表明 : 在相 对误 差 10 %的 范 围 内 , 8 倍 的 znc l2 , 10 倍 的 cac l2 , 20 倍 的 kc l, 50 倍 的 cuc l2 , 100 倍 的 fec l3 、 m gc l2 , 150倍的 n ac l, 300倍的蔗糖 , 以及 500倍的淀粉对测定不产生干扰. 1994-2013 china academic journal electronic publishing house. all rights reserved. 764福州大学学报 (自然科学版 )第 35 卷2. 6 样品测定及回收试验取美洛昔康片 20 片于称量瓶中 , 精密称重 , 求得平均片重为 0. 139 5 g. 置样品于研钵中研细 , 转移 至称量瓶中 , 用减量法称取适量样品 (约含 0. 9 m g的美洛昔康 ) , 加入适量 0. 1 mo l /l 的 n aoh 溶液溶解 ,超声振荡 , 置于 25 ml 容量瓶中 , 用 0. 1 mo l /l 的 n aoh 溶液稀释至刻度线 , 旋摇并用微孔滤膜 ( 0. 22m )过滤 , 静置备用 .精确量取滤液 0. 5 ml , 用 0. 1 mo l /l 的 n aoh 溶液逐级稀释 , 摇匀 , 使最终浓度位于工作曲线的线性 范围内. 在上述最佳条件下测定其化学发光强度并代入工作曲线求得其含量 . 平行测定 3份 , 测定结果列 于表 1. 合格的美洛昔康片的含量应为标示量的 95 % 105. 0 % , 由测定结果可知 , 该批号的样品合格.准确称取 0. 8、1. 0和 1. 2 m g美洛昔康标准品各 3份分别加入 0. 016 7 g片剂粉末中 , 混合均匀后照上 述方法进行处理并测定 , 计算样品的加样回收率 , 批号 051101的测定结果列于表 2.表 1 样品测定结果ta b. 1the re su lts of sam p le de tec t ionw测定/m gx含量/ %x平均含量/ %x标示/ %( x平均含量 / x标示 )/ %r sd0. 8940. 9010. 8965. 365. 405. 125. 295. 3898. 32. 86%表 2 回收率测定结果ta b. 2the re su lts of recovery te stw加入/ m gw测定/m gp回收/ %p平均回收/ %r sd0. 81. 00. 786 , 0. 772 , 0. 7790. 985 , 0. 973 , 0. 96798. 2, 96. 5 , 97. 498. 5, 97. 3 , 96. 797. 80. 862% 1. 2 1. 187 , 1. 181 , 1. 181 98. 9 , 98. 4 , 98. 4 3 结语建立了一种利用高锰酸钾 - 亚硫酸钠 - 美洛昔康流动注射化学发光体系测定美洛昔康的新方法 , 该 法灵敏度高 、选择性好 、简单快速 , 对美洛昔康片含量测定的平均回收率为 97. 8 %.参考文献 : 1 王 平 , 顾振纶 . 新型非甾体抗炎药 美洛昔康 j . 中国新药与临床杂志 , 2000 , 19 ( 6 ) : 499 - 501. 2 enge l g, boge l r , schn itzle r c, e t a l. m e loxicam: a new n sa id w ith an imp roved safe ty p rofile th rough p refe ren tia l inh ib ition of cox - 2 j . b iochem pha rm aco l, 1996 , 51 ( 1 ) : 18 - 23. 3 戈升荣 , 王晓珉 , 祝德秋 . h plc法测定美洛昔康血药浓度及其药动学 j . 中国临床药学杂志 , 2004 , 13 ( 4 ) : 231 -232. 4 唐 红 , 陈 嘉 . 吸收系数法测定美洛昔康片的含量 j . 中国药业 , 2001 , 10 ( 3 ) : 26. 5 黄 鹤 , 高红艳 , 曾泳淮 . 美洛昔康的吸附伏安特性 j . 药学学报 , 2000, 35 ( 9) : 696 - 699. 6 r ad i a , e l r ie s m a , e l - a nwa r f, e t a l. e lec trochem ica l o