抗核抗体检测及临床意义-张瑾.ppt

抗核抗体检测及其临床意义 宁波市李惠利医院张瑾 风湿免疫性疾病诊断方法症状 体征自身抗体影像学检查病理 风湿免疫性疾病相关自身抗体 抗核抗体谱 ANAs 类风湿关节炎相关抗体 RF 抗CCP等 抗中性粒细胞胞浆抗体 ANCA 抗自身免疫性肌炎谱自身免疫性肝病相关抗体谱抗磷脂抗体谱 抗核抗体谱检测的意义 有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断抗Sm抗体是SLE的标记抗体 抗Scl 70抗体是SSc的标记抗体 抗Jo 1抗体是PM DM的标记抗体 观察疾病活动度和治疗反应抗dsDNA抗体研究发病机理抗核小体抗体 抗dsDNA抗体 基本概念ANA荧光核型ANAs中的常见抗体 抗核抗体 自身抗体 指抗自身组织 器官 细胞及其成分的抗体ANA 指抗细胞核成分 DNA RNA 蛋白质和酶 的抗体 ANA存在一个谱 ANA新概念 抗核酸 Nucleicacid 和核蛋白 Nucleoprotein 抗体总称某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富 如SSA RO Jo 1 rRNP等 ANA检测方法 IIF法 ANA滴度ANA核型 ANA滴度的意义 结缔组织病的粗筛 1 160 阳性标本还需进一步识别感染 肿瘤及5 正常人可出现低滴度阳性ANA阴性基本可以除外SLEANA滴度与疾病活动性无明确相关性 荧光显微镜下ANA的染色型别 均质型 H 核膜型 M 斑点型 S 核仁型 N 着丝点型 ACA 胞浆型 C 混合型 均质型 H 抗组蛋白抗ds ssDNA抗核小体主要出现在SLE中 均质型 H 核膜型 M 主要与抗dsDNA有关与抗原底物片固定方法和备制过程有关出现在SLE中部分与抗核包膜蛋白有关抗板层素抗gp210出现在PBC中 核膜型 M 与抗ENA成分有关抗Sm抗RNP抗SS A抗SS B出现在SLE MCTD pSS SSc PM DM等 斑点型 S 斑点型 S 与抗核仁蛋白有关抗Scl 70抗RNA多聚酶I抗PM Scl出现在SSc中 核仁型 N 核仁型 N 与抗着丝点染色质有关存在于有丝分裂期出现在SSc CREST综合征等中 着丝点型 ACA 着丝点型 ACA 与抗胞浆成分有关抗核糖体P蛋白 rRNP 出现在SLE中抗合成酶 Jo 1 PL 12 PL 7 OJ EJ抗信号识别颗粒 SRP 抗线粒体 出现在PBC中抗高尔基体抗溶酶体等等 胞浆型 C 见于PM DM 胞浆型 C ANA荧光核型小结 均质型 H 像大饼 SLE相关核膜型 M 像圈圈 SLE相关斑点型 S 像藕片 抗ENA核仁型 N 像纽扣 SD相关着丝点型 ACA 像满天星 抗ACA胞浆型 C 像空心大饼 SLEPM DMPBC相关混合型 稀释后检测有助于区分 抗核抗体谱 ANAs ANAs 抗核不溶成分抗核可溶成分 抗ENA 抗染色体DNA蛋白抗核仁抗体 抗DNA抗体抗核小体抗体抗组蛋白H1 H2A H2B H3 H4 抗Sm U1RNP SSA SSB抗Scl 70 Jo 1 PM 1抗rRNP PCNA dsDNAssDNA 抗着丝点抗体 ACA 抗5sRNA 抗dsDNA检测方法 以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法 IIF 1 5短膜虫或马疫锥虫的动基体内含有天然纯dsDNA 未经人工处理 不含组蛋白与ssDNA 抗原性纯一特异 优点 特异性好 抗dsDNA检测方法 酶联免疫吸附法 ELISA 100IU ml优点 敏感性最高缺点 过于敏感 同时可能检测到ssDNA抗体和低亲和力dsDNA抗体 而这两种致病力均不强放射免疫法 Farr 20 优点 对高亲和度DNA抗体的检测优于CL IIF缺点 具有放射性 对技术人员身体造成一定影响蛋白印迹法 WB 缺点 dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链 变成ssDNA 导致假阳性结果不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果 everythingispossible至少用两种方法做 报告结果时注明方法学 互为补充 如 IIF法 ELISA法 抗dsDNA抗体临床意义 SLE的血清特异性抗体多有致病性 IgG型 与亲和力 高 有关与LN与SLE疾病活动性相关 活动期达90 可用于SLE疾病活动期判断 药物疗效观察与SLE急性皮疹 血管炎 浆膜腔炎 白细胞减少等有关 抗组蛋白抗体 AHA 酶联免疫吸附法 X 2SD 可出现于多种结缔组织病 不具有诊断特异性SLE 50 活动期SLE可达90 2 与LN相关 与SLE疾病活动性存在一定意义的相关性药物性狼疮 DIL 90 如 异烟肼 苯妥因钠 青霉胺 雌激素等仅有AHA而无其他ANA 强烈支持DIL其他结缔组织病 23 30 如 RA PBC SSc等 核小体是真核细胞染色质的基本复制单位 由组蛋白与DNA组成 参与SLE发病机制 多克隆B细胞活化剂产生ANuA 先于其他ANA促进抗dsDNA与AHA形成参与LN的发生 抗核小体抗体 ANuA 抗核小体抗体临床意义 SLE标记性 高特异性自身抗体敏感性 58 66 优于抗dsDNA及抗Sm 特异性 98 100 与抗dsDNA相当 用于SLE的早期诊断ANuA的产生早于抗dsDNA AHA抗dsDNA阴性者有1 4 1 2ANuA阳性与LN相关 用于SLE疾病活动性监测 ANuA 抗dsDNA AHA联合检测意义 抗ENA抗体extractablenuclearantigen 可提取性核抗原成分 核酸与核蛋白 不含染色质成分功能 参与细胞内DNA复制 RNA转录 蛋白翻译合成来源 无种属差异 有组织不均一性理化特性 对温度和RNA酶敏感 U1RNP SS A 意义 抗ENA抗体是ANAs中范围最广 最为重要的一簇抗体 与疾病活动性大多无相关 抗ENA抗体检测方法 免疫双扩散法 ID 对流免疫电泳法 CIE 免疫印迹法 IBT 酶联免疫吸附法 ELISA 蛋白芯片 Proteinchip 抗Sm抗体与抗U1RNP抗体 靶抗原 位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白 Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点 抗Sm抗体与抗U1RNP抗体 抗Sm SLE的标记性抗体 是前瞻性及回顾性诊断的指标 阳性率低 SLE 30 抗U1RNP 多种CTD均可出现 与手指肿胀 雷诺现象 肌炎 指端硬化等相关 但肾炎发生率低 阳性率 40 60 其中SLE 30 40 SSc 14 pSS 12 PM DM 15 高滴度抗U1RNP 抗Sm MCTD抗U1RNP 抗Sm SLE抗U1RNP 抗Sm 实验室误差 U1RNP丢失 抗rRNP抗体 靶抗原 胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白 抗rRNP抗体 SLE的高度特异性抗体 与SLE脑病相关常在SLE活动期存在 但不会随病情的缓解立即消失 可持续1 2年后才转阴 阳性率 24 可出现在SLE早期 ANA及抗dsDNA阴性 抗SSA与抗SSB抗体 靶抗原 位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构在不同的细胞周期 在细胞内的定位不同 细胞核内和胞浆中均可存在 pSS的SS A存在于细胞核内SLE的SS A存在于胞浆中SS B主要位于细胞核内 45KD47KD48KD 抗SSA与抗SSB抗体 抗SS A 结缔组织病中出现频率最高的抗体 60 75 见于pSS 75 SLE 25 RA 10 SSc 24 PBC 20 等抗SSB 常与抗SSA相伴出现 诊断pSS更特异 见于pSS 40 SLE 10 临床意义 与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞 平滑肌受累 光过敏 血管炎 皮损 紫癜 淋巴结肿大 WBC减少有关ANA阴性的SCLE 常为抗SSA抗体阳性 抗Jo 1抗体 抗PL 1抗体 靶抗原 组氨酸tRNA合成酶胞浆中的磷酸蛋白 抗Jo 1抗体 抗PL 1抗体 PM DM的标记抗体 阳性率20 30 抗体效价与疾病活动性相关抗Jo 1抗体综合征 急性发热 对称性关节炎 技工手 雷诺现象 肌炎 相对轻 肺间质病变其他抗合成酶抗体 抗PL 7 抗PL 12 抗OJ 抗EJ 抗ScL 70抗体 靶抗原 DNA拓朴异构酶I的降解产物主要存在核仁中SSc的标记抗体 阳性率20 30 多见于dSSc 病情进展快 提示预后不良与ILD 弥漫性皮肤硬化有关 而PAH少见 主要靶抗原 着丝点蛋白 B多见于ISSc 病程缓慢 提示预后较好CREST综合征 软组织钙化 C 雷诺现象 R 食道功能障碍 E 指端硬化 S 毛细血管扩张 T 但并非标记抗体 也见于孤立性雷诺现象 SS PBC AIH等国外文献 与PAH相关 而ILD少见中国人群 未发现与PAH相关 但ILD少见 白伊娜 王迁等 中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义 中华微生物学和免疫学杂志 2011 5 452 455 抗着丝点抗体 ACA TakeHomeMassage ANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用 尤其在靶抗原阴性时 ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分抗体 如 SS A Jo 1 rRNP 线粒体等 抗核仁型抗体常与SSc有关 抗均质型或核膜型抗体常与SLE有关 TakeHomeMassage 抗dsDNA SLE特异性抗体 与LN及疾病活动度有关 至少两种方法联合检测 如 IIF法 ELISA法 抗核小体 抗组蛋白 抗dsDNA三抗体阳性者强烈提示增殖性LN 与疾病活动性相关的抗体 抗dsDNA 抗核小体 抗组蛋白 抗Jo 1 抗rRNP与预后相关的抗体 抗Scl 70 差 ACA 好 案例1 女性 34岁游走性多关节痛 雷诺现象半年RF56U L 抗CCP抗体阴性 ANA1 320胸部CT 轻度肺间质病变诊断 治疗 核仁型 UCTDILD 发展为SSc可能性大Pred CTX 案例2 男性 50岁双腕关节炎 雷诺现象半年ANA全套 阴性 抗CCP RF 阴性胸部CT 轻度肺间质病变右腕关节MRI 骨髓水肿和滑膜炎诊断 复查 ANA阴性 抗Jo 1弱阳性诊断 抗Jo 1抗体综合征Pred T 案例3 女性32岁手指关节痛2月ANA S1 80抗SSA 135抗Ro52 110三大常规正常 ESRCRP正常 补体正常 RF87IU ml 诊断 治疗 CTD SLE待随诊 重用HCQ 案例4 女性 40岁4年前多浆膜腔积液 低补体血症 ANA1 320 抗SS A 抗SS B 诊断为 系统性红斑狼疮可能性大 予 pred CTX 治疗好转后 pred10mgqod HCQ 维持 15天前新发面部皮疹 丘疹鳞屑型 脱发 尿常规 PRO阴性 尿四蛋白 轻度增高 补体下降 C350mg dlC47 4mg dl 抗dsDNA IF 1 320抗核小体 抗组蛋白 诊断 治疗 SLE SLEDAI8分