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第 2 8卷 第 8期 2 0 1 1 年 8月 应 用 化 学 C HI NE S E J OU RNAL OF AP PL I ED C HEMI S T R Y V o 1 2 8 I s s 8 Au g 2 0 1 1 烟草花叶病毒在受限空间下的自组装行为 肖桂花 彭 波 王 倩 苏朝晖 林 园 中国科学院长春应用化学研究所 高分子物理与化学国家重点实验室长春 1 3 0 0 2 2 美国南卡罗莱纳大学化学与生物化学系美国南卡罗莱纳州 2 9 2 0 8 摘要以烟草花叶病毒 T MV 为基本构建单元 研究了其在毛细管 载玻片 载玻片和柱透镜 硅片 3种不 同受限空间下的自组装行为 结果表明 由于接触线有规律 重复性的粘滑运动 在 3种受限体系下 T MV均 可组装得到高度规整的条带结构 在毛细管内组装可得到垂直于管的长轴方向的有序条带 随接触线深入 管中心 条带跨距 z 与带宽 均逐渐增大 在2个平行载玻片所构成的可控空间内所得到的条带以2条互 相垂直的中心线为轴对称排列 并沿从载玻片边缘至轴向中心方向条带跨距和带宽梯度增大 同样 利用柱 透镜一 硅片所组成的体系可得到类似平行线状条带 其跨距 带宽及条带高度沿从外部边缘至柱透镜 硅片接 触中心方向逐渐减小 在 3 种体系下 棒状 T M V粒子均平行于接触线的方向取 向 T M V浓度对组装结构具 有显著影响 随着浓度的增加 条带跨距和带宽均增加 直至条带结构消失形成连续膜 关键词受限蒸发 烟草花叶病毒 自组装 中图分类号 0 6 3 6 1 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 0 0 5 1 8 2 0 1 1 0 8 0 9 0 1 06 DOI 1 0 3 7 2 4 S P J 1 0 9 5 2 0 1 1 0 0 6 0 6 液滴在固体表面蒸发时有 2 种模式 一种为固定接触线模式 液滴在干燥过程中始终保持固定 的接触面积 接触角逐渐减小 液滴内由内向外的径向对流阻止液滴收缩 从而将溶质带到接触线处沉 积 形成干燥斑 另一种为非固定接触线模式 蒸发过程中接触线不能被固定 接触角保持恒定 气一 液界 面逐渐 向内收缩 形成均匀沉积 接触线固定时液滴蒸发可以形成单个的环 如 咖啡环 3 4 或者以 不连续 的形式向中心收缩形成多环 然而在通 常的蒸发条件下 往往 得到不规则 的 随机 的同心 环 近来 X u 和 L i n等 报道了通过精确控制高分子溶液的蒸发过程从而得到高度规整的组装图 形 即受限蒸发自组装 将溶液注入到球透镜和硅片所构成的受限空间中 由于毛细作用 液滴被限制在 s p h e r e o n f l a t 结构的空隙中 蒸发局限在液滴的边缘 而不是在整个液滴的表面进行 该方法可以得 到高度为纳米级 宽度为微米级的规整同心圆环 且环间距离 A 一 2 个相邻环带中心之间的距离 和 环的高度 由外到内梯度减小 当前受限蒸发自组装的对象主要是高分子体系 以及各向同性的球形粒子 而对于各向异性 纳米粒子的组装行为报道较少 m j 由于各向异性的棒状粒子具有较大的长径比 从而在蒸发过程中 容易产生取向 而这种具有规则取向的组装结构在离子电池电极 和生物传感器 等领域具有广泛 的应用 因而 研究棒状粒子的自组装具有重要的意义 本文采用受限蒸发的方法 以棒状生物纳米粒 子烟草花叶病毒 T MV 长 3 0 0 I l m 外径 1 8 n m 内径 4 n m 为构建单元 采用了毛细管 载玻片一 载玻片 和柱透镜一 硅片 3 种受限体系 均得到规整排列的条带结构 并且条带跨距 f 从一个条带开始形成处到 下一个条带形成处之间的距离 如图1 C所示 带宽 钾 从条带开始形成处到条带形成终止处之间的距 离 如图 l C所示 呈梯度变化 1 实验部分 1 1 仪器和试剂 O l y m p u s I X 8 1 型光学显微镜 日本 O l y m p u s N a n o S co p e I I I A M u l t i M o d e 型原子力显微镜 A F M 美 2 0 1 0 1 0 1 2 收稿 2 0 1 0 1 2 1 5修回 基金委创新群体 5 0 6 2 1 3 0 2 美国N S F C H E 0 7 4 8 6 9 0 D o D W 9 1 1 N F 0 9 1 2 3 6和D O E B E S 资助项 目 通讯联系人 林园 副研究员 T e l 0 4 3 1 8 5 2 6 2 6 5 8 F a x 0 4 3 1 8 5 2 6 2 1 2 6 E m a i l l i n y u a n ci a c j l C tl 研究方向 功能型生物纳米材料 应 用 化 学 第 2 8卷 国 V e e co Y C K 1 0 2 5型 K 9平凸柱面镜 长春市宝泰光电科技公司 载玻片 美国 S w i s s g l a s s 公 司 尺 寸 7 5 a m 2 5 cm 0 5 a m 毛细玻璃管 美国 K I MB L E公司 长 2 2 a m 内径0 1 5 e m K 2 H P O 4 9 8 英 国 A l f a A e s a r公 司 K H P O 9 9 0 英 国 A l f a A e s a r公 司 配制 溶 液 以及 冲洗 使 用 的超 纯水 1 8 2 M Q a m 由M i l l i p o r e M i l l i Q s y s t e m超纯水制备仪制取 美国 硅片 上海合金硅材料有限公司 1 2 实验方法 按文献 1 4 方法提纯 T M V 配制 T MV溶液均用 p H 7 4的缓冲溶液 缓 冲溶液 由 1 0 mm o l L的 K H P O 和 K H P O 水溶液 昆 合配制而成 硅 片 柱透镜 载玻 片和毛细玻璃管使用前均经过 清洗 在 p ir a n h a 溶液 V 9 8 浓硫酸 V 3 0 双氧水 7 3 中于 7 5 煮 2 h 然后用超纯水超声清洗 3次 N 气吹干备用 1 2 1 毛细管受限体系 参照文献 1 1 l 5 方法组装毛细管受限体系 图 1 A 在水平放置的毛细玻 璃管中注入 2 5 L T M V溶液 P T M V 分别为 0 0 1 0 0 5 0 1 和0 5 g L 毛细玻璃管长 2 2 a m 内径 0 1 5 a m 在室温下蒸发直至干燥完全 约 3 d 用光学显微镜和原子力显微镜表征毛细管内的组装图形 1 2 2 载玻 片一 载玻片受限体 系 参照文献 1 O 方法组装载玻片一 载玻 片受限体 系 如图 2 A所示 由 2 个被玻璃垫片隔开的水平放置的载玻片构成受限体系 载玻片尺寸为7 5 a m 2 5 a m 玻璃垫片尺寸 0 5 a m 2 5 e m 在该受限体系中注入 1 5 m L T M V溶液 p T M V 为0 0 1 0 1 和0 5 g L 在室温 下放置 2 d至干燥完全 分离两载玻片 用光学显微镜和原子力显微镜表征载玻片上的组装图形 1 2 3 柱透镜一 硅片受限体系 参照文献 7 9 方法组装柱透镜 硅片受限体系 其示意图如图 4 A所 示 将 5 0 L的 T MV溶液 p T M V 为 0 0 1 0 1和 0 5 g L 注入柱透镜和硅片之问的空隙中 柱透镜 长 1 2 m m 宽 1 0 m m 曲率半径 1 2 9 2 m m 硅片尺寸为 1 5 m m 1 5 m m 在室温下干燥完全 约4 h 分 离硅片和透镜 用光学显微镜和原子力显微镜表征硅片上的组装图形 2 结果与讨论 2 1 毛细管受限体系 当P T MV 0 0 1 g L时 溶液干燥完全后毛细管内壁可形成平行的条带结构 条带垂直于管的长 轴方向 条带形成的机理如图 1 B所示 在固 液一 气三相界面处形成薄的弯液 面 伴随水 的蒸发 液体内 C 图 1 毛细管受限体系示意图 A c 和不同T MV浓度下通过原子力显微镜观察到的形貌图 D G F i g 1 S ch e m a t i c r e p r e s e n t a t i o n o f a ca p il l a r y t u b e co n t a in in g T MV s o l u t i o n A s ch e ma t i c o f d r y in g m e ch a n i s m o f s t r ip e s f o r ma t i o n B ca r t o o n p r e s e n t a t i o n o f a p r o t e i n s t rip e p a t t e rn C A F M h e ig h t i ma g e s o f p a t t e r n s f o r m e d a t d i f f e r e n t co n ce n t r a t io n s D F G t h e e n l a r g e d v i e w o f t h e s q u a r e r e g i o n e n cl o s e d b y t h e w h i t e l i n e i n D E D 0 0 1 g L F 0 0 5 g L G 0 1 g L 第 8期 肖桂花等 烟草花叶病毒在受限空间下的自组装行为 存在的径向对流会将 T M V粒子带到接触线处沉积 使表面粗糙度增加 接触线滑移时受摩擦力 作 用和液滴的表面张力 一起构成了固定接触线的固着力 而液滴 内存在的毛细力 则使接触线去 固定 当接触线上受到的毛细力大于固着力时 接触线便会发生向液滴内移动 至下一个平衡点处再次 固定 周期性的重复该过程便可得到规整的图形 J 随接触线深入管中心 溶剂蒸发速率降低 从 而条带跨距 z 条带宽度 均逐渐增加 l 图 1 C 为降低界面能量 条带中每个 T M V粒子均将沿平 行接触线 垂直于管的长轴方向取 向 并尽量增加粒子 的界面覆盖率 1 4 j 由于 T MV为具有一定长 径比的各 向异性的刚性棒状粒子 因而可观察到当棒状粒子沉积在三相界面处时粒子 的取 向 这种取 向行为在高分子体系 剖以及各向同性的球形粒子 的受限蒸发自 组装过程中难以观察到 先前 的研究中发现离子强度 毛 细管 内壁的表面特性 以及 T MV的浓度 是影响 T MV组装 行为 的 3个主要 因素 当P T MV 0 O 1 g L时 在一定浓度的缓冲盐存在的条件下 溶液完全干燥后毛细 管内壁可以形成平行的条带结构 条带垂直于管的长轴方向 而在无盐的条件下 T M V粒子则在毛细管 内无规聚集 其原 因在于 T MV等电点为 3 4 在超纯水 中 p H 5 8 T MV表面上的净电荷为负电 因而 T M V粒子之间存在静电排斥作用 这样 一部分 T M V粒子在接触线处沉积后 其它未沉积的粒子 便会受到排斥作用 从而形成无规排列 毛细管内壁的表面特性也会导致不同的组装行为 只有毛细管 表面接触角小于 T M V的接触角 约 4 0 时才能形成条带结构 如果毛细管表面接触角大于 T M V的接 触角 则接触线不能被固定 毛细管力将 T MV粒子带到毛细管 内部沉积 无法形成条带结构 当P T M V 由0 0 l L 增加至0 1 g L时 图1 D 1 F 1 G 条带宽度和条带跨距均增加 图3 A 当 P T MV 为 0 0 1 0 0 5和 0 1 g L时中间区域 图 1 C中正方形 内区域 条带跨距 Z 分别为 7 0 1 4 3和 5 0 0 tx m 条带宽度 分别为 1 3 1 1 6和 1 9 3 tx m 条带 中的 T MV由单层堆积转化为多层堆积 条带 宽度与溶质沉积量有关 而溶质沉积量由溶剂蒸发量决定 在较低浓度下 被径向对流带到接触线处的 粒子数很少 产生较小的表面粗糙度 使得接触线受到的固着力减小 固定的时间变短 导致较小 的溶剂 蒸发量与溶质沉积量 因而形成的条带宽度较窄 当P T M V 增加至 0 5 L时 T M V粒子之间形成聚 集体 当这种聚集体在接触线处沉积时 摩擦力 显著增加 和膜的表面张力 的总和大于毛细管力 所以接触线不能去固定 在整个毛细管内壁形成连续的膜 不存在条带结构 2 2 载玻片 载玻片受限体 系 将 T M V溶液注入到由2个平行载玻片构成的二维受限体系中 随着溶剂的缓慢蒸发 T M V在载玻 片上沉积 干燥完全后 2个载玻片上均可得到规整的条带结构 且其图形呈镜像对称 载玻片上所得图 图2 载玻片一 载玻片受限体系示意图 A 和不同 T M V浓度下通过原子力显微镜观察到的形貌图 B c D F ig 2 S ch e m a t i c i l l u s t r a t i o n o f T MV s t r i p e p a t t e r n f o r ma t io n b e t w e e n t w o g l a s s s l id e s b y a s l o w d r y in g p r o ce s s A a n d A F M h e i g h t i m a g e s o f s t r ip e p a t t e r n s f o r m e d a t d i f f e r e n t co n ce n t r a t io n s o f T MV b u f f e r e d s o l u t i o n B 0 0 1 g L C 0 1 g L D 0 5 g L 应 用 化 学 第 2 8卷 形如图2 A所示 以2 条互相垂直的中心线为对称轴 随着接触线靠近中心 条带跨距和条带宽度增大 其原因在于 随着干燥的进行 受限溶液体积减小 接触线向载玻片的中心线靠近 同时蒸发速率减小 因此 2个固定线之间的距离逐渐增大 条带中每个 T M V粒子也与毛细管受限体系一样 平行于 接触线取 向 T MV缓冲溶液的浓度对条带跨距 条带宽度的影响如图 2 B 2 D所示 当P T MV 由0 0 1 g L增至 0 1 g L时 中间区域 图 2 A中正方形内区域 条带跨距 由 1 1 2 m增至 2 6 8 m 条带宽度 由1 6 m 增至 2 0 5 m 如图 3 日所示 条 带 中的 T MV 由单层堆 积转化为 多层堆积 图 2 C 浓度进一 步增至 0 5 g L 时 条带跨距增至9 1 Ix m 条带宽度进一步增至 8 3 9 m 图2 D 与上述体系所得结论相同 p g L 一 p g L 一 图3 毛细管和载玻片一 载玻片体系下 T M V浓度对 w和 z 的影响曲线 F ig 3 E f f e ct o f t h e T MV co n ce n t r a t io n o n w a n d f i n g l a s s ca p i l l a r y A a n d b e t w e e n t w o g l a s s s l i d e s B S t r i p e s a r e a l l in m i d d l e r e g io n ma e d i n t h e s q u a r e r e g io n e n cl o s e d b y t h e b l a ck l i n e i n 1 C a n d 2 A 一 一 一 图4 柱透镜一 硅片受限体系示意图 A 和通过光学显微镜 G D 及原子力显微镜 F 观察到的形貌图 F i g 4 S ch e m a t i c i l l u s t r a t i o n o f T MV s t r ip e p a t t e r n f o r ma t i o n b e t w e e n a cy l in d r ical l e n s a n d a S i s u b s t r a t e C a n d D a r e o p t i ca l mi cr o g r a p h s of s t r ip e p a t t e r n s f o rme d f r o m 0 1 g L b u ff e r e d s o l u t io n a t o u t e r mo s t r e g i o n mi d d l e r e g i o n a n d in n e rm o s t r e g i o n r e s p e ct i v e l y E A F M t o p o g r a p h y i ma g e s o f t h e s q u a r e r e g io n e n cl o s e d b y t h e w h i t e l in e in D F e n l a r g e d v i e w of t h e s q u a r e r e gi o n e n cl o s e d b y t h e w h i t e l i n e in E 第 8期 肖桂花等 烟草花叶病毒在受限空间下的自组装行为 2 3 柱透镜一 硅片受限体系 如图4 A所示 T M V浓度为0 1 g L时 干燥后硅片上可组装得到高度规整的平行线状条带 随着 接触线靠近柱透镜和硅片的接触中心 条带跨距和条带宽度逐渐减小 图4 B 4 C和4 D条带跨距分别为 2 8 4 2 0 9和 8 4 m 条带宽度为 1 7 5 9 2和0 8 m 条带的高度为 3 3 9 3 0 4和 2 9 5 n m 条带的 宽度和高度取决于干燥过程中溶质的沉积量 这又直接依赖于溶剂蒸发量 而固着力和毛细管力 即去 固着力 之间的竞争决定了溶剂蒸发量的大小 固着力是线性的 与接触线的长度成正比 随接触线向 内移动而逐渐减小 而毛细管力则是非线性的 这样便导致了非线性的溶剂蒸发量 因而所得条带存在 梯度变化 J 平行条带由多层 T M V组成 图4 E 4 F 每个 T M V粒子也平行于接触线取向 当浓度由 0 0 1 g L 增加至0 1 g L时 c 区条带跨距 由2 1 7 m增加至 2 5 9 m 条带宽度由7 0 m增加至 9 8 m 当浓度增加至0 5 g L时在外部区域形成连续的膜 这与上述两体系中浓度的影响一致 3 结论 利用受限蒸发自组装的方法 在毛细管 平行载玻片 载玻片和柱透镜一 硅片 3 种受限体系下均得到 了高度规整的T M V条带结构 且所得条带均存在梯度变化 T M V粒子的浓度对自组装结构具有显著影 响 随着浓度的升高 条带跨距和条带宽度均增加 直至形成连续的膜 T M V自组装行为的研究可用于 指导其它生物蛋 白的组装 所得到的具有取向的条带结构在生物 电子等领域具有广阔的应用前景 如 在生物领域可引导细胞的取向排列和生长 侣 在电子领域可用于改善锂电池的性能 如提高电容量 等 参考文献 1 P i ck n e t t R G B e x o n R T h e E v a p o r a t i o n o f S e s s i l e o r P e n d a n t D r o p s i n S t il l A i r J J C o l l o i d I n t e rf a ce S ci 1 9 7 7 6 1 3 3 6 3 5 0 2 Y u H Z S o o l a m a n D M R o w e A W e t a 1 E v a p o r a t i o n o f Wa t e r Mi cr o d r o p l e t s o n S e l f A s s e m b l e d Mo n o l a y e r s F r o m P in n i n g t o S h rin k in g J C h e m P h y s C h e m 2 0 0 4 5 1 0 3 5 1 0 3 8 3 H u a n g J X K i m F T a o A R e t a 1 S p o n t a n e o u s F o r m a t i o n o f N a n o p a r t icl e S t rip e P a t t e rns t h r o u g h D e w e t t i n g J N a t M a wr 2 0 0 5 4 8 9 6 9 0 0 4 D e e g a n R D B a k a j i n O D u p o n t T F e t a 1 C a p i l l a r y F l o w a s T h e C a u s e o f R i n g S t a in s f r o m D rie d L iq u id D r o p s J Na t u r e 1 9 9 7 3 8 9 8 2 7 8 2 9 5 Ma h e s h w a r i s Z h a n g L Z h u Y X e t a 1 C o u p l in g b e t w e e n P r e cip it a t io n a n d C o n t a ct L in e D y n a mi cs Mu l t ir in g S t a in s a n d S t ick S l i p Mo t i o n J P h y s R e v L e t t 2 0 0 8 1 0 0 0 4 4 5 0 3 6 S h m u y l o v i ch L S h e n A Q S t o n e H A S u r f a ce Mo r p h o l o g y o f D ryin g L a t e x F il ms M u h i p l e R i n g F o r m a t io n J L a n g m u i r 2 0 0 2 1 8 3 4 41 3 4 4 5 7 B y u n M L a s k o w s k i R L H e M e t a 1 C o n t r o l l e d E v a p o r a t iv e S e l f A s s e mb l y o f H i e r a r ch i ca l l y S t r u ct u r e d R e g i o r e g u l a r C o n j u g a t e d P o l y m e r s J Ma t t e r 2 0 0 9 5 1 5 8 3 1 5 8 6 8 x u J X i a J F H o n g S W e t a 1 S e l f A s s e mb l y o f G r a d ie n t C o n ce n t ric R in g s v i a S o l v e n t E v a p o r a t i o n f r o m a C a p il l a r y B rid g e J P h y s R e v L e t t 2 0 0 6 9 6 0 6 6 1 0 4 9 X u J X i a J F L i n Z Q E v a por a t i o n I n d u ce d S e l f A s s e m b l y o f N a n o p a r t i cl e s f r o m a S p h e r e o n F l a t G e o m e t ry J A n g e w C h e m I nt E d 2 0 0 7 4 6 1 8 6 0 1 8 6 3 1 0 L i n Y S u Z H X i a o G H e t a 1 S e l f A s s e mb l y o f V i r u s P a r t i cl e s o n F l a t S u r f a ce s v ia C o n t r o l l e d E v a por a t i o n J L a n g mu ir 2 01 1 2 7 1 3 9 8 1 4 0 2 1 1 L i n Y B a l i z a n E L e e L A e t a 1 S e l f A s s e m b l y o f R o d l ik e B io N a n o p a r t icl e s i n C a p i l l a r y T u b e s J A n g e w C h e m I n t E d 2 0 1 0 4 9 8 6 8 8 7 2 1 2 N a m K T K i m D W Y o o P J e t a 1 V i r u s E n a b l e d S y n t h e s is a n d A s s e m b l y o f N a n o w ir e s f o r L i t h i u m I o n B a t t e r y E l e ct r o d e s J S ci e n ce 2 0 0 6 3 1 2 8 8 5 8 8 8 1 3 R o n g J H Lee L A L i K e t a 1 O rie n t e d C e l l G r o w t h o n S e l f A s s e m b l e d B a ct e rio p h a g e M 1 3 T h i n F il m s J C h e m C o mmu n 2 0 0 8 4 l 5 1 8 5 5 1 8 7 应 用 化 学 第 2 8卷 1 4 H e J B N i u Z W T a n g ir a l a R e t a 1 S e l f A s s e mb l y o f T o b a cco Mo s a i c V i r u s a t O i l Wa t e r I n t e r f a ce s J L a n g mu i r 2 0 0 9 2 5 4 9 7 9 4 9 8 7 1 5 L i n Y S u Z H B a l i z a n E e t a 1 C o n t r o l l e d A s s e m b l y o f P r o t e i n i n G l a s s C a p i l l a r y J L a n g mu i r 2 0 1 0 2 6 1 2 8 0 3 1 2 8 0 9 Co n fi n e d Ev a p o r a t iv e S e l f a s s e mb l y o f To ba cco M o s a ic Vir us X I A O G u ih u a P E N G B o WA N G Q i a n S U Z h a o h u i L I N Y u a n S t a t e K e y L a b o r a t o r y o fP o l y me r P h y s ics a n d C h e mi s t r y C h a n g ch u n I n s t it u t e of A p p l i e d C h e m i s t r y C h in e s e A ca d e m y of S cie n ce s C h a n g ch u n 1 3 0 0 2 2 D e p a r t m e n t of C h e m i s t r y a n d B i o ch e mi s t r y U n iv e r s i t y o fS o u t h C a r o l i n a S C 2 9 2 0 8 U S A A b s t r a ct S e rf a s s e mb l y o f t o b a cco m o s a ic v ir u s T MV p a r t icl e s b y d r y in g T MV b u ff e r e d s o l u t io n co n s t r a in e d in a ca p i l l a r y t u b e b e t we e n t wo p a r a l l e l g l a s s s l i de s a n d in a cy l in d e r o n fi a t g e o me t ry we r e s t u d ie d r e s p e ct iv e l y O p t ica l mi cr o s co p y O M a n d a t o mi c f o r ce mi cr o s co p y A F M w e r e e mp l o y e d t o ch a r a ct e riz e t h e p a t t e ms p r o d u ce d E f f e ct o f t h e co n ce n t r a t io n o f T MV o n p a t t e r n s w a s a l s o e x p l o r e d T h e r e s u l t s s h o w t h a t h ig h 1 v o r d e r e d s t r u ct u r e s co u l d b e f a b ri ca t e d u n d e r t h e s e t h r e e co n fi n e d co n d i t io n s w h ich w e r e a t t ri b u t e d t o t h e D e r i0 d i ca l r e p e t it iv e s t i ck s l i p mo t io n o f t h e co n t a ct l in e S t ri p e s p a r a l l e l t o t h e co n t a ct l in e b u t p e r p e n d icu l a r t o t h e l o n g a x is o f t h e ca p il l a ry t u b e we r e f o r me d i n a g l a s s ca p il l a ry t u b e a f t e r e v a p o r a t io n As t h e s 0 l u t i o n f r o n t m o v e d i n w a r d b o t h l s p a n o f a s t rip e a n d w w i d t h o f a s t rip e g r a d u al l y i n cr e a s e d Wh e n d ryi n g T MV b u f f e r e d s o l u t io n t r a p p e d b e t we e n t w o g l a s s s l id e s p a t t e r n s in a t e t r a me r o u s r a d ia l s y mme t ry we r e p r o d u ce d F r o m e a ch s id e o f t h e s l i d e b o t h l a n d w i n cr e a s e d a s s t ri p e s a p p r o a ch e d t h e l o n g it u d in a l a x is t h e ce n t e r P a r a l l e l g r a d i e n t s t r a ig h t s t ri p e s we r e o b t a in e d wh e n T MV b u f f e r e d s o l u t i o n