细菌性阴道病联合测定试剂盒标准操作规程.doc

山大二院检验科 门诊化验室项目SOP文件 文件编号：JYKMZHYS 第2010年版 第1次修改分发部门：门诊化验室 保管部门：办公室细菌性阴道病联合测定试剂盒标准操作规程（干化学酶法）1. 原理本品检测包括过氧化氢H2O2（阴道乳酸杆菌的标志物）、唾液酸苷酶（加德纳菌、游动弯曲杆菌等BV致病菌的标志物）和白细胞酯酶Leukocyte Esterase LE（炎性细胞的标志物）三项指标。1.1 过氧化氢浓度测定阴道液中过氧化氢经过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化呈红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当样品中H2O2浓度2umol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2浓度成正比；样品中H2O2浓度2umol/L，反应结果呈蓝色。1.2 唾液酸苷酶活性测定：唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基，遇重氮盐起反应呈色，呈色深度与唾液酸苷酶活性成正比。1.3 白细胞酯酶活性测定：白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在有氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。2. 组成2.1 BV Set反应装置：铝箔包装，有上中下三个反应孔，分别为H2O2、SNA、 LE孔，20支。2.2 稀释液：MES 2-(N-吗啉代)乙烷磺酸缓冲液：10mmol pH6.5、含NaCl 0.9%， 8m1/瓶，1瓶。2.3 显色液 ：固紫B盐 0.15% ，1.5m1/瓶，1瓶。2.4 无菌棉签20支、软塑料试管20个。2.5 使用说明书1份。3. 样品采集和处理3.1 受检者的准备取样品前24小时应禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部上药等，以免影响检查结果。经期样品会对结果判读有影响，所以不宜做该项检测。3.2 样品的采集受检者取妇科检查常规体位，使用专用棉签于阴道后穹窿处旋转10-20秒，以清晰见到棉签上有分泌物附着为准。如果使用的棉签太短或棉球太小都不能保证取得适宜的样品，这些都会影响到检测结果。建议使用厂商赠送的棉签，取样前棉签不得做任何处理，包括使用消毒剂及任何液体。如不使用厂商赠送的棉签，则应保证棉签长度、棉球大小与厂商赠送的尽可能相同；应保证棉签是经过高温消毒的，但不能用环氧乙烷消毒，后者影响结果。3.3 样品的处理将带有样品的棉签放入厂商赠送的软塑料试管中，加400l稀释液或用稀释液滴瓶垂直滴加14-16滴，反复挤压棉签，使分泌物溢出。样品应及时检测，不能及时检测的样品应保存在2-8，但应在8小时内完成检测。4. 仪器4.1 微量移液器（100l、1000l）4.2 恒温水浴箱（37）或干浴器,推荐使用恒温水浴箱。5. 操作步骤5.1 将试剂盒从2-8取出，平衡到室温开始使用5.2 撕开铝箔包装，取出反应装置，轻轻揭掉反应孔上的铝箔条。注： 开封后的反应装置，须避光放置，并在当天使用完毕。5.3 在反应装置的三个孔中每孔滴加一滴处理过的样品，约35l，以没过反应孔1/2为宜，之后在“唾液酸苷酶”反应孔中滴加一滴“显色液”。5.4 将反应装置放在37水浴箱中显色15分钟，判读结果。 如使用干浴器则严格按如下要求操作：a使用的环境温度： 18-25b设定温度4448，建议使用48c开机预热不少于10分钟d反应时间15分钟5.5 检测完毕后，将试剂盒放回2-8保存。特别提示：试剂盒各组分要求使用同批号产品。6. 结果判读特别提示：反应结束后，应立即判读结果。6.1 过氧化氢（反应装置上部的反应孔）：正常时显红色、紫色或蓝紫色；不正常时显蓝色。如显灰色或灰蓝色，则为样品稀释过度，建议重新采样或判读为正常。6.2 唾液酸苷酶（反应装置中部的反应孔）：不显色或黄色为阴性，显棕黄色为脓性、血性样品以及脓稠分泌物所致，应判读为唾液酸苷酶阴性；显红、紫色或蓝色为阳性，显蓝色表示唾液酸苷酶活性浓度很高。6.3 白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）：参照标准比色板。“-”和“”表示白细胞酯酶阴性，“+”、“+”、“ +”表示白细胞酯酶阳性。7. 技术参数7.1 重复性：7.1.1 批内重复性：90% 7.1.2 批间重复性：90% 7.2 最低检出量过氧化氢2mol/L、唾液酸苷酶7单位/ml、白细胞酯酶9单位/ml7.3 检出符合率9.3.1 阳性参考品符合率7.3.1 .1 过氧化氢2mol/L 阳性率90%9.3.1.2 唾液酸苷酶7单位/ml 阳性率90%9.3.1.3 白细胞酯酶9单位/ml 阳性率90%7.3.2 阴性参考品符合率9.3.2.1 过氧化氢2mol/L 阴性率90%9.3.2.2 唾液酸苷酶7单位/ml 阴性率90%9.3.2.3 白细胞酯酶9单位/ml 阴性率90%8. 使用条件 1530，避免阳光直射。9. 贮存条件 28，避光保存。 10. 有效期 一年。11. 参考文献1 中华人民共和国卫生部行业标准,WS/T 227-2002 临床检验操作规程编写求,2002-07-01。2 中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第二版）。南 京：东南大学出版社，1997。268。3 BRISELDEN A MSialidases(neuraminidases)in bacterial vaginosis and bacterial vaginosis-associated micmflora JJ Clin Microbiol， 1992，30(3)：663-6664 AMSEL R，TOTTEN P A，SPIEGAL C A，et al、Nonspecific vaginitis：diagnostic criteria and microbial and epidemiological associationsJAm J Med，1983，74(1)：14225 陈德灵，阮鑫丹，柳萍飞。阴道分泌物微生态检测指标的临床应用。J中国微生态学杂志，2007，4，19（