用ModFit软件分析DNA倍体和细胞周期.ppt

DNA倍体和细胞周期分析 细胞周期和DNA倍体分析的原理 1 正常细胞DNA含量稳定在2C水平 2 性细胞DNA含量为1C 3 处于增殖期至分裂期细胞由2C增加至4C 4 凋亡细胞DNA断裂 含量 2C 细胞经荧光染料 碘化丙啶 PI 染色 用流式细胞仪测定细胞DNA含量 可得到细胞周期三个时相 G0 G1 S和G2 M期 的DNA含量 可以反映细胞的增殖状态和非二倍体 异倍体 的DNA含量 Diploid 100 00 DipG1 54 38 at46 90DipG2 15 91 at91 61DipS 29 71 G2 G1 1 95 CV 5 23 G0 G1 S G2 M DNA检测的常用术语 表示流式分析中DNA含量的分辨率或精确度 通常由G0 G1峰的CV来反映 CV SD mean x100 影响CV的因素主要包括两方面 仪器因素 如液流 光路 机器调试等 和样本制备及染色过程对标本的人为影响 1 变异系数 CoefficientofVariation CV DI指的是肿瘤样本G0 G1峰的平均道数与人正常二倍体G0 G1峰的平均道数之间的比值 DI为1意味着二倍体 2c 一般正常范围为0 9 1 1 倍体 Ploidy 原指染色体数目 流式中用来描述总的DNA含量 二倍体细胞有正常细胞的DNA含量但不除外染色体异常 DI为1 9 2 1的细胞为四倍体 CV为5 时 在二倍体和四倍体区域之外的统称异倍体 2 DNA指数 DNAindex DI 和倍体 Ploidy DNA检测的常用术语 结果分析 CellQuest WinMDI等软件均可以进行分析 但需要手工进行参数统计和计算 推荐使用ModFit分析软件 分析如下 1 打开软件 2 在FL2 W FL2 A散点图中设定单个细胞门 R1 去除聚集细胞 必要时可以设两个门 3 在FL2 A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图注 该软件可以自动分析 也可手动分析 可以分析凋亡 异倍体 各期比例等 结果均自动计算 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 ModFit分析 Fileanalyzed qq 003Dateanalyzed 3 Jun 2009Model 1DA0A DSFAnalysistype ManualanalysisDiploid 100 00 DipG1 63 02 at44 61DipG2 18 55 at86 71DipS 18 44 G2 G1 1 94 CV 6 12TotalS Phase 18 44 TotalB A D 5 45 Apoptosis 15 11 Mean 19 05Debris 6 04 Aggregates 1 72 Modeledevents 2775Allcycleevents 2166Cycleeventsperchannel 50RCS 6 238 ModFit分析 ModFit分析 重要参数 DI DNA指数 判断倍体数 标本G0 G1期细胞峰的平均荧光道数 正常二倍体细胞G0 G1期细胞峰的平均荧光道数 PI 增殖指数 表示细胞的增殖活性 S G2M G0 G1 S G2M 100 SPF S期细胞比率 表示细胞的增殖活性 S G0 G1 S G2M 100 倍体和细胞周期分析 发现DNA异倍体 二倍体峰DI 1 1或2 1或15 的S期细胞 并伴有G0 G1峰的CV 9 提示为肿瘤或增生旺盛的病变 如无明显异倍体 但G0 G1峰的CV增大 并伴有 10 15 的S期细胞和一个突出的4倍体峰 诊断为可疑肿瘤或增生旺盛的病变 发现癌前病变 协助肿瘤早期诊断在肿瘤的诊断 预后判断和治疗中的作用在指导肿瘤化疗中的作用 临床意义 乳腺癌DNA异倍体患者生存率 乳腺癌肿瘤细胞异倍体患者长期生存率显著下降 临床病例 Diploid 46 75 DipG1 97 54 at46 06DipG2 0 58 at92 12DipS 1 88 G2 G1 2 00 CV 2 26Aneuploid1 47 55 An1G1 93 05 at49 83An1G2 0 00 at99 67An1S 6 95 G2 G1 2 00 CV 2 13DI 1 08Aneuploid2 5 70 An2G1 94 97 at55 72An2G2 5 03 at103 44An2S 0 00 G2 G1 1 86 CV 4 52DI 1 21 AL骨髓 Diploid 64 50 DipG1 92 45 at49 24DipG2 2 30 at98 48DipS 5 26 G2 G1 2 00 CV 3 21Aneuploid1 35 50 An1G1 97 69 at58 53An1G2 0 00 at123 89An1S 2 31 G2 G1 2 12 CV 3 14DI 1 19TotalAneuploidS Phase 2 31 TotalS Phase 4 21 TotalB A D 0 35 Debris 1 14 Aggregates 0 00 Modeledevents 3567Allcycleevents 3526Cycleeventsperchannel 47RCS 2 356 MM骨髓 宫颈脱落细胞 Diploid 97 61 DipG1 97 74 at49 78DipG2 0 02 at99 57DipS 2 25 G2 G1 2 00 CV 6 49Aneuploid1 2 39 An1G1 84 90 at75 79An1G2 15 10 at109 99An1S 0 00