血型鉴定及交叉配血.ppt

实验十一 血型鉴定及交叉配血 医学检验学院检验基础实验室 实验内容 一 红细胞悬液的制备二 ABO血型鉴定 试管法 和Rh血型鉴定三 交叉配血 盐水介质和聚凝胺介质 临床中 待测 制成红细胞悬液 待测 一 红细胞悬液制备 常用浓度 1 2 5 10 方法 抗凝血移去上层血浆待测 洗涤 剩余的红细胞中加5MLNS 混匀 洗涤 弃上清 此步骤重复3次 最后一次上清应清亮并全部弃去 配制悬液 根据要求浓度 如 5 洗涤后压积红细胞1滴 19滴NS 混匀 二 ABO血型鉴定 一 正定型 二 反定型 二 ABO血型鉴定 盐水介质 一 正定型原理 用特异性血型抗体检测被检RBC 在盐水介质中发生肉眼可见的凝集 从而测定被检RBC膜上有无与特异性血型抗体相对应的抗原 进一步判定血型 二 ABO血型鉴定 一 正定型方法 1 试管法 加标准血清1滴 A B 加红细胞悬液1滴 5 混匀 离心观察结果 1000r min 1min A B 二 ABO血型鉴定 正定型判定结果 试管法 轻轻摇动 或捻动 试管 使沉于管底的RBC浮起 观察有无凝集或溶血 如上层清亮 管底有RBC凝块 轻弹管底 凝块无散开 为凝集 如上层清亮 管底有RBC沉积 边缘整齐 轻弹管底 RBC浮起或成为均匀的RBC悬液 则为不凝集 一 若不确定 可将反应物倒在载玻片上 显微镜下观察 注意 若上层为清亮的樱红色 考虑是否溶血 二 ABO血型鉴定 二 反定型 原理 用标准红细胞检测被检血清 血浆 在盐水介质中发生肉眼可见的凝集 从而测定被检血清 血浆 中有无与标准红细胞相对应的抗体 进一步判定血型 二 ABO血型鉴定 二 反定型方法 1 试管法 加待测血清2滴 加标准红细胞悬液1滴 混匀 离心观察结果 方法同正定型 1000r min 1min A B 二 ABO血型鉴定 结果判定 正定型 反定型 二 ABO血型鉴定 凝集强度的判断见实验指导表格注意 1 正反定型一致才能确定结果 2 所用器材必须清洁干净 避免溶血 专型专用 3 控制离心速度和时间 防止假阳性和假阴性 4 抗原抗体比例要适当 5 溶血时 注意结果的判定 6 正反定型结果不一致时 不可轻易判定 需查明原因 可能有技术问题也可能有标本问题 Rh D 血型鉴定 原理 IgM型抗D标准血清与被检者RBC表面D抗原在室温条件下盐水介质中产生特异性反应 根据是否出现凝集判断是否有D抗原的存在 Rh D 血型鉴定 加抗D血清1滴 加红细胞悬液1滴 5 轻轻摇动玻片混匀 2min内判断结果 有凝集 无凝集需按照说明书进一步实验确认是否为阴性 Rh D 血型鉴定 注意事项 1 按照试剂说明书操作2 先加血清 后加RBC悬液 可通过视觉判断以免出现漏加抗D试剂导致的假阴性结果3 观察结果时 应轻轻捻动试管 若用力摇动 可认为破坏弱凝集 误判为 一 性 三 交叉配血 概念 供血者的血浆 红细胞与受血者的红细胞 血浆混合 观察有无凝集反应 方法 盐水介质法 聚凝胺介质法 微柱凝胶法 抗人球蛋白法 酶介质法 交叉配血 主侧 受血者血浆 供血者红细胞Ps patientserumDc donorcell次侧 供血者血浆 受血者红细胞Ds donorserumPc patientcell 受血者 献血者 Ps Pc Ds Dc 主侧 次侧 3 5 1 一 盐水介质法 原理 ABO血型天然IgM类抗体与对应的RBC抗原特异性结合时 在盐水介质中出现肉眼可见的凝集 通过判断是否凝集 判断是否有血型不合的情况 一 盐水介质法 操作 1 取两只小试管 标明主和次侧2 主侧 受血者血浆2滴 献血者红细胞1滴次侧 献血者血浆2滴 受血者红细胞1滴3 混匀 离心 1000r min 离心1min4 观察结果 轻轻摇动 或捻动 试管 使沉于管底的RBC浮起 观察有无凝集或溶血 如上层清亮 管底有RBC凝块 轻弹管底 凝块无散开 为凝集 如上层清亮 管底有RBC沉积 边缘整齐 轻弹管底 RBC浮起或成为均匀的RBC悬液 则为不凝集 一 若不确定 可将反应物倒在载玻片上 显微镜下观察 二 聚凝胺介质法 原理 聚凝胺是一种高价阳离子多聚物 在液体中可产生负电荷 中和红细胞表面的负电荷 减轻细胞间排斥力 缩短红细胞距离 在离心力作用下 可使红细胞发生发生可逆性 非特异性凝集 低离子液可降低可增强抗原 抗体间的吸引力 促进血型抗体与红细胞