动物实验技术.ppt

动物实验基本技术 一 实验动物标记编号的方法 一 染色法 1 单色涂染法 在每组动物不超过l0只的情况下适用 实验动物 大鼠 小鼠 常用染色剂 3 5 苦味酸溶液 可染成黄色 第一节小鼠 方法步骤 1 涂染顺序 从左到右 从上到下 2 左前肢为l号 左侧腹部2号 左后肢3号 3 头部4号 背部5号 尾根部6号 4 右前肢7号 右侧腹部8号 右后肢9号 5 不作染色标记为10号 2 双色涂染法 在每组动物不超过100只的情况下适用 实验动物 大鼠 小鼠 常用染色剂 1 3 5 苦味酸溶液 可染成黄色 作为 个 位数 2 0 5 中性红或品红溶液 可染成红色 作为 十 位数 方法步骤 1 用两种颜色同时进行染色标记 2 用苦味酸 黄色 染色标记作为个位数 个位数的染色标记方法同单色涂染法 3 用品红 红色 染色标记作为十位数 4 左前肢为10号 左侧腹部20号 左后肢30号 头部40号 背部50号 尾根部60号 右前肢70号 右侧腹部80号 右后肢90号第100号不作染色标记 二 小鼠的抓取保定 器材 小鼠饲养盒 面罩1套 方法步骤 1 用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提起 放在饲养合的面罩上 2 用左手拇指和食指迅速 准确地捏住小鼠的两耳后 颈背部的皮肤 将小鼠提起 3 翻转左手掌 以左手掌心和中指夹小鼠背部的皮肤 使小鼠整个呈一条直线 4 用左手无名指压住小鼠背部的皮肤 小指压住小鼠的尾巴根部 5 松开捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指 三 小鼠的给药方法 一 灌胃给药原理 将药液直接注入小鼠的胃内 器材 小鼠灌胃针1支 注射器1支 小鼠饲养盒 面罩1套 生理盐水 烧杯 方法步骤 1 将灌胃针连接在注射器上 吸入一定量的药液 2 左手捉持小鼠 使小鼠头部向上 3 右手将灌胃针头尖端从小鼠口角处进针放进小鼠口咽部 顺咽后壁轻轻往下推 灌胃针会顺着食管滑入小鼠的胃内 灌胃针插入约3cm 4 用右手食指将针栓慢慢往下压 将注射器中的药液灌入小鼠的胃中 剂量 约0 5ml 10g体重 注意 在灌胃过程中 避免误插入气管 二 注射给药1 皮下注射给药 原理 将药液注入皮下结缔组织 经毛细血管 淋巴管吸收进入血液循环 器材 1m1注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 注射部位 选小鼠项背部的皮下 2 常规消毒注射部位的皮肤 用注射针头取一锐角角度刺入皮下 3 将针头轻轻向左右摆动 易摆动则表示已刺入皮下 再轻轻抽吸 如无回血 可缓慢地将药物注入皮下 注射量 0 01ml 0 03ml g体重 2 肌肉注射给药原理 将药液注入动物的肌肉组织 经毛细血管吸收进入血液循环 器材 1ml注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 操作时1人先将小鼠捉持保定好 2 另1人用左手抓住小鼠的1条后肢 右手拿注射器 常规消毒注射部位的皮肤 3 将注射器针头在动物后肢大腿外侧肌肉丰富处呈60度角迅速刺入后注入药液 注射量 0 01m1 g体重 3 静脉注射给药原理 将药液注入小鼠的尾静脉 器材 1m1注射器1支 生理盐水 烧杯 金属笼或小鼠固定器 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 将小鼠放在金属笼或小鼠固定器中 通过金属笼或小鼠固定器的孔拉出小鼠尾巴 2 用左手捏住小鼠尾巴中部 用75 酒精棉球反复擦拭尾部 3 注射时 以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧 用食指从下面托起尾巴 以无名指夹住尾巴的末梢 4 右手持4号针头的注射器 使针头与静脉平行 小于30度角 5 从小鼠尾巴下1 4处进针 仔细观察 如果无阻力 无白色皮丘出现 说明已刺入血管 即可注入药物 6 拔出针头后 用干棉球压住注射部位约l 2min 防止出血 注射量 0 005m1 0 01m1 g体重 4 腹腔注射给药原理 将药液注入小鼠的腹腔 器材 注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 用左手将小鼠捉持保定 使鼠腹部朝上 鼠头略低于尾部 2 右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺 3 针头刺入皮下后进针3mm左右 接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌 穿过腹肌进入腹膜腔 当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失 4 固定针头 保持针尖不动 回抽针栓 如无回血 肠液和尿液后即可注射药液 注射量 0 01m1 0 02m1 g体重 三 小鼠的采血 摘除眼球采血法 原理 将小鼠的眼球摘除后取血液的方法 器材 眼科弯镊 试管 方法步骤 1 左手抓住小鼠颈部皮肤 轻压在实验台上 取侧卧位 2 左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压 使眼球突出 3 用眼科弯镊夹去眼球 将鼠倒立 用试管接住流出的血液 4 采血完毕立即用纱布压迫止血 采血量 每次0 6 1 0ml 次 一 大鼠的抓取保定 器材 大鼠饲养盒 面罩1套 方法步骤 1 首先戴好防护手套 2 用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起 放在大鼠饲养盒的面罩上 3 左手顺势按 卡在大鼠躯干背部 稍加压力向头颈部滑行 4 以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤 其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤 完成抓取保定 第二节大鼠 二 大鼠的给药方法 一 灌胃给药原理 将药液直接注入大鼠的胃内 器材 大鼠灌胃针1支 注射器1支 大鼠饲养盒 面罩l套 生理盐水 烧杯 方法步骤 1 将灌胃针连接在注射器上 吸入一定量的药液 2 左手捉持保定大鼠 右手将灌胃针头尖端放进大鼠口咽部 顺咽后壁轻轻往下推 灌胃针会顺着食管滑入大鼠的胃内 灌胃针插入约5cm 3 用右手食指将针栓慢慢往下压 将注射器中的生理盐水灌入大鼠的胃中 剂量 0 01 0 02ml g体重 注意 在灌胃过程中 避免误插入气管 二 注射给药1 皮下注射给药原理 将药液注入皮下结缔组织 经毛细血管 淋巴管吸收进入血液循环 器材 5ml注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 注射部位 选大鼠的项背部的皮下 2 常规消毒注射部位的皮肤 用注射针头取一锐角角度刺入皮下 3 将针头轻轻向左右摆动 易摆动则表示已刺入皮下 再轻轻抽吸 如无回血 可缓慢地将药物注入皮下 注射量 0 01ml g体重 2 肌肉注射给药原理 将药液注入动物的肌肉组织 经毛细血管吸收进入血液循环 器材 1m1注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 操作时1人先将大鼠捉持保定好 2 另1人用左手抓住大鼠的1条后肢 右手拿注射器 常规消毒注射部位的皮肤 3 将注射器针头在动物后肢大腿内侧肌肉丰富处呈90度角 迅速刺入后注入药液 注射量 0 01m1 g 3 静脉注射给药原理 将药液注入大鼠的尾静脉 器材 1ml注射器1支 生理盐水 烧杯 金属笼或大鼠固定器 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 将大鼠放在金属笼或大鼠固定器中 通过金属笼或鼠夹的孔拉出大鼠尾巴 2 用左手捏住大鼠尾巴中部 用75 酒精棉球反复擦拭尾部 3 注射时 以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧 用食指从下面托起尾巴 4 右手持4号针头的注射器 使针头与静脉平行 小于30度角 5 从大鼠尾巴下1 4或1 3处进针 仔细观察 如果无阻力 无白色皮丘出现 说明已刺入血管 即可注入药物 注射量 0 005 0 01ml g体重 4 腹腔注射给药原理 将药液注入大鼠的腹腔 器材 注射器1支 生理盐水 烧杯 方法步骤 1 用左手将大鼠捉持保定 使鼠腹部朝上 鼠头略低于尾部 2 右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺 3 针头刺入皮下后进针3mm左右 接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌 穿过腹肌进入腹膜腔 当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失 4 固定针头 保持针尖不动 回抽针栓 如无回血 肠液和尿液后即可注射药液 注射量 0 01 0 02m1 g体重 三 大鼠的麻醉原理 是使用非挥发性麻醉药对动物进行全麻术的方法 器材 3 戊巴比妥钠 注射器 方法步骤 1 用左手将大鼠捉持保定 使鼠腹部朝上 鼠头略低于尾部 2 右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺 3 针头刺入皮下后进针3mm左右 接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌 穿过腹肌进入腹膜腔 当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失 4 固定针头 保持针尖不动 回抽针栓 如无回血 肠液和尿液后即可注射药液 四 大鼠的采血眼眶后静脉丛 窦 取血 器材 毛细管 玻璃或塑料均可 1 肝素溶液 干燥皿 乙醚 试管 干棉球 方法步骤 1 先将毛细管浸泡在1 肝素溶液中数分钟 然后取出干燥备用 2 将大鼠进行麻醉 使大鼠保持侧卧位 3 左手拇指 食指抓住两鼠耳之间的颈部头皮 并轻轻向下压迫颈部两侧 致大鼠静脉血回流障碍 眼球外突 眶后静脉丛充血 4 右手持毛细管由大鼠的内毗部插入结膜 使毛细管与眶壁平行地向喉头方向推进 深度约3 5mm 5 轻轻旋动毛细管 使其穿破静脉丛 让血流顺毛细管流出 采血量 0 4 0 6ml 次 一 豚鼠的抓取保定 器材 大鼠饲养盒 带面罩l套 第三节豚鼠 方法步骤 1 先用左手轻轻扣 按住豚鼠背部 2 顺势抓紧其肩胛上方皮肤 拇指和食指环箍其颈部 3 用右手轻轻托住其臀部 即可将豚鼠抓取保定 二 豚鼠的给药方法 一 灌胃给药原理 将药液直接注入豚鼠的胃内 器材 大鼠灌胃针1支 注射器1支 生理盐水 烧杯 方法步骤 1 将灌胃针连接在注射器上 吸入一定量的生理盐水 2 左手捉持保定豚鼠 右手将灌胃针头尖端放进豚鼠口咽部 顺咽后壁轻轻往下推 灌胃针会顺着食管滑入大鼠的胃内 灌胃针插入约5cm 3 用右手食指将针栓慢慢往下压 将注射器中的生理盐水注入豚鼠的胃中 剂量 1 5ml 注意 在灌胃过程中 避免误插入气管 二 注射给药1 皮下注射给药原理 将药液注入皮下结缔组织 经毛细血管 淋巴管吸收进入血液循环 器材 1m1注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 注射部位 选豚鼠的项背部的皮下 2 常规消毒注射部位的皮肤 注射针头取一锐角角度刺入皮下 3 将针头轻轻向左右摆动 易摆动则表示已刺入皮下 再轻轻抽吸 如无回血 可缓慢地将药物注入皮下 注射量 0 01ml g 2 肌肉注射给药原理 将药液注入动物的肌肉组织 经毛细血管吸收进入血液循环 器材 1m1注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 操作时1人先将豚鼠捉持保定好 2 另1人用左手抓住豚鼠的1条后肢 右手拿注射器 常规消毒注射部位 3 将注射器针头在动物后肢大腿外侧肌肉丰富处呈60度角 迅速刺入后注入药液 注射量 0 01ml g 一 兔的抓取保定 一 方法1 步骤 1 用右手把兔的两耳拿在手心并抓住颈后部皮肤 把兔提起 2 然后用左手托住兔的臀部 第四节兔 二 方法2 器材 兔保定架1个 步骤 1 打开保定架的上盖 抓取并将兔放进架内 迅速关上保定架的上盖 2 右手抓住兔耳朵将头部拉过保定架的卡栓 将兔的脖子保定 3 如果兔挣扎 可用手在它的背上轻轻抚摸 使其安静 二 兔的给药方法 一 灌胃给药原理 将药液直接注入兔的胃内 器材 兔开口器 14号胃管 注射器1支 生理盐水 烧杯 石蜡油 步骤 1 将兔放进保定架内 助手用手轻轻压住兔的背部 避免兔的挣扎 2 灌胃者用在手拇指和中指挤压兔两颊 将下颌挤开使兔被动张口 3 右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定 4 用泡在石蜡油中的胃管 经开口器的孔插入 向前推进约15cm 可达胃内 5 在插管时应将胃管另一端泡在水中确认没有冒气泡 即可用注射器经胃管注入药液 灌胃量 80 150ml 只 次 注意 在灌胃过程中 避免误插入气管 三 兔耳缘静脉或兔耳中央动脉穿刺 用于兔的给药 抽血 原理 穿刺兔的耳缘静脉或耳中央动脉 器材 兔保定架 注射器1支 生理盐水 烧杯 酒精 碘酒 棉球 方法步骤 1 将兔放在保定架内保定 2 酒精消毒并揉搓血管 使兔的耳缘静脉或耳中央动脉充盈 3 用左手食指和中指夹住兔的耳缘静脉或耳中央动脉近心端 拇指和小指夹住耳郭边缘部分 无名指和小指放在耳郭下作垫 4 右手拿注射器 针尖的斜面朝上 将针头插入血管 放松对静脉近心端的压迫 缓慢把地药液注射进血管 或将血液抽出来 注射或采血量 5一10ml 一 注意事项 1 应遵循安乐死的原则 2 要保证实验人员的安全 3 要确认实验动物已经死亡 4 要注意环保 避免污染环境 还要妥善处理好尸体 第五节实验动物处死方法 二 处死方法 一 颈椎脱臼处死法1 是将实验动物的颈椎脱臼 断离脊髓致死 为大 小鼠最常用的处死方法 2 用右手抓住鼠尾根部并将其提起 放在鼠笼盖或其他粗糙面上 3 用左手拇指 食指用力向下按压鼠头及颈部 4 右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方 造成颈椎脱臼 脊髓与脑干断离 动物立即死亡 二 断头处死法 此法适用于鼠类等较小的实验动物 三 击打头盖骨处死法 主要用于豚鼠和兔的处死 四 放血处死法 此法适用于各种实验动物 详见教材 五 空气栓塞处死法 处死兔 猫 犬常用此法 详见教材 六 过量麻醉处死法 此法多用于处死豚鼠和家兔 详见教材 七 二氧化碳吸入法 让实验动物吸入大量C02等气体而中毒死亡 一 基本要求 一 实验动物背景资料记录1 实验动物来源 种类 年龄 性别 原编号 体重 临床症状等 2 剖检时间 地点 麻醉方法 时间 麻醉者 处死方法 解剖者 记录者 温度 湿度 3 其它指标 动物剖杀前禁食 不禁水 时间一致 为12h 第六节实验动物的病理剖检 二 病理取材基本要求1 病理检查应分层次进行 先进行一般外观观察 然后剖检观察 再进行光镜详细检查 2 通常选择正常与病变交界处组织 即包括病变本身及病变周围组织 3 对照组动物相同器官取材时 选材部位应尽量一致 4 肉眼看不到明显病变时 各试验组选取标本位置应一致 5 所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构 如肾应包括皮质 髓质和肾盂 6 体积大和分叶的器官 应视不同组织选取多个部位 小器官可整体取材并固定 如淋巴结 扁桃体 甲状腺等 7 胃肠标本应将内容物冲洗掉 以免内容物影响组织的固定 产生自溶 8 所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性 不宜过厚或过薄 一般厚约3 5mm 大小为1 5 2cm 9 切取组织时不要挤压 使用锋利刀具 少用剪刀