2014生物技术制药复习题.doc

,.第一章 绪论名词：1生物技术：是人类对生物资源（包括微生物、植物、动物）的利用、改造并为人类服务的技术。2生物技术制药：采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助微生物、植物或动物来生产所需的医药品，称为生物技术制药。简答题：1生物技术包含的技术范畴及所占地位 答：基因工程（核心）、细胞工程（基础）、酶工程（条件）、发酵工程（技术）、抗体工程（实例）。2生物技术按技术特征分为哪三个发展阶段，每一阶段的技术特征是？答：传统生物技术阶段，技术特征：酿造技术；近代生物技术阶段，技术特征：微生物发酵技术；现代生物技术阶段，技术特征：基因工程技术。3生物技术药物的特征？答：分子结构复杂；具有种属特异性；针对性强，疗效高；稳定性差；基因稳定性；免疫原性；体内的半衰期短；受体效应；多效性和网络性效应；检验的特异性。4生物技术制药的特征？答：高技术，高投入，长周期，高风险，高收益。第二章 基因工程制药名词：1基因工程技术：就是将所要重组对象的目的基因插入、拼接、转入新的宿主细胞，构建成工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。2分批培养：一次性将培养基加入反应器中，接种培养后收获细胞的操作方式。3补料分批培养：是将种子介入发酵罐中进行培养，经过一段时间后，间歇或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的培养方法。4连续培养：是将种子接入发酵反应器中，搅拌培养至菌体浓度达一定程度后，开动进料和出料蠕动泵，以一定稀释率进行不间断培养。5高密度发酵：是指培养液中菌体的浓度在50gDCW/L以上，目的是降低成本，提高效率。6离子交换层析：是依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。7疏水层析：是利用蛋白质表面的疏水区域和固定相上疏水基团之间相互作用力差异，对蛋白组分进行分离的层析方法。8亲和层析：是利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以是结合解除。9：凝胶过滤层析：是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。简答题：1利用基因工程技术生产药物的优点答 ： 大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用提供有效的保障； 可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化、和结构进行深入研究，从而扩大这些物质的应用范围； 可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。2基因工程药物制造的主要程序有哪些？答：获得目的基因，组建重组质粒，构建基因工程菌（或细胞），培养工程菌，产物分离纯化，除菌过滤，半成品检定，成品检定，包装。3人工合成目的基因的限制有哪些？答：不能合成太长的基因；人工合成基因时，遗传密码的简并性会为选择密码子带来很大困难，当以氨基酸顺序推测核苷酸序列时，不一定与天然基因完全一致，易造成中性突变；费用较高。4基因工程宿主菌应满足哪些要求？答：具有高浓度、高产量、高产率；能利用易得廉价原料；不致病、不产生内毒素；发热量低、需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；容易进行代谢调控；容易进行重组DNA技术；产物容易提取纯化。5基因工程中的表达载体必须具备哪些条件？答：载体能独立地复制； 应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选； 应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别； 应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录； 应具有很强的终止子，以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因，而不转录其他无关的的基因，同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定。6影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？答：外源基因的剂量，外源基因的表达效率，表达产物的稳定性，细胞的代谢负荷，工程菌的培养条件。7真核基因在大肠杆菌中的表达形式有哪些？答：以融合蛋白的形式表达药物基因；以非融合蛋白的形式表达药物基因；分泌型表达药物基因。8表达用酵母菌株应满足哪些要求？答：菌体生长力要强；菌体内源蛋白酶要较弱；菌株性能要稳定；分泌能力要强。第三章1细胞工程：是以细胞为单位，按人们的意志，应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术，有目的地进行精心设计，精心操作，使细胞的遗传特性发生改变，从而达到改良或产生新品种的目的，以及使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的能力，从而在离体条件下进行大量培养、增殖，并提取出对人类有用的产品。2代谢工程：即采用基因工程的手段，使工程细胞增加或建设某种酶，改造它的代谢能力和途径，使其降低对某些营养物质的需要，减少某些代谢产物的产生和危害，以及控制工程细胞的增殖速度和制造产品的能力。3组织工程：即通过对细胞的大量培养，并用细胞直接作为一种治疗手段用于临床，或用培养的细胞进一步加工成一种组织，如人造皮肤、人造肝脏、人造胰腺、人造血管和人造骨等，并用于临床。简答题：1动物细胞的生理特点？答：细胞的分裂周期长；细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象正常二倍体细胞的生长寿命使有限的；动物细胞对周围环境十分敏感；动物细胞对培养基的要求高；动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同。2生产用的动物细胞的种类？答：原代细胞，二倍体细胞，转化细胞系，融合细胞系，重组工程细胞系。3动物细胞培养过程中，加入血清的作用机制？答：提供有利于细胞增殖所需的各种生长因子和激素；提供有利于细胞贴壁所需的贴附因子和伸展因子；提供可识别金属、激素、维生素和脂质的结合蛋白；提供细胞生长所必需的脂肪酸和微量元素。4无血清培养基的优点？答：提高了细胞培养的可重复性，避免了由于血清批次之间差异的影响；减少了由血清带来病毒、真菌和支原体等微生物污染的危险；供应充足、稳定；细胞产品易于纯化；避免了血清中某些因素对有些细胞的毒性；减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰，便于对实验结果的分析。5悬浮培养的优缺点？答：优点：操作简单，培养的体积大、成本低；培养条件比较均一；传质、传氧较好；传代时无需消化分散；容易扩大培养规模。 缺点：由于细胞体积较小，难采用罐流培养，细胞密度较低。6贴壁培养的优缺点？答：优点： 适用的细胞较广；容易更换培养液；容易采用罐流培养方式使细胞达到高密度。缺点： 操作比较麻烦；培养条件不易均一；传质、传氧较差；不能有效监测细胞的生长；需要合适的贴附材料和足够的面积；扩大培养比较困难，投资大。7动物细胞生物反应器的类型？答 ：搅拌