细胞生物学习题与实验.doc

细胞生物学综合测试题（一）一、名词解释（每词3分，共30分）1、细胞2、分子杂交3、核体4、初级溶酶体5、自由扩散6、桥粒7、膜骨架8、奢侈基因9、常染色质10、基本颗粒（F1因子）二、填空（每空0.5分，共15分）1、原生质体是指（） 。2、细胞的三要素是指（） 、（） 和（） 。3、被动运输可分为两类，即（） 和（）。4、流动镶嵌模型的三大特点是（），（）和（） 。5、目前发现最小最简单的细胞是（），直径只有（） 。6、根据是否与消化物作用溶酶体可区分为（） 、（） 两种形式。7、原核细胞和真核细胞的核糖体的沉降系数分别是（） 和（） 。8、细胞内的能量转化细胞器是指（）和（）。9、细胞学说的内容包括（） 、（） 和（）。10、荧光显微镜以（）为光源，电子显微镜则以（） 为光源。11、细胞有两种膜结构具有分拣作用，一个是（）另一个是（）。12、弹性蛋白的肽链之间通过（）相互交连形成网络。13、用（）技术可以在电镜下观察膜蛋白的不对称分布。14、在转移酶I和T因子的作用下，催化P位上肽酰tRNA的（）与处在A位上氨酰基tRNA的（） 之间形成肽键。15、染色质根据功能状态不同可分为（） 和（） 两种。三、简答（每小题5分，共25分）1、糙面内质网功能。2、真核细胞的主要特点是什么？3、染色体DNA的三个功能元件是什么？4、细胞核的组成部分及功能。5、为什么说线粒体、叶绿体是半自主性细胞器？四、论述（每小题10分，共30分）1、试述动物细胞的连接方式2、试述蛋白质糖基化的生理作用。3、试述细胞生物学的主要研究内容。细胞生物学综合测试题（二）一、名词解释（每词3分，共30分）1、纺锤体2、无丝分裂3、肌动蛋白 4、外植体5、微细胞6、愈伤组织7、传递细胞，转移细胞8、类核、拟核9、细胞核移植10、体外受精二、是非判断（每小题1分，共10分）1、酶标抗体法是利用酶与底物的特异性反应来检测底物在组织细胞中的存在部位。2、真核细胞的mRNA转录产物在细胞核中合成后，再转移到细胞质中进行加工改造，才能成为成熟的mRNA。3、用秋水仙素处理正在进行胞质分离的动物细胞，结果导致分裂停止。4、中心粒普遍存在于真核细胞中，而原核细胞中没有。5、编码组蛋白、非组蛋白、胶原蛋白的基因属于奢侈基因。6、细胞冻存及复苏的基本原则是快冻慢融。7、着丝点是供动粒微管附着的部位，此处的染色质是异染色质，而不是常染色质。8、光反应过程是在叶绿体的内膜上进行的，而暗反应是在叶绿体基质中进行的。9、大分子物质及颗粒通常以膜泡方式运输，而小分子及离子往往以穿膜方式运输。10、培养细胞的生长过程中，细胞系和单个细胞所经历的过程是相同的。三、填空（每空0.5分，共15分）1、根据结构与功能，内质网可分为两种基本类型，即_和_。2、胚培养分为_和_ 。3、核小体的核心是由 _ 、 _、 _ 、_4种蛋白组成8聚体和环绕约长为_bp的DNA组成。4、联会复合体在_期形成，在_ 期解体。5、目前发现三种不同类型的有被小泡是_ 、_ 、_ 。6、YAC（酵母人工染色体）的构建成功说明：一个有功能的染色体至少有_、 _、_三个不可缺少的部分。7、根据分化阶段的不同，干细胞分为_ 和_ ，按分化潜能的大小，可将干细胞分为三种类型，_、_和_ 。8、细胞连接广泛存在于多细胞生物体，动物的细胞连接按功能分为_ 、_ 、_ 等三大类，而相邻植物细胞是通过_ 连接的。9、细胞表面受体分属三大家族，即_ 、_和_ 。10、第一个发现活细胞有机体的科学家是_ 。四、简答（每小题5分，共25分）1、植物原生质体融合的主要方法及各自的优缺点。2、核仁的超微结构及功能？3、简述培养细胞生长的主要特点。4、细胞骨架包括哪些结构？其主要功能是什么？5、凋亡细胞的形态学特征和生化特征？五、论述（每小题10分，共20分）1、试述细胞工程的主要技术领域。2、试从细胞的蛋白质生物合成，阐述细胞是一个统一整体？细胞生物学综合测试题（三）一、用汉语解释下列名词（每词3分，共30分）1、mitotic apparatus 2、secondary constrction 3、molecular switches4、PCD（programmed cell death）5、ATP synthetase6、MTOC（microtubule organizing center）7、NLS（nuclearlocolization singnal）8、Hayflick limitation9、contractile ring10、DNA ladders二、填空（每空0.5分，共18分）1、组成细胞的最基础的生物小分子是_ 、_ 、_ 、_ ，它们构成了_ 、_、_和v等重要的生物大分子。2、细胞遗传学的核心是_。3、生物膜的基本结构特征是_和_。4、真核细胞中，质子泵可以分为三种_、_和_。5、信号分子是由_产生的能够被受体识别的各种类型的大、小分子物质。6、_和_是NO的生成细胞，NO的生成由_催化，以_为底物，以_作为电子供体，生成_ 和L-瓜氨酸。7、从进化论的观点，细胞学说的创立解决了_这样一个核心问题。8、磷脂酰肌醇信号通路中产生两个第二信使的前体物质是_。9、核仁在超微结构上主要分为_、_、_。10、肌原纤维收缩的基本单位是_。11、叶绿体的发育是由_分化而来。12、着丝点结构域由内向外依次可分为_、_、_和_。13、与微管、微丝不同，中间纤维的分布具有严格的_。14、内质网中BiP蛋白的功能是_。15、2004年的诺贝尔生理学或医学奖奖给了_（ 国家名）科学家理查德阿克塞尔（Richard Axel）和琳达巴克（Linda B. Buck）, 以表彰两人在_方面作出的杰出贡献。三、简答（每小题4分，共32分）1、简述你对E.B. Wilson “一切生命的关键问题都要到细胞中寻找”观点的理解。2、原核细胞与真核细胞的差别之一是后者有细胞器，那么真核生物细胞器结构的出现有什么优点？（至少2点）3、简述钠钾泵的工作原理及其生物学意义。4、简要说明由G蛋白偶联的受体介导的信号通路的主要特点。5、简述含信号肽的蛋白质在细胞质中合成后到内质网所需的主要结构成分及过程。6、简述核被膜的主要功能。7、简述细胞凋亡的过程及其特点。8、线粒体、叶绿体的起源的内共生起源学说的基本内容。四、论述（20分）用什么实验方法可以证明NLS的存在。细胞生物学综合测试题（四）一、请用汉语解释下列名词（每词3分，共30分）1、cell line2、loss cell 3、kinesins 4、lead peptide 5、NOR（nucleolar organizing region） 6、telomere 7、PCC（premature chromosome condensation） 8、lampbrush chromosome： 9、tread milling 10、check point二、选择（每小题3分，共18分）1、In which tissue does tight junction play a major role? ( )A、stomach and kidneys B、smooth muscleC、heart muscle D、intestinal epithelial tissue2、The following stages occur in prophase I. What is the first stage? ( )A、diakinesis Diplotene B、leptotene C、pachytene D、zygotene3、In the following components ,Which first binds to the ER for protein synthesis? ( )A、Growing polypeptide B、Ribosome subunits C、Signal sequence D、SRP4、The ability of the cell membrane to allow hydrophilic molecules pass into a cell is determined by ( )A、peripheral membrane proteins B、integral membrane proteinsC、peripheral membrane carbohydrates D、peripheral membrane lipids5、Co-transport of nutrients across the intestinal cell membranes is an active process that can move glucose against a concentration gradient. The energy requiring step for co-transport is( )A、The Na+K+ATPase that pumps Na+ from the cell into the lumen of the intestineB、The permease that allows glucose and Na+ into the cell requires ATPC、The permease that pumps glucose from the cell into the blood requires ATPD、The Na+K+ATPase that pumps Na+ from the cell into the blood, maintaining low Na+ levels in the cell6、The transport rate of a substance into a cell is drastically reduced when the formation of ATP is blocked. The transport system must be a form of ( )A、active transport B、facilitated diffusion C、simple diffusion D、both active transport and facilitated diffusion三、简答（每小题4分，共32分）1、细胞学说及其意义。2、简述三种质子泵的基本特点。3、试述溶酶体酶在高尔基复合体中被准确分拣的M6P途径。4、细胞通过哪些途径使受体失活，对刺激产生适应？5、简述NO的作用机理。6、举出两种人工细胞同步化的方法，并说明优缺点。（任意2种方法）7、穿膜运输一般有哪几种方式，其各自的主要特点是什么？ 8、细胞外基质的成分主要有哪几类？其各自最主要的生物学功能是什么？四、实验设计（20分）细胞凋亡是一个主动的由基因决定的自动结束生命的过程，受到严格的遗传机制的调控，它与细胞坏死有截然不同的细胞学现象。试设计1-2个实验方案来检测凋亡细胞，要求写明实验原理、主要实验仪器、主要方法步骤。小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法，识别小鼠染色体的数目及特点【基本原理】骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。【实验用品】1器材：解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等；2试剂 0.1%秋水仙素溶液、Carnoys固定液（甲醇：冰醋酸3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。 3材料：小鼠【方法与步骤】1前处理 取材前34 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射26g，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4g / g注射，需注射浓度为0.1 的秋水仙素溶液0.2 ml ）。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。 2取骨髓细胞 处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心510 min，弃去上清液。3低渗 根据骨髓细胞液的多少，加0.075 mol / L的 KCI液56 ml，在37水浴箱中或室温下低渗2030 min。低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。4预固定 低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoys固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。然后以1000 r / min 离心8 min。5固定 弃去上清液，加56 ml Carnoys液，轻轻吹打细胞，静置固定20 min。离心弃去上清液，再加56 ml Carnoys液，固定20 min。 6制备细胞悬液 离心弃去上清液，再加少许新鲜Carnoys固定液，用吸管将固定后的细胞吹散，并反复吹打混匀，制成浓集的细胞悬浊液。 7准备载玻片 滴片前12 h，将洁净的载玻片放在04冰水中，使其表面附有一层水膜。这样在滴片时，细胞悬液遇到载玻片上的冷水，染色体会迅速分散开来。 滴片法制备染色体标本（引自王宗仁等）8滴片 取出预冷的载玻片，将其倾斜约30放置。吸取细胞悬液，从距离载玻片40 cm 以上高度处滴至载玻片上23滴；滴片后立即用嘴或洗耳球对准滴片处轻微吹气；也可用镊子夹住载玻片、在酒精灯火焰上迅速过几下（见图），这样都有助于染色体分散和展开。9干燥 使滴片在室温下自然干燥，或在酒精灯火焰上烤干，也可用吹风机冷风吹干。 10染色 待滴片充分干燥后，用pH 6.8的磷酸盐缓冲液稀释的Giemsa染液（Giemsa原液：缓冲液1：10）染色30 min。然后自来水冲洗，空气干燥。镜检。酸性磷酸酶的显示（金属沉淀法）【目的要求】1熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作步骤2观察酸性磷酸酶在细胞中的分布【基本原理】酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗透性，底物可以渗入，酶活力被显示。ACP在酸性条件下（pH4.7）可使作用液中的底物-甘油磷酸钠的磷酸根解离出来，进而与溶液中硝酸铅结合形成磷酸铅沉淀，因其是难溶解的无色沉淀物，需要与黄色的硫化铵作用，生成棕黑色PbS沉淀而被显示出来。 -甘油磷酸钠甘油+PO3- PO4 +Pb（NO3）2Pb2（PO4）2 Pb2（PO4）4 +（NH4）2SPbS【实验用品】1器材：注射器、解剖用具、恒温水浴锅、载玻片、盖玻片2试剂：（1）3%淀粉溶液（2）ACP作用液： 1）-甘油磷酸钠140mg溶于25ml蒸馏水中。 2）醋酸缓冲液 12ml 3）重蒸水 90ml 4）3.3%硝酸铅 10ml 配制时，先将醋酸缓冲液与蒸馏水混合，然后分成两等份，分别加入硝酸铅和-甘油磷酸钠。然后将两液体混合，调pH4.74.8,存冰箱中备用.3材料：小鼠腹腔液涂片【方法与步骤】1免疫动物：实验前46天用无菌注射器取已灭菌的3%淀粉溶液1ml注射于小鼠腹腔内，每天一次。2颈椎脱臼处死小鼠，剖开腹腔，吸取腹腔液制备涂片。3入37作用液30min。4蒸馏水漂洗。510%甲醛钙溶液后固定5min。6蒸馏水洗。72%硫化胺溶液23min。8蒸馏水漂洗，脱水，透明，树胶封固，镜检。对照实验：对照组的作用液中不加-甘油磷酸钠，而以蒸馏水代替；或入作用液前先用高温（50）处理30min，使酶失去活性，作好标记，然后同时进行上述实验。小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验【目的要求】1了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理2熟悉细胞吞噬作用的基本过程【基本原理】 细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，变向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。【实验用品】 1器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2试剂：（1）0.85%生理盐水、(2）阿氏（Alsever）血液保存液柠檬酸钠 0.8g柠檬酸 0.5g葡萄糖 18.7g氯化钠 4.2g加蒸馏水至1000ml溶解后用滤纸过滤，分装，8-10磅灭菌20分钟，置冰箱保存。（3）4%台盼兰染液（用生理盐水配制）（4）可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。3材料：（1）小白鼠（2）1%鸡红细胞悬液自鸡翼下静脉取血1ml，注入含灭菌阿氏液4ml的瓶中，混匀置于冰箱保存备用。使用时用生理盐水洗涤，离心，倾去上清，如此反复洗涤三次，最后用生理盐水配制成1%的鸡红细胞悬液。【方法与步骤】 1实验前3天，水浴融化淀粉溶液，加入适量4%的台盼兰染液，使呈蓝色。每天给小鼠腹腔注射可溶性淀粉1ml，以诱导腹腔内产生较多的巨噬细胞。 小鼠腹腔注射给药的方法：先用右手抓住鼠尾提起，稍稍旋转后，放在解剖盘上，用左手的拇指和食指捏住小鼠两耳及头颈皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手的无名指和小指按住尾巴及后肢，即可在腹部后1/2处的一侧注射，进针勿过深，不超过1cm为宜，进针后将药物缓慢推入，稍停顿一会拔出针头，轻按小鼠腹部使药物分散。 2第一次注射24小时后，每只小鼠再腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml。随即轻轻按摩小鼠腹部。 3注射鸡红细胞30min后，用颈椎脱臼法处死小鼠。 4将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，用吸管吸取腹腔液，滴一滴于载玻片上，用盖玻片涂开后，盖上即可观察。 5高倍镜下分辨鸡红细胞和巨噬细胞：鸡红细胞是一些淡黄色、椭圆形及圆形有核的细胞；而数量较多、较大的圆形或不规则的细胞，其表面具有许多似刺毛状的小突起（伪足），有的细胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入含台盼兰的淀粉形成的吞噬泡），即为巨噬细胞。 6计算吞噬百分数和吞噬指数： 吞噬百分数=100个巨噬细胞中吞噬了鸡红细胞的细胞数/100 吞噬指数=100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100实验记录：记录巨噬细胞的吞噬情况糖原的显示PAS反应（periodic acid schiff reaction）【目的要求】 通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。【基本原理】糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（CHO），游离醛基与Schiff 试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能显示的糖类主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要确定此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其他多糖。【实验用品】1器材：石蜡切片机，盖玻片、载玻片、染色缸等2试剂（1） 0.5%过碘酸溶液（Periodic Acid Solution） （2）希夫试剂（Schiffs Reagent）见实验3材料：甘薯块根，马铃薯块茎和小鼠肝石蜡切片 【方法与步骤】1切片染色（1）小鼠肝或马铃薯石蜡切片在二甲苯中脱腊10分钟。（2）用梯度酒精按照从高到低的的顺序复水，每级酒精停留2-5分钟，直至蒸馏水。 （3）入0.5%过碘酸溶液作用515分钟。 （4）蒸馏水冲洗。（5）入Schiff 试剂作用1530分钟。（6）新配制的亚硫酸溶液洗3次，每次12分钟，以除去多余的无色品红。（7）自来水冲洗直到切片变红色。（8）用95%和100%酒精脱水。 二甲苯透明，封片，镜检。对照实验：淀粉酶水解对照法。实验结果：糖原、粘多糖、粘蛋白均显PAS阳性红色；糖原对照实验PAS反应为阴性。Feulgen反应【目的要求】学习Feulgen反应的原理及操作步骤，了解细胞中DNA的分布。【基本原理】Feulgen反应是系列反应，包括DNA水解、显色两个主要反应步骤。DNA经弱酸（1mol/L HCL）60oC条件下水解，DNA分子中嘌呤碱基和与脱氧核糖间的糖苷键断裂，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiffs试剂（无色品红亚硫酸溶液）反应，形成紫红色的化合物，因此，细胞内含有DNA的部位会呈现紫红色阳性反应。孚尔根反应对组织中的DNA高度专一。组织中除DNA外还有多糖、RNA和其它自由醛基