食品中亚硝酸盐的测定.docVIP

食品中亚硝酸盐的测定（分光光度法）一、实验目的1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，最大吸收波长538nm下测吸光度值A, 与标准系列比较定量。 三、仪器1. 722分光光度计若干，提前20min打开预热2. 组织绞碎机，菜刀，砧板1-2套3. 50mL烧杯 500mL烧杯 3L大烧杯 2个/组1个/组2个4. 电炉2个5. 托盘天平1个/组6. 200mL容量瓶 500mL容量瓶 1个1个/组7. 恒温水浴锅1-2个8. 25mL具塞比色管 11个/组9. 滴管，漏斗，滤纸，吸小球，1个/组10. 玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸若干四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。）1.亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾K4Fe6(CN)3H2O，用水溶解后，稀释至1000mL。分装，1瓶/大组2乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌Zn(CH3C00)22H20，加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。分装，1瓶/大组3、饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠(Na2B0710H20)，溶于100 mL热水中，冷却后备用。分装，1瓶/大组4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。分装，1瓶/大组5、盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中，避光保存。有致癌作用分装，1瓶/大组6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每ml相当于200g亚硝酸钠。分装，1瓶/大组7、亚硝酸钠标准使用液（0.2g/mL）：临用前，吸取5.00mL0.2 g/L亚硝酸钠标准溶液，置于200 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每mL相当于5g亚硝酸钠。分装，1瓶/大组8. 蒸馏水1瓶/组五、实验步骤1、样品的处理：（1）取样：准确称取5.0 g经绞碎、混匀的样品，置于50mL烧杯中。（2）沉淀蛋白质：加12.5mL硼砂饱和溶液，搅拌均匀，以70左右的水约300mL将样品洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温。一面转动一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质（3）过滤：加水定容，放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。 2 标准曲线的绘制和样品的测定取10个25ml具塞比色管，标号，按下列步骤操作：管号012345678样标准溶液（ml）0.00 0.100.20 0.30 0.40 0.50 0.75 1.00 1.25 20.00 相当亚硝酸钠（g）0.000.501.001.502.002.503.755.006.25对氨基苯磺酸（ml）各管均加1ml（混匀，静置3-5min）盐酸萘乙二胺（ml）各管均加0.5ml加水至刻度（25 ml )，混匀，静置15min，以零管调节零点，于波长538nm处测吸光度A，绘制标准曲线。 同时做试剂空白。 六、数据记录管号012345678样液试剂空白A538七、数据处理按下式计算：AX = 1000 v2 m 1000 V1 式 中 :X 试样中亚硝酸盐的含量， mg/kg；V1 试样处理液总体积，mL；V2 测定用样液体积，mL； m 试样质量，g；A试样测定液中亚硝酸盐的质量，g；部分食品中亚硝酸盐的限量标准（以NaNO2计）品 名 限量标准 mg/kg 食盐（精盐）、牛乳粉 2 香肠（腊肠）香肚、酱腌菜、广式腊 肉 20 鲜肉类、鲜鱼类、粮食 3 肉制品、火腿肠、灌肠类 30 蔬菜 4 其他肉类罐头、其他腌制罐头 50 婴儿配方乳粉、鲜蛋类 5 西式蒸煮、烟熏火腿及罐头、西式火腿罐头 70八、注意事项1、盐酸萘乙二胺有致癌作用2、显色后稳定性与室温有关，一般显色温度为1530时，在2030min内比色为好。3、硼砂饱和液的作用： 吸收亚硝酸盐的NO2，使亚硝酸盐的总量不会因加热而减少；蛋白质沉淀剂。4、亚铁氰化钾溶液和乙酸锌（可用硫酸锌代替）作用：蛋白质沉淀剂。原因：亚铁氰化钾溶液和乙酸锌反应，生