肿瘤基因突变检测标本要求.ppt

肿瘤基因突变检测标本 病理评估合格的标本适用于EGFR基因突变检测 建议采用灵敏度高的ARMS检测方法 用于突变检测的标本 1 DacicS AdvAnatPathol2008 15 4 241 247 2 SequistLV etal ClinCancerRes2006 12 14S 4403s 4406s 3 BaiH etal JClinOncol2009 27 16 2653 2659 肿瘤基因突变检测标本类型 冰冻组织外科手术标本 最好标本 可得高质量肿瘤DNA支气管镜 穿刺活检测标本 量少 但肿瘤DNA质量仍好固定包埋组织外科手术标本 可得足量肿瘤DNA 但DNA片段化支气管镜 穿刺活检测标本 可得肿瘤DNA量少且片段化细胞学标本胸水 肺泡冲洗液和痰液标本 肿瘤细胞含量不确定 通常很少血液标本血清 血浆标本 含肿瘤DNA 但含量不稳定 DNA片段化循环血肿瘤细胞 可得较高质量肿瘤DNA 但量很少 不同类型标本处理方式 新鲜组织标本 1 迅速低温放置 如有条件可放置 80 或者液氮保存 如果没有条件可使用 20 保存 但是保存时间不宜太久 2 放入组织保存液中保存 组织保存液的能渗透0 5cm厚度的组织 因此用组织保存液保存时 建议组织不宜过大 核酸在组织保存液中37 稳定存放1天 25 稳定存放一周 4 1个月或 20 长期存放石蜡组织标本1 手术 穿刺 活检标本等放入10 中性福尔马林中固定后制作成蜡块 可保存数年之久 病理科常规处理样本方式 细胞学标本1 胸水样本 心包积液 脑脊液等 建议在收到标本后两个小时内离心收集沉淀细胞进行检测 如来不及操作可离心后将沉淀冻存至 20 保存 等使用时取出 亦可将沉淀包埋成蜡块后再切片检测 2 或者将样本直接放置4 保存过夜再离心收集沉淀 可能会一定程度影响DNA的完整性 但一般不影响实验结果 细胞学标本建议涂片后经病理诊断含有肿瘤后在进行检测 血液标本1 血液标本收集后使用EDTA抗凝 由于血浆 血清中游离核酸以及循环肿瘤细胞量极少 建议尽可能在收集标本后2小时内进行核酸提取 以避免核酸更深降解 标本通常较大 能提供足够的肿瘤组织用于检测标本可以是冰冻或福尔马林固定组织 手术标本 标本接收 固定 组织处理 石蜡包埋 切片及H E染色 组织学观察 支气管镜活检 标本较小通常是福尔马林固定 石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的ARMS检测方法 细针穿刺活检 标本较小通常是福尔马林固定 石蜡包埋处理建议采用灵敏度高的ARMS检测方法 细胞学标本 细胞学标本中通常肿瘤细胞数目较少 需要采用灵敏度高的ARMS检测方法建议有条件的病理科制备细胞蜡块 处理流程 细胞学标本经离心处理后 常规福尔马林固定 处理及石蜡包埋即可制备细胞蜡块的好处 1 便于长期保存 2 方便用于EGFR基因突变的检测及其他分子生物学标记物的检测 胸水或支气管刷片或痰液 涂片 染色 病理诊断 液基细胞学 病理诊断 细胞蜡块 切片染色 病理诊断 四 胸水标本处理流程 收集胸水50 500mL 室温静置30分钟 吸去上清 剩余5 50mL 沉淀物室温250g离心10分钟 吸去上清 低温保存 酒精固定涂片 福尔马林固定切片 福尔马林固定的标本固定要及时 离体后即时处理 1h固定液 10 中性缓冲福尔马林 新鲜配制 固定液的量 应为组织体积的10倍以上固定时间 小组织6 12h 大标本6 48h冰冻标本组织离体后立即速冻 1h 标本的质量控制 肺转移性肝细胞性肝癌 未检测到肿瘤组织 病理评估不达标样本导致EGFR突变检测呈阴性结果 小细胞性肺癌 肿瘤细胞太少 4例肺肿块切除标本EGFR突变检测呈阴性 RubbishIn RubbishOut 选择正确 合适的肺癌组织 是保证突变检测成功第一步及重要的步骤 诊断 确保肿瘤组织是非小细胞性肺癌肿瘤量 确保有足够的肿瘤组织用于突变检测尽量保证200 400个肿瘤细胞对于技术成熟的实验室 可以尝试进行 200个肿瘤细胞的标本检测5 10uM10张切片能满足突变检测需求当细胞数较少时 可以适当增加切片数 以满足检测需求肿瘤