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Agilent 1260 液相色谱培训总结我来公司已经一年多，在质量部做QC工作，做基本实验操作，主要负责液相，测定产品中含量，如维生素E、苯并芘、-胡罗卜素、毛蕊花糖苷、松果菊苷等项目，为了严格保证产品质量，必须以严谨科学的态度对待，从制备样品过程到仪器采集过程都要非常谨慎、认真，确保测定结果的准确性和真实性。以往的操作都是由有经验的操作人指导传授，再结合仪器操作规程来做，只是简单普通的做样，没有对检测结果很好的分析总结。这次有幸得到公司提供的培训机会，去成都Agilent科技大学培训中心参加了为期四天（2015年10月13日2015年10月16日）的液相色谱培训。培训期间老师讲述了从硬件、软件及维护保养各个方面的问题，让人一下充沛了不少。典型的C1260液相色谱的堆积模块方式自上而下为溶剂柜、脱机机、泵、自动进样器、柱温箱、检测器。各个模块由CAN 线进行通讯连接，使得各个模块形成一整套系统。化学工作站和仪器系统之间用LAN线连接。高性能真空脱气机：G4225A 标准真空脱气机:G1322A 四元泵内嵌式真空脱气机 一、硬件:1、Agilent 1260在线脱气机 四元泵：G1311B单元泵：G1310B 四元泵VL:G1311C二元泵：G1312B二元泵VL:G1312C真空脱气内部管路使用半透材料，允许气体分子通过，液体分子无法通过。我公司为四元泵内嵌式真空脱气机，可以避免繁琐的操作，提高仪器稳定性，便于快速进行溶剂切换，降低噪音，保证样品保留时间的稳定性。2、Agilent 1260泵 我公司为四元泵VL:G1311C型。在四元泵中，当使用盐溶液和有机溶剂时，建议将盐溶液接到四元比例阀下面的通道上（A或D），有机溶剂接到上面的通道上（B或C）。如果经常使用盐溶液，建议定期用水冲洗所有的通道以去除阀口上可能出现的盐沉淀。高性能自动进样器：G1367E标准自动进样器：G1329B 双通道自动进样器PS:G2258A微量多孔板自动进样器：G1377A制备型自动进样器：G2260A手动进样器：G1328C3、Agilent 1260进样器柱温箱SL+:G1316C 标准柱温箱：G1316A 我公司为标准自动进样器：G1329B。进样体积重复性高，进样动态范围宽，连续冲洗流路并有洗针功能，降低样品残留，可以容纳不同规格的样品瓶。灵活的进样程序编程可以进行样品前处理，使用旁路可以降低延迟体积。4、Agilent 1260柱温箱二极管阵列检测器（DAD）:G4212B/G4212A/G1315D VL/G1315C VL+可变波长检测器（VWD）:G1314F/G1314B VL/ G1314C VL+示差折光检测器（RID）:G1362A荧光检测器（FLD）:G1321B/G1321C蒸发光散射检测器（ELSD）:G4260A/G4261A我公司为标准柱温箱：G1316A 。做样品时保留时间的再现性及如果需要高于或低于室温进行分离操作时，都需要使用柱温箱，这款柱温箱大空间，可以容纳三根长色谱柱，降温非常方便，可以进行程序升温。对于经常频繁更换柱子的，建议使用柱切换阀，方便柱子的切换。我们还没有配备，在以后建议储备。5、Agilent 1260检测器我公司为二极管阵列检测器（DAD）:G1315D VL 和荧光检测器（FLD）：G1321C 。VWD检测器用于产品开发及质量控制，需要高灵敏度检测器的应用。DAD检测器用于研究及方法开发、多波长检测、色谱峰纯度检查、色谱峰确认定性。FLD检测器用于检测能产生荧光的物质，包括氨基酸、多肽、维生素、生物碱和甾类化合物等。RID检测器灵敏度不好，只适用于等度洗脱，适合于食品分析（如糖类、脂类物质）和聚合物分析。ELSD检测器适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的样品的检测。二、OpenLAB CDS：OpenLAB CDS控制面板提供了用于访问OpenLAB CDS共享服务的用户界面。功能为：1、仪器管理创建/编辑仪器和仪器访问 仪器状态概述、包括活动日志2、角色权限管理3、诊断日志软件诊断和追踪；可以集中访问由注册模块创建的所有日志文件、追踪文件等4、许可证管理对仪器模块和附加项所需的全部许可证进行管理添加或删除许可证及查看所有许可证的状态三、化学工作站1、方法的编辑和保存方法的组成：方法信息（描述性的文字信息，可以按照自己的需求来输）仪器参数/采集条件数据分析参数运行时间对照表2、谱图处理及优化3、积分参数优化化学工作站以当前色谱图为基础，自动优化积分事件表中的积分参数。如果自动积分的结果不能够满足需要，可以自行设置积分参数，重新积分。掌握熟练积分事件：斜率灵敏度、基线连到此点、谷底基线、峰面积相加、积分打开/关闭、负峰。对所有信号都适用的积分事件：拖尾峰撇去高度比、前伸峰撇去高度比、撇去峰/谷比切线撇去模式、基线校正、峰谷比4、光谱功能 光谱功能使用的前提条件是已经购买了DAD检测器及光谱分析软件，并且在“配置仪器”窗口的“选项”项下选择“3D光谱评估”。工作站的“数据分析”界面中会多出一个“光谱”菜单。光谱功能可以进行峰纯度检测。5、校正表建立，设定报告，报告设计外标法（ESTD）百分比法（percent）归一化法（Norm%）内标法（ISTD）外标百分比法（ESTD%）内标百分比法（ISTD%）样品分析时，先进行积分优化，再建立校正表，输入化合物名称、含量等，设定报告，报告设计，最后报告出所测定样品含量。在设定报告时，有六种定量方法：工作站提供的六种计算方法，根据实际的计算要求加以选择。6、UHPLC介绍UHPLC是超高效液相色谱，它是基于亚二微米填料颗粒技术的液相色谱分离技术。四、日常维护和常见色谱故障1、溶剂准备：溶剂过滤是要防止固体颗粒损伤仪器或柱头。常用0.45um的滤膜，使用色谱纯的溶剂。定期更换溶剂，避免溶剂瓶直接日照，每两天更换或过滤溶剂，用滤膜过滤溶剂去除微生物，在使用时一定要脱气。下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂避免使用：卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液高浓度的无机酸例如：硝酸或硫酸能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥在有机溶剂中一定浓度的有机酸溶液含有强络合物的溶液四氯化碳和异丙醇或四氢呋喃混合液2、保护色谱柱过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中缓冲液在适当的溶剂中保存柱子柱子在不使用时，两端密封保存注意色谱柱的pH值使用范围不要高压冲洗柱子不要高温下过长时间使用硅胶键合相3、常见色谱故障 双峰原因：柱头塌陷或柱床运动、柱前滤芯堵塞、样品量过大、进样器流路存在分叉流路 基线噪音、基线漂移原因：检测池脏、灯能量下降、流动相脏、温度不稳定 鬼峰、柱外扩散、峰扩展、拖尾峰、前伸峰、负峰原因：流动相尤其水脏、连接接头不匹配、进样体积大、色谱柱过载、溶解样品溶剂通过色谱柱时平衡破坏 压力过高、压力过低、压力波动原因：色谱柱过滤芯被污染、毛细管进样针或针座阻塞、阀失灵、密封垫老化、泵内有气泡 常规维护区域：溶剂入口、泵、检测器五、Agilent Lab Advisor 软件 Agilent Lab Advisor是独立化学工作站之外