ANA的检测及临床应用件.pptx

ANA检测及临床应用 1 抗核抗体的定义 传统定义 针对细胞核成分自身抗体的总称 广义定义 针对细胞内所有抗原成分的自身抗体总称 对ANA的理解不再局限于核成分 而是抗核酸和抗核蛋白抗体的总称 ANA的把抗原分布 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞分裂周期蛋白等 ENA 抗可提取核抗原 包括SSA SSB Scl 70 Jo 1 Sm RNP Sm六种靶抗原 2 抗核抗体的检测方法 间接荧光免疫法具有完整的抗原谱 细胞核和细胞浆 检测ANA的金标准 具有很高的特异性跟敏感性基质组合 HEp 2细胞 组织切片免疫印迹法先将混合性抗原做凝胶电泳 分离开不同的区带 然后把区带转印到硝酸纤维膜上 加入待检血清 最后用相应的酶标抗体使相应的抗原带显色酶联免疫法 3 间接免疫荧光法检测原理 4 抗核抗体荧光模型及分类 ANA 细胞浆 细胞核 核均质 核膜型 斑点型 着丝点型核仁型 胞浆颗粒型 胞浆纤维型 分裂期细胞型 dsDNA 组蛋白和核小体Gp210核糖核蛋白 Sm nRNP SSA SSBCENP BSel 70 RNA多聚酶等线粒体 Jo 1 核糖体等波形蛋白纺锤体 中间体 中心粒等 5 核均质型 间期细胞呈均匀荧光分裂期细胞浓缩染色体荧光增强靶抗原 ds DNA 核小体 组蛋白 6 核膜型 Hep 2 间期细胞呈现均匀的荧光核周增强 分裂期细胞浓缩染色体阴性肝片 干细胞呈特征性环状荧光靶抗原 gp210 7 斑点型 间期细胞呈粗 细 颗粒样荧光 核仁阴性 分裂期细胞浓缩染色体阴性 染色体周围呈颗粒样荧光靶抗原 nRNP Sm 粗颗粒 细颗粒 8 着丝点和核点型 着丝点 核点型 着丝点型间期细胞内出现大小数目相同 均匀分布的点状荧光 分裂期细胞浓缩染色体出现浓缩点状荧光靶抗原CENP B核点型间期细胞出现大小数目 强度不均的点状荧光 分裂期细胞浓缩染色体阴性靶抗原 Sp100 9 核仁型 间期细胞核仁阳性 分裂期细胞浓缩染色体阴性靶抗原 Sel 70 RNA多聚酶 10 线粒体型 Hep 2 细胞浆内粗颗粒样荧光肝细胞 呈颗粒样荧光整个视野呈细沙状荧光靶抗原 线粒体 11 ds DNA的检测 核 鞭毛体 动基体 以绿蝇短膜虫为基质 其动基体有丰富的天然ds DNA 一般多以核和动基体同时阳性出现 可在镜下绿色荧光的大小点 12 ANA检测结果判读 一般超过95 正常人群ANA水平的数值定义为ANA阳性 对大多数实验室而言 通常认为IFANA滴度 1 80为阳性 ANA阳性可见于多种临床情况 除了自身免疫性风湿病 还可见于各种原因引起的肝硬化 自身免疫性肝病 肿瘤以及少数正常人尤其是老年人 但在正常人种通常IFANA滴度较低 ANA阳性的意义需结合临床资料综合分析 ANA阳性并不能确立某种临床诊断 反之 ANA阴性也不能排除自身免疫性病 13 IFANA作为总抗体筛查实验 应该结合抗体确认试验为临床诊断起到更好的指导作用 必要时还应提供抗体效价 14 抗核抗体的应用 抗U1 rRNP抗体 高滴度的抗U1 rRNP抗体是混合性结缔组织病 MCTD 夏普综合征 的标志 阳性率95 100 抗体滴度与疾病活动性相关 在30 40 的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1 rRNP抗体 但几乎总伴有抗Sm抗体 抗Sm抗体 系统性红斑狼疮的特异性抗体 与抗dsDNA抗体一起 是系统性红斑狼疮的诊断性指标 但阳性率为30 左右 抗SS A抗体 与各类自身免疫性疾病相关 最常见于干燥综合征 40 80 也见于系统性红斑狼疮 30 40 和原发性胆汁性肝硬化 20 中 偶见于慢性活动性肝炎 此外 在100 的新生儿红斑狼疮中抗SS A抗体阳性 该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞 抗SS B抗体 几乎仅见于干燥综合征 40 80 和系统性红斑狼疮 10 20 的女性患者中 男女比例为1 29 在干燥综合征中抗SS A抗体和抗SS B抗体常同时出现 抗Scl 70抗体 见于25 75 的进行性系统性硬化症 弥散型 患者中 因实验方法和疾病活动性而异 Scl 硬化症 在局限型硬化症中不出现 抗PM Scl抗体 常见于多肌炎与硬化症的重叠综合征中 50 的该抗体阳性患者为肌炎与硬化症的重叠综合征 抗PM Scl抗体也可见于单独的多肌炎患者中 阳性率为8 在弥散型硬化症中的阳性率为2 5 抗Jo 1抗体 见于多肌炎 阳性率为25 35 常与合并肺间质纤维化相关 15 抗着丝点抗体 与局限型进行性系统性硬化症 CREST综合征 钙质沉着 Raynaud s病 食管功能障碍 指硬皮病 远端血管扩张 有关 阳性率为70 90 在原发性胆汁性肝硬化患者中也可检测到该抗体 阳性率10 30 还可出现于雷诺氏综合征中 抗PCNA抗体 PCNA为增殖细胞核抗原 其表达与细胞周期有关 抗PCNA抗体为系统性红斑狼疮的特异性抗体 但阳性率仅为3 有文献报道 抗PCNA抗体可能与系统性红斑狼疮患者发展为弥散性增殖性肾小球肾炎有关 抗dsDNA抗体 对系统性红斑狼疮具有很高的特异性 除抗Sm抗体外 抗dsDNA抗体也可作为该病的一个血清学标志 阳性率为40 90 并且抗dsDNA抗体滴度与疾病的活动度相关 可用于疗效监控 抗核小体抗体 在系统性红斑狼疮患者血清中的阳性率为50 95 特异性几乎为100 核小体是细胞染色体的功能亚单位 由DNA和组蛋白以特殊的方式组成 抗核小体抗体比抗dsDNA抗体 抗组蛋白抗体更早出现于系统性红斑狼疮的早期 在系统性红斑狼疮的诱导和致病中有重要作用 临床资料显示 有15 19 的抗dsDNA抗体阴性的SLE患者中抗核小体抗体阳性 因此联合检测抗dsDNA及抗核小体抗体可提高SLE血清学检出率 抗组蛋白抗体 抗一种或几种组蛋白抗体或抗H2A H2B复合物抗体在药物 普鲁卡因胺 肼酞嗪以及其它药物 诱导的红斑狼疮中比较常见 阳性率为95 另外 在30 70 的系统性红斑狼疮和15 50 的类风湿性关节炎患者中也可检出抗组蛋白抗体 抗核糖体P蛋白抗体 是系统性红斑狼疮的特异性标志 阳性率为5 15 普遍认为ARPA的滴度与SLE的活动性相关 还与SLE合并中枢神经系统症状 肾脏或肝脏受累相关 抗M2抗体 高滴度的抗线粒体2型抗体是原发性胆汁性肝硬化的标志 阳性率为85 95 另外 在其它慢性肝脏疾病 30 和进行性系统性硬化症 7 25 中也可检出抗M2抗体 但滴度较低 抗Ro 52抗体 SS A抗原是