针灸手法的实验数据的分析毕业论文.doc

目录一、研究背景1二、研究思路和意义2三、针灸综述3四、细胞电生理基础5五、实验模型8结束语12参考文献13摘要 针灸是中医的特色治疗手法，探索针灸的功能及其机理，对临床诊断及研究有重要的指导价值。但是，目前中医针灸的研究现状多为统计学意义上的比较，缺乏规律性、系统性的归纳和量化。本文首先对针灸实验方法进行论述，然后应用单因素方差分析和双因素方差分析对实验数据作统计分析，进行数据挖掘工作，得出实验数据的分析结果。【关键词】 针灸 实验数据 方差分析针灸手法的实验数据的分析 生物与生命科学作为二十一世纪的前沿学科，已经取得了大量的研究成果，并受到越来越多的研究者的关注。中医针灸学源远流长，文献浩如烟海，它具有独特思维方法和丰富的经验，是我国中医科学的最大特色和优势，尤其是对立统一、动态平衡、整体观念、辨证施治、经络与脑穴、脏腑相关等学术理论更为精辟，几千年以来指导着临床实践，显示出它的强大生命力，为中华民族的繁衍昌盛作出了巨大的贡献，同时也对世界医学进步和发展产生了重要的影响。近几年来，由于现代科学技术的突飞猛进，针灸学理论、经络、腧穴、脏腑相关及作用效应、机理和本质的不断被揭示，针灸治疗范围进一步扩大，疗效进一步提高，针灸医学已进入到现代科学化的新领域，已引起各国医学家极大的关注和兴趣。时代在发展，科技在进步，这些均影响了针灸的学术进步和发展。但由于历史的原因，针灸学术研究的进展仍然相当缓慢；又由于传统针灸学是经历2000多年临床实践的归纳、演绎、推理、总结而形成的科学理论和经验，它不可避免受历史思想的影响，再加上社会历史条件和科学技术的限制，许多有关的理论和概念在科学内涵和外延不够明确，对理论阐述、疾病认识、诊断及治疗、操作和疗效的定性、定量都比较笼统，很难排除主观的印象，这些均影响了针灸学术的进步和发展，由于通常缺乏对机理的量化说明，较少从系统的角度描述各种生理过程，也无法保证实验结果的一致性与唯一性。因此迫切需要将其他学科中已经成熟的理论和方法引入针灸学的研究，通过跨学科的综合知识去探索各种效应机理1。从研究方法上讲，这种学科间的交叉并不是单的理论套用，而是需要做到各学科间的融合与集成，在实验现象与生物模型的基础上，建立相应的数学模型，运用跨学科的理论进行分析，获得的结果必须还要具有量化意义。一、研究背景 针灸学古老而优秀，是中医理论的核心组成部分，至少对300种疾病有良好疗效。20世纪中叶开始，我国的学者们在针刺镇痛、戒毒、醒脑开窍等方面取得了理论或技术方面意义重大的突破性成果。同时，我国现代化针灸研究堂而皇之地跻身于国际学术舞台，掀起了全球“针灸热”的潮流。针刺是体表的一种刺激疗法，它产生电学和化学两种信息，长期以来大量的医学相关论文是对针刺所产生的化学信号进行研究，且大多属于实验性描述性的研究。针刺产生的电信号是以在时间和空间上序列组合的编码形式发挥着对机体功能活动进行整合与调控的。神经细胞受到光、机、电、化学信号刺激时，在细胞膜上即形成动作电位，将此电位称之为针刺电信号2。（一）据研究结果表明针灸具有 1针刺诱导产生镇痛物质，针刺镇痛机制等而产生镇痛作用； 2改善外周、远距离或局部循环的作用； 3缓解肌肉紧张作用； 4影响植物神经系统； 5激活免疫功能。 数字信号处理是一种交叉性的学科。它的理论基础涉及众多的学科，但其成果又为这些学科的发展起着重要的促进作用；它的应用范围广泛，如通信、航天航空、雷达、地震勘测，以及生物医学等领域。因此，它已经成为理论与实践并重，在高新技术领域中占有重要地位的新兴科学3。 （二）针灸电信号是一种随机信号，而随机信号处理是数字信号处理的一个重要组成部分， 处理针灸电信号的主要方法有： 1概率统计方法； 2功率谱估计方法； 3非线性动力学即混沌分析方法； 4时频分析技术信号的时频分析技术。 本文从临床实验数据挖掘，以及应用小波理论分析技术提取针灸信号的特征信息两个方面着手，所得结果为生物机理层面上的研究提供条件。二、研究思路和意义 大量研究资料已证实，针灸对机体所产生的效应及主要作用，主要是针刺镇痛作用、促机体防卫免疫作用和脏腑、器官功能的调整作用。针灸作为一种系统性的学科，探索针灸对各系统生理调节功能的最大极限及其机理，对临床应用及机理研究有重要的指导价值。 最近几年，中医的针灸疗法中也越来越多采用电针来代替传统的银针，以针灸电信号的特征量化来衡量电针的治病原理和疗效，无论是对针灸研究进一步的发展，还是对实际医疗手段的发展都是有举足轻重的意义4。 所以将数字信号处理技术引入传统的针灸技法研究，为进一步的生物机理层面上的分析提供帮助，为传统中医学发展注入新的活力，这正是本课题的研究意义所在。基于以上情况，本文首先是应用多种数学统计方法对实验数据进行分析，进行数据挖掘工作；然后利用小波变换多尺度分析的特点，对时间序列进行离散多尺度变换，然后在此基础上引入一些新的分析方法对不同的针灸手法电信号进行分析。三、针灸综述（一）针灸简介 针灸学古老而优秀，是我国古代的一大发明，是目前在国际上处于领先地位的学科，它至少对300种疾病有良好疗效5。20世纪中叶开始，上海的张香桐、北京的韩济生、天津的石学敏分别在针刺镇痛、戒毒、醒脑开窍等方面取得了理论或技术方面意义重大的突破性成果。同时，我国现代化针灸研究也跻身于国际学术舞台，掀起了全球“针灸热”的潮流。现在针灸学已成为世界公认的体表穴位刺激的代表，是人类健康体系的重要组成部分。越来越多的国家开始接受并使用针灸，针灸学的教育已成为许多国家医学院校的基本课程，针灸的科学研究已成为科学界关注的热点之一。 针灸最主要的作用就是针刺镇痛和针刺麻醉。针刺镇痛(AcupunctuAnalgesia)是指用针刺的方法防止和治疗疼痛的一种方法。它是在传统中医针刺治疗疼痛的基础上，结合现代针刺麻醉临床实践发展起来的一种有效的临床治疗技术，对这一技术的作用机制的研究，称为针刺镇痛原理研究。针刺麻醉 (Acupuncture Anesthesia)是指用针刺止痛效应预防手术中的疼痛及减轻生理功能紊乱的一种方法，由于其作用类似于现代医学的麻醉，故称针刺麻醉。研究证实针刺是通过调节内源性痛觉调制系统而起作用的6。 天津中医学院附院院长石学敏教授近年提出了治疗中风病的“醒脑开窍法的学术观点。这种观点不仅在立法、治则和针刺手法上改变了历代针灸治疗中风所沿用的以阳经穴为主，阴经穴为辅的学术思想和治疗方法，而且针对这一学术观点的提出进行了大量的实验研究和临床验证，从而使这一学术思想成为目前指导临床治疗中风病最为普遍的理论。“醒脑开窍法”的基本内容体现在五个方面在病机上重新认识了中风病；在立法处方上建立了“醒脑开窍”之方法；在治疗上以开窍启闭、改善大脑的生理机能为主；在处方上以阴经穴为主，选用主穴水沟、内关、三阴交。辅穴：极泉、尺泽、委中、合谷；在手法操作上具体量化了手法的各项指数。 北京的韩济生教授常年从事针刺镇痛的研究，1972年以来从中枢神经化学角度系统研究针刺镇痛原理。发现针刺可动员体内的镇痛系统，释放出阿片肽单胺类神经递质等，发挥镇痛作用；不同频率的电针可释放出不同种类阿片肽；针效的优劣取决于体内镇痛和抗镇痛两种力量的消长。研制“韩氏穴位神经刺激仪(HANS)”用于镇痛和治疗海洛因成瘾有良效。（二）针灸疗法有以下优点： 1治疗范围广：不论内、外科或妇、儿科以及五官科等疾病，都可用针灸疗法来治疗。 2见效快：运用针灸疗法，治疗一切病症如对胃痛、腹痛、腰痛、头痛以及关节痛等往往针到痛止，比吃药来得快。 中医理论认为，针灸的基本作用在于疏通经络、调和阴阳、扶正驱邪，其实质是通过针灸信息调整肌体的各种功能。业已证明信息调控是针灸效应的基本特征。著名物理学家薛定锷曾说“生命的基本问题是信息问题”，从作用原理上讲针灸效应的本质是信息调控问题，所以必须从信号和信息层面去研究。（三）电针刺激的应用 现代针灸随着现代科学技术的发展，近年来形成了一些新的针灸体系，如头针、耳针等。西方近20年来已把电的技术广泛地应用于针刺，如用于一般性医疗和外科领域。从针灸实践总体来看，即使使用电刺激作为辅助手段，“得气”仍是获得治疗效果的关键7。 电针是通过电针机将微弱的电流输送到穴位上，使人体局部的神经、血管、肌肉兴奋或抑制，从而调节功能平衡，达到消炎、止痛、解痉、活血、消肿等功效。最常用的电刺激方法是经皮神经电刺激(TENS)。通常所有的电针仪都带有示波器，所用的波形有矩形波和峰波。关于不同频率产生的作用已做了大量研究，认为频率在5Hz以下对疼痛最为有效，而对中风或其他神经损伤性疾病的治疗，则尽可能地选用高频刺激。电针用于手术性操作则使用两个刺激器，分别选用不同的频率。针刺中涉及许多神经介质，包括神经肽类，单氨基酸类，儿茶酚胺类以及乙酰胆碱和其他非阿片物质。Pomeranz认为低频电针产生的镇痛是受内啡肽调制的，而高频电针则至少部分地受5-羟色胺能介质调制。有学者曾对电针刺激时脑脊液中的阿片物质的活性进行研究，治疗前后分别采集脑脊液，结果表明电针后阿片样物质水平升高。大村惠昭还将电针用于特定经络的检测以及用于经络与脏器关系的研究。在仔细设计的对照研究中，采用单个穴位刺激(合谷)研究了电针的镇痛作用。结果表明，电针刺激后30分钟痛阈提高27%。除了镇痛以外，电针还被广泛地应用于许多领域，如用于中风的治疗，创伤或外周神经疾病导致的神经损伤、各种成瘾等。在妇科领域，电针用于妇科手术后，在手术伤口缝合后即刻、麻醉效果持续时即给予电针或不给任何处理。结果发现接受电针者在手术后最初2小时其杜冷丁的用量只占不给电针者用量的一半。 电针用于戒除成瘾方面的研究也有很多。不同频率的电针刺激产生的作用也有所不同。Patterson认为，麻醉剂和镇静剂成瘾的最佳刺激频率为75300Hz，苯丙胺类成瘾的最佳刺激频率为12Hz，尼古丁则为510Hz.酒精成瘾的刺激频率也在低频范围。一般来说，成瘾的程度越重，所需的每次治疗时间则越长。对于癫痫患者，电针头针穴位可使癫痫症状减轻，并可使发作间隔时间延长。电针用于颈背痛的研究较为常见，尽管有时并不使用针刺而使用电极，仍有多数患者取得很好的效果。 电针的使用范围越来越广泛，对疗效的总结也在不断进行中。四、细胞电生理基础 信号主要是从神经元部分提取得针刺电信号，对这些信号的产生机理、信号范围、采集的方法的了解是对信号进行分析的先决条件，了解基本的机理也对信号分析有着指导性的意义。但由于本文只是对信号进行分析，不涉及机理层面上的讨论，所以本部分对针灸信号机理方面的叙述力求简洁。下文就从细胞膜切入，介绍动作电位的产生，并简单介绍了针灸信号检测的基本方法。（一）细胞膜结构 细胞是生物最基本的结构和功能单位。细胞的表面有细胞膜，它使细胞与周围环境隔离开，维持着相对稳定的细胞内环境，并具有保护细胞的作用，同时通过细胞膜实现内外物质的交换。细胞膜的生理功能复杂、多样，与生命科学中许多基本问题都有密切联系，如细胞起源、遗传信息传递、生物能量转换、物质运转、激素作用、神经传递、细胞免疫、细胞识别、细胞分化和增值等。近几年来细胞膜的研究已深入到生物学、医学等领域，已成为分子生物学中最活跃的领域之一。 细胞膜由多种化学成分组成，其中主要由磷脂和蛋白质组成。不同的细胞中，磷脂和蛋白质的含量不同。一般他说，蛋白质越多，细胞膜的生理功能越复杂、多样；相反，蛋白质越少，细胞膜的功能越简单。例如，神经髓鞘的功能比较简单，主要起绝缘作用，它的蛋白质含量只有19，磷脂的含量却为79。在电子显微镜下可以看到细胞膜是一层厚约8 nm的膜，如图21所示8，在膜中间是由磷脂分子组成的双分子层，它构成了膜的基本骨架，支持着许多蛋白质分子。这些蛋质分子可以分成两类：一类蛋白质分子镶在膜的表层，也就是排布在磷脂双分子层的外侧；另一类蛋白质分子，有的嵌插在磷脂双分子层中，有的贯穿在整个磷脂双分子层中。在细胞膜上有很多通道称为离子通道，细胞就是通过离子通道与外界进行物质交换的。这些通道由单个蛋白质分子或多个分子组成，并允许一些离子通过。如下图：（二）动作电位的产生与传导 动作电位指的是处于静息电位状态的细胞膜受到适当刺激而产生的，短暂而有特殊波形的，跨膜电位搏动。细胞产生动作电位的能力被称为兴奋性，有这种能力的细胞如神经细胞和肌细胞。动作电位是实现神经传导和肌肉收缩的生理基础9。 细胞膜上有多种离子通道。而动作电位的产生，则与钠和钾离子通道有关。这些离子通道的开关状态与膜电位有关，即是所谓的电压门控通道。例如钠离子通道，在静息时它是关闭并且是可激活的。当去极化到特定值时就会引起其构象的改变，成为打开状态。但是离子通道却不会持续停留在开放状态，它会在几毫秒内关闭。这是通过膜上蛋白质的失活域的活动实现的，这个失活域会像塞子一样堵住离子通道。离子通道这种状态被称为关闭并失活的。过渡状态关闭但可激活的只有在完全复极化后才可能出现，而开放可激活的状态是在简单模型中不可能实现的。一个关闭并失活的通道在复极过程中首先短时间内还是开放状态，然后才改变构象直接成为关闭但可激活的。再次激活只能发生在完全复极之后，在去极化的细胞膜中不可能存在着过渡状态开放并失活的。 （三）动作电位的形成过程可分为如图4-2所示的为四个相位 1在初始相膜电位去极至阈电位，这是动作电位产生的前提。刺激可以是旁边已兴奋的细胞膜电位改变，或者是化学突触上离子通道中的离子内流10。 2去极化过程中，膜电位陡峭上升至正值水平。这个锋电位中去极化部分被称为升支，而正的电位值则被称为超射。(注意:去极化指的是整个上升过程。) 3接下来朝静息电位方向的下降过程被称为复极化。 4在下降过程中，电位会短时间下降到低于静息电位水平，然后再上升达到静息电位，这种静息电位的增大（绝对值）被称为超极化（而下降部分被称为负后电位，上升部分则是正后电位）。 5动作电位持续约1-2 ms(神经元)，但也可达几百毫秒(心脏)。动作电位后是不应期，这又分为0.5 ms的绝对不应期和3.5 ms的相对不应期。前者无论刺激多频繁多强都不能引起动作电位，而后者则要更强的刺激（阈电位提高了）才能引起动作电位11。 图42动作电位的形成过程（四）动作电位传递的特点为 1全或无定律(all or noting)，动作电位的产生需要阈值，超过阈值后，将产生动作电位，并且幅值不再随刺激的强度变化，低于阈值时，动作电位不会产生。 2传递性，在刺激点产生的动作电位可以沿细胞膜向远处传播，并且使其幅值不随距离增加而衰减。3有不应期性，可以防止脉冲重叠。（五）人工神经网络的应用 本世纪八十年代末，神经网络的研究在国际上形成一股热潮，其原因是由于神经网络可将人脑的智能原理应用来解决工程技术及社会管理的许多复杂问题。生物医学工程工作者采用神经网络的方法来解释许多复杂的生理，例如心电和脑电的识别、心电信号的压缩和医学图像的识别和处理。神经网络是由大量处理单元广泛互连而成的网络。它反映了人脑功能的基木特性，是人脑的某种抽象、简化与模拟。网络的信息处理由神经元之间的相互作用来实现;知识与信息的存储表现为网络元件互连间分布式的物理联系;网络的学习和识别决定于各神经元连接权系数的动态演化过程。神经网络是一个具有高度非线性的超大规模连续时间动力系统，其最主要特征为连续时间非线性动力学、网络的全局作用、大规模并行分布处理及高度鲁棒性和学习联想能力。同时它又具有一般非线性动力系统的共性，即不可预测性、吸引性、耗散性、非平衡性、不可逆性、高维性、广泛联结性与自适应性等。 神经网络在微弱生理电信号的检测和处理中的应用主要集中在对自发脑电EEG的分析和脑干听觉诱发电位的提取。神经网络应用于诱发电位的提取，近年来已有一些报告，其中的一种方法是采用句法方法，它将整个诱发电位波形用句法方法根据斜率分段而表示成符号串，然后归结为四个特征量，再输入三层BP网络进行识别。 目前神经网络虽已在生物医学处理中得到广泛的应用，但大多数工作还处在实验室阶段，要真正应用丁临床中，尚需作大量的工作，如神经网络的专用集成电路芯片的开发、一些新的算法的研制等方面。五、实验模型 建立不同种类的动物模型以观察不同的针刺手法（提插、捻转、先提插后捻转、先捻转后提插）及其电针不同参数设置对脊髓背角神经元诱发电位及腓神经诱发电位的影响。（一）实验材料及实验仪器 本论文主要是对脊椎背角神经元诱发电位进行多方面的分析，所以下面主要介绍一下引导脊椎背角诱发电位实验所需的实验材料、实验仪器以及仪器参数的设置。（二）实验材料 1玻璃微电极的制备： 2.细毛胚管的清洁处理： 细毛胚管购自北京正天易科贸有限责任公司，外径0.91.5mm，长80100mm。配制清洁液：取容量为800ml左右的圆形玻璃标本缸一只，清洁干净，擦干。向标本缸内倒入浓硫酸250ml，然后向硫酸内缓缓倒入浓硝酸250ml，边倒边用玻棒搅拌均匀混合。操作在通风橱内进行。配好的清洁液加盖，存放在安全地点。清洁液可长时间使用，不必经常更换；将细玻璃管用塑料绳捆扎，10根一捆，浸没于清洁液中；12小时后取出，用自来水冲洗30min，在放入无水乙醇中洗涤。从酒精中取出，放入盛有高纯水的烧杯中加热煮沸10min，倒去高纯水，再换上新高纯水。这样反复三次。然后将玻璃管放入烤箱中烘干，放入清洁密闭的容器中保存备用。 3.玻璃微电极的制备 于南开大学生理实验室拉制，应用玻璃微电极拉制仪P97(美国)仪器；检查：拉出的电极立即放在显微镜下检查有无尖端、孔眼，并测其尖端直径及其阻抗。要求尖端直径在0.51um，阻抗在520M之间可用。电阻过小（如12M以下）表示电极尖端可能折断；电阻过大（如20M以上）表示电极中电解液可能有气泡； 4.灌注电解液 取二级分析纯氯化钾223.68g，加入高纯水1000ml配成3M溶液。为促使其溶解，可加热并搅动之。溶液配制成后用分析滤纸过滤两次，然后倒入电极贮存瓶内。玻璃细纤维法是利用拉制毛胚时已装入细玻璃管而形成的玻璃毛细管作用，直接用注射器向管内注射，冲灌液会顺利前进。 5.屏蔽箱： 将刺激器的两根刺激电极接到屏蔽箱上，刺激器的导线接刺激模块的1通道(刺激器只做接地使用，不做刺激)；同时针灸针的一端用导线连接到屏蔽箱上以接地。（三）实验过程 1大鼠定位： 将大鼠固定在大鼠定位仪上，下面垫上棉被以保温。用两根金属条夹住大鼠脊髓暴露部位使其固定； 2连接流程： （1）仪器接地：将刺激器的两根刺激电极接到屏蔽箱上，刺激器的导线接刺激模块的1通道(刺激器只做接地使用，不做刺激)；同时针灸针的一端用导线连接到屏蔽箱上以接地； （2）电极连接：将冲灌好饱和氯化钾的电极中插入大约20cm的银丝并垂直插入电极固定器中，银丝的另一端连接记录电极的褐色记录导线； （3）动物接地：将记录电极的褐色导线与银丝连接，黑色导线插入暴露部位肌肉，并用连接到屏蔽箱的夹子夹住大鼠的头部皮毛以将动物接地； （4）针灸针接地：将针灸针的一端用导线连接到屏蔽箱上以接地； 3引导诱发电位： （1）神经元选取：用推进器将灌流合格的微电极插入腰髓背角区域，距后正中沟旁开0.51mm，深度约在脊髓表面下0.51mm。用玻璃微电极细胞外记录背角神经元的放电,于感受野内施加的不同手法针刺刺激,选择伤害感受性神经元,即神经元(广动力神经元）进行观察。 （2）电极定位：脊髓正中旁开约0.8mm，脊髓表面下1.52mm之间； （3）实验分组：一共分四种：即a）同一手法在同一只大鼠的不同神经元上引导；b）不同手法在不同的大鼠神经元上引导；c）大鼠典型神经元的不同手法引导；d）不同操作着手法对比。其中实验分别应用四种针刺手法，它们是：捻转，提插，先捻转后提插，先提插后捻转。（四）实验结果 为了对实验数据有一定的了解，并为以后进一步进行数据分析提供依据，现在对实验数据进行一系列的统计分析。首先对数据做一下直方图统计： 图5-2周月凌捻转手法直方图 图5-3周月凌提插手法直方图 图 5-1 实验性胃溃疡模型 结束语针灸作为一种系统性的学术，探索针灸的功能及其机理，对临床诊断及研究有重要的指导价值。目前对针灸的研究主要还停留在医学实验方面，仅仅从一些直观生理反映做出经验性的结论，而在电学机理上的研究几乎还处于刚刚起步阶段。同时研究外部电场刺激对神经元的影响，已成为神经科学等研究领域中的重要研究内容。参考文献1高震，人体经穴综合系统论与神经论，针刺研究，2002，27(4)：3103122孙饰平，尹岭，朱克，针刺的中枢调节机制研究进展，针刺研究，2003，28(2)： 1511563李忠仁，针灸学术发展的动力是科学实验，南京中医药大学学报，2004，20(1)： 144管遵惠，国际针灸医学发展的回顾与展望，云南中医中药杂志，2003，055张建梁，晋志高等，脊髓背角神经元对胃扩张及电针“足三里”穴的反应，针刺研究，2001，26(4)：2682736陈莉，针刺运针与否对胃电图影响的观察，中国针灸，2004，24(3)：1891907曾燕，梁勋厂等，电针穴位对痛觉相关诱发脑电位的影响，针刺研究，2003， 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2003袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈葿螈聿蒄葿袁羁莀蒈羃膇芆蒇蚃羀膂蒆螅膅蒁薅袇羈莇薄罿膄芃薃虿羆艿薃袁节膅薂羄肅蒃薁蚃芀荿薀螆肃芅蕿袈芈膁蚈羀肁蒀蚇蚀袄莆蚇螂肀莂蚆羅袂芈蚅蚄膈膄蚄螇羁蒂蚃衿膆莈蚂羁罿芄螁蚁膄膀螁螃羇葿螀袅膃蒅蝿肈羆莁螈螇芁芇莄袀肄膃莄羂艿蒂莃蚂肂莈蒂螄芈芄蒁袆肀膀蒀罿袃薈羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅羇莁薀薈袃莀艿螃蝿荿莂薆膈莈薄袁肄莇蚆蚄羀莇莆袀袆羃蒈蚂螂羂薁袈肀肁芀蚁羆肁莃袆袂肀薅虿袈聿蚇蒂膇肈莇螇肃肇葿薀罿肆薂螆袅肅芁薈螁膅莃螄聿膄蒆薇羅膃蚈螂羁膂莈蚅袇膁蒀袀螃膀薂蚃肂腿节衿羈腿莄蚂袄芈蒇袇螀芇蕿蚀聿芆艿蒃肅芅蒁螈羁芄薃薁袆芃芃螆螂芃莅蕿肁节蒈螅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