植物组织中可溶性糖含量的测定.doc

植物组织中可溶性糖含量的测定一实验目的w 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三实验用品721型分光光度计 分析天平 研钵 恒温水浴锅 烧杯 刻度试管 大试管 活性炭 移液管 漏斗 酒精（80%） 葡萄糖标准溶液：称取已在80烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200g的标准溶液。蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。四实验步骤 1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL， 放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。3.绘制标准曲线 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80g。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。 试剂（ml) 管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度（ug/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量设V为植物样品稀释后的体积（m L） C为提取液的含糖量(g/ m L) W为植物组织鲜重(g)则得计算式如下：可溶性糖含量( CV)/(W106) 100%五注意事项1.蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心2.离心时要平衡3.在蒽酮反应前稀释样品10-20倍六实验结果及分析 实验测得吸光度值为0.175，而标准曲线如图1，标准曲线方程为y=0.3573x-0.4879,将y=0.175代入方程，得x=1.185，即C=1.185(g/ m L)。 可溶性糖含量=( CV)/(W106) 100% =（1.185