Bio-Rad_PTC200 PCR仪使用与维护SOP.doc

Bio-Rad_PTC200 PCR仪使用与维护SOPFZ-YQ-50.001.03起 草：刘阳 日期：2007.10.24审 核：邹强 日 期：2007.11.07批 准：王伦安日期：2007.11.15生效日期：2007.12.01签 字：修订号生效日期制定（变更）原因及目的：012006.12.01开始按SOP管理022007.12.01补充主要性能参数032010.11.10补充基本操作抄送分子生物学 1 份组织病理学 份细胞培养室 份 天然产物 份SPF级动物 份精密仪器室 份准 备 室 份技术档案室 1 份Bio-Rad_PTC200 PCR仪使用与维护SOP1 适用范围 本SOP适用于Bio-Rad_PTC200 PCR仪的使用与维护保养。2 职责2.1 操作人员：认真执行本SOP的内容，并作好相关记录。2.2 设备管理员：培训、指导操作人员正确执行本SOP，同时需按本SOP对设备进行定期维护保养并 作好相应记录。3 主要性能参数 样品基座为96孔0.2ml。 带温度梯度功能。 半导体控温，温度范围：-5105；温度变化速率为：3/秒；控温精度为0.3，孔间温差为0.4。 温度梯度变化范围：124 热盖可调高度和压力，保证可靠的无油操作。4 主要应用范围 应用于常规PCR扩增与梯度PCR扩增。5 Front View Alpha unit, lid closed: Alpha单元闭合盖 Thumbwheel: 压轮 Control panel: 控制面板 Air exhoust vents: 出风口 Air intake vents: 进风口 图1 Bio-Rad_PTC200 PCR仪前视图6 Back View Alpha unit: Alpha单元 Alpha unit handle: Alpha单元把手 Power switch: 电源开关 Power cord jack: 电源线插座 RS-232 port: RS-232接口 Parallel printer port: 并行打印机接口 IEEE-488 port: IEEE-488接口 Air exhoust vents: 出风口 Air intake vents: 进风口 图2 Bio-Rad_PTC200 PCR仪后视图7 Control panel图3 Bio-Rad_PTC200 PCR仪控制面板 Block status lights: 基座选择指示灯。 Instant incubation key: 恒温孵育键。进入恒温设置程序。 Power light: 电源指示灯。打开电源开关，指示灯变红。 Block key: 基座选择键。用于双头基座切换。 LCD window: 液晶显示屏。 Left and right selection keys: 左右选择键。用于移动光标和在运行程序时查看时间或循环信息。 Proceed key: 确定键。接受当前选择进入下一步，在运行程序时跳过当前步骤进入下一步。 Cancel key: 取消键。取消当前选择，放回上一步或结束正在运行的程序。8 基本操作8.1 开机8.1.1 打开电源开关（图2），电源指示灯变红。系统进入自检，显示屏显示如图4。 图4 系统自检 图5 主菜单8.1.2 系统自检完后，进入主菜单，显示屏显示如图5。 系统自检大约持续1分钟，请耐心等待，切勿在系统自检时操作控制面板。8.1.3 主菜单 Run: 运行1个已保存的程序。 Enter: 建立1个新程序。 List: 显示已保存的程序。 Edit: 编辑已保存的程序。 Files: 进入文件夹管理程序。 Setup: 进入系统设置。8.2 操作功能8.2.1 RUN-运行1个已保存的程序8.2.1.1 主菜单中选择Run, 按Proceed.屏幕显示存储中所有的文件夹，包括菜单和用户自己创建的文件夹。PTC-200 .8.2.1.2 选择程序所在的文件夹后，按Proceed进入。显示该文件夹里的程序，移动光标选中程序，按Proceed确认。8.2.1.3 选择样品容器的类型：先选择所使用容器的类型(PCR管还是PCR板)，按Proceed确认。RUN：2-STEPVessel Type: TUBES Plate.8.2.1.4 输入样品的反应体积（在最后一行显示），输入样品的反应体积（微升），按Proceed确认。如果样品上有油或蜡，输入的样品的体积应包含油或蜡的体积。RUN：2-STEPVessel Type: TUBESVolume(l): 10. 注意：反应体积不应少于10微升。做反应体积为5微升的样品时，请确定管子的密封盖是否盖紧。8.2.1.5 选择是否使用热盖，选择Yes 或 No，按Proceed，程序开始进入运行状态。8.2.1.6 运行过程中的其他功能： 转换运行时间与主菜单的显示：按Block可使屏幕在实时显示和主菜单之间转换； 程序运行结束：当程序完成时，仪器会发出长蜂鸣音提示操作者，同时显示运行时间； 若有必要也会显示一些出错信息，按Proceed 可回到主菜单； 程序跳步步骤：当程序运行时，按Proceed 可以直接运行程序的下一步； 暂停运行：按Pause 可暂时中止运行程序。这时在显示屏的右下角的运行时间显示会被“Pause”字符代替，再次按Pause或Proceed键后，程序会继续运行，否则样品的温度停留在显示的温度。在温度未达到设定的温度之前，如果按Pause键，仪器仍继续升温或降温，在温度达到设定值后，程序暂停。 停止运行程序：按Stop 或 Cancel 键可停止运行程序。停止后，仪器显示程序的全部运行时间，再按Proceed可返回主菜单。 注意：关机不会结束程序运行。仪器会假设程序因断电停止运行并且在开机后自动继续运行该程序。（长达24小时到7天的断电保护功能）。断电保持功能：如果PTC-200在运行程序过程中断电，系统自动保持该程序的运行步骤（24小时到7天）。当电源恢复后，仪器自动从断电时的停止点开始运行程序，按Proceed后，系统会立即开始运行程序。8.2.2 ENTER-建立1个新程序8.2.2.1 进入编写状态，从主菜单选择Enter，按Proceed确认；8.2.2.2 给程序命名：程序名最多可由包含8个不同的字符，可以是字母（罗马或希腊）、数字、标点符号或日本字母。通过选择键 ， ，选用各种字母、字符来组成程序名，选中字符后按Proceed确认输入,则光标向右移动，输入下一字符。在最后一个字符输入后连续2次按Proceed，确认程序命名结束。若输入的程序名与仪器内原有的程序重名，则出现“Name In Use”，表示此程序名已被使用，可按Proceed重新输入；Enter: Name:AO.8.2.2.3 选择温度控制方法：输入程序名后，系统会提示操作者选择一种温度控制方法，如下：Enter: CUSTOM1Control method: _CALCULATEDBlock Probe Name:ARecovered at 20.2O. CALCULATED：计算控制，为使样品温度达到设定温度，通过综合考虑样品管类型、样品体积等参数，估算出模块应达到的温度而进行调节。这种方法避免了温度传递时产生的误差给实验结果带来的负面影响。 Block：模块控制，直接控制模块温度，而不是样品温度。 Probe：探针温度，仪器通过探针测得的温度调节模块温度。通常，探针控制需要小心使用。8.2.2.4 输入程序步骤：选择温度控制方法后，显示输入菜单：Enter: CUSTOM1Step 1: _TEMP Gradient Ramp End Name:ARecovered at 20.2O. Temp：温度语句，输入需要运行的温度。 Gradient：梯度语句，输入梯度PCR运行的温度范围。 Ramp：输入斜率，改变升降温速率。一般出厂默认执行最快变温速率，若要调整只能降低温度变化率。 End：结束程序。8.2.2.5 设置温度（范围为-5至105.0）与时间：从菜单中选择Temp，按Proceed。开始第一步的温度设置，用键盘输入目标温度，按Proceed确认，光标移至下一行，输入温度持续时间。如图：键入温度为92，时间为30s。Enter: CUSTOM1 1=92.0Time: 30O.Enter: CUSTOM1 1=Temp C: _O. 注意：如果输入的持续时间为0，仪器会在设定的温度上无限期的保持运行，也不会进入下一个程序。同样应避免编写温度持续时间只有几秒的程序，这会引起模块或机身过热，导致在显示屏上显示 “HS Overheating”或“PS Overheating”出错信息，如果模块或机身内温度超出允许的最大温度值时仪器甚至会自动关机。8.2.2.6 按Proceed确认后，要求用户选择下一步骤：Enter: CUSTOM1 1= 92.0 for 0:30OK? _YES No OptionO. Yes：确认完成，进入程序下一步骤的设置； No：重新输入目标温度和持续时间； Option：显示特性菜单。进入特性菜单可实现用户对特殊实验的特殊编程。8.2.2.7 设置循环步骤：从第二步开始，程序可使用循环语句。在输入菜单中选择GoTo。屏幕显示：Enter: CUSTOM15=GoToGoTo step: _O.正在编写的步骤循环返回到第几步Enter: CUSTOM13=GoTo 2Addtnl cycles: _O.8.2.2.8 按Proceed确认后，提示输入还需增加循环多少次，例如需循环10次，则输入9。按Proceed确认。8.2.2.9 设置结束步骤：从主菜单选择End，结束程序设置。Enter: CUSTOM14=EndOK? _YES NoO.8.2.2.10 选择要储存程序的文件夹，按Proceed确认后，显示返回主菜单。 Save program in: O.8.2.3 List-查看程序内容8.2.3.1 从主菜单中选择List并按Proceed进入。共有两个选项：显示程序内容和显示温度梯度。8.2.3.2 选择查看程序，光标移至Programes前，按Proceed键。选中要显示的程序,按Proceed键进入，连续按Proceed键可查看程序每一步后面的内容，包括各种特性。按Proceed将程序进行到最后一步或按Cancel键可返回到主菜单。 注意: 查看程序时，不能对该程序进行编辑。8.2.4 Edit-编辑已储存的程序：使用主菜单中的Edit 可以：修改程序步骤中的个别值；增加新的步骤；删除步骤；增加温度和斜率特性。8.2.4.1 进入编辑状态：从主菜单中选择Edit，按 Proceed进入编辑画面，此时屏幕显示内存中所有的文件夹，用光标键选择待编辑程序所在的文件夹，按Proceed打开文件夹，光标选定文件，按Proceed打开文件即可。8.2.4.2 编辑程序：若要改变温度控制方法，直接将光标移到相应的选项前，按Proceed确认；若要改变其他参数，移动光标到任意要改动的位置，用键盘输入新值，并按Proceed确认。如需要取消修改，按Cancel，恢复原来的设置。8.2.4.3 增加或删除步骤：将光标移至相应步骤的编号下，按Proceed后会显示相应的编辑菜单：Edit: CUSTOM12= 63.0 for 1:00_EDIT InsertStep: Option Delete Edit：显示上一级菜单，移动光标可进行修改。 Insert：在该步骤之前增加一个步骤，从编辑菜单中选择Insert，按Proceed键。 Delete：删除该步骤，从编辑菜单中选择Delete, 然后按Proceed。该步骤就被删除，屏幕显示删除后的程序。 使用Delete删除程序步骤时，要小心谨慎。一旦步骤被删除，就不能被恢复。 Option： 如果该步骤是温度或斜率步骤，允许增加特性。8.2.4.4 增加程序特性：从编辑菜单选择Option，按Proceed进入，如前章所述进行设置，完成后，选择Yes，按Proceed确认。8.2.4.5 储存编辑后的程序：用Select 右键前进至程序的最后一步，按Proceed，在显示屏的最后一行就会显示允许结束编辑程序：Edit: CUSTOM12=EndStep: _END Insert End 储存编辑后的程序并显示主菜单。结束程序编辑。 Insert 在结束之前允许增加其他步骤。8.2.4.6 取消修改，恢复原值：用Select 键将光标移至任何一步的编号下，按Cancel后，选择Yes，按Proceed确认。所有的修改都被取消，返回主菜单。Edit: CUSTOM1Cancel changes? _YES No8.2.5 Files-文件夹的使用 PTC-200能储存包括 文件夹在内的11个文件夹。如果没有设置其他文件夹，所有程序都默认地储存在 文件夹内。8.2.5.1 设置文件夹：从文件菜单中选择Folder，按Proceed显示，输入文件夹的名字，确认，则该文件夹设置成功，返回主菜单。New Folder:Name: A8.2.5.2 删除文件夹：首先清空待删除文件夹中的所有程序(删除或移走)，然后从文件菜单中选择Delete ，用光标选中要删除的文件夹并按Proceed，选择Yes 并按Proceed。文件夹将被删除，再次显示主菜单。要取消删除操作，按Cancel键，或选择No并按Proceed。Delete: Delete empty folder? YES No 只有空文件夹可被删除。Copy CUSTOM1 to:_ 8.2.5.3 拷贝程序：内存中的程序可被复制，复制件可储存在任何一个文件夹内并可以重新命名。首先从文件菜单中选择Copy，按Proceed确定。选中源文件，按Proceed确认。然后屏幕提示用户选择目的文件夹，如：选择文件夹，按Proceed，然后对复制件重新命名：Copy CUSTOM1 to:New name: A输入文件名后，按Proceed确认，源程序就被拷贝至指定的文件夹中，显示返回到主菜单。8.2.5.4 重新命名：要给程序重新命名，先从文件菜单中选择Rename 并按Proceed进入。光标选择要重命名的程序，按Proceed确认，输入新的名字后，按Proceed确认，程序就以新的名字储存。Rename: CUSTOM1New name: A8.2.5.5 移动程序：可在文件夹之间移动程序，从文件菜单中选择Move，按Proceed。选择要移动的程序并按Proceed，选择目的文件夹，按Proceed确认,程序被移至新的文件夹中，显示回到主菜单。8.2.5.6 删除程序：从文件菜单中选择Delete并按Proceed。选择要删除的程序，按Proceed后会显示确认对话窗，选择Yes , 并按Proceed，程序被删除，显示主菜单；选择No，并按Proceed或按Cancel，取消操作。Delete: CU