结核分枝杆菌ppt课件.ppt

1 结核病是一种古老的疾病 从新石器时代人类的遗骨和古代木乃伊的骨关节的病理组织中 已发现人类在史前时代已患过结核病 中国医史中 结核病最早记载于 内经 并形容为 虚痨 之症 古代文献有提及肺痨为痨虫于肺所致 但未能确定致病的成因 19世纪 结核病在欧洲和北美大肆流行 散布到社会的各个阶层 生活困顿的人群成了结核病的温床 而且是当时造成死亡的主要原因 被人们称为 巨大的白色瘟疫 许多当年杰出的人物罹患结核病 雪莱 席勒 勃朗宁 梭罗等 结核病的流行甚至影响了诗人和艺术家的思想 2 德国科学家RobertKoch在1882年发现了一种特殊的微生物 结核杆菌 结核病的致病细菌 他还证明了这种微生物是可以在培养基里培养出来的 这一发现使得结核的实验研究成为现实 3 世界结核病防治现状 自发现MTB以来 全球约有两亿人死于TB 且疫情发展日趋严重 WHO已将TB作为重点控制的传染病之一 并于1995年起将每年的3月24日定为 世界防治结核病日 以提醒公众加深对TB的认识 4 据WHO预计 目前全球约20亿人已感染了MTB 全球现有TB病人2000万 TB的死亡将达历史最高水平 全球每天有8000人死于TB 每年约300万人死于TB 特别是在发展中国家 TB的形势尤其严峻 全球98 的TB死亡和95 的新发TB都是在发展中国家 5 6 我国属于全球22个TB高负担国家之一 TB的患病人数在世界各国中居于第2位 我国TB的流行具有 五多一高 的特点 MTB感染人数多 现患肺TB病人多 TB死亡人数多 耐药TB人多 农村TB人多 传染性肺TB患者疫情居高不下 7 第1节结核分枝杆菌 mycobacteriumtuberculosis 8 主要特点 1 形态为细长略弯曲 有分枝生长趋势 2 细胞壁含有大量脂质 主要是分枝菌酸 主要特点 与致病性 染色性和抵抗力密切关 3 染色方法 齐 尼 Ziehl Neelsen 抗酸性染色法 又名抗酸杆菌 acid fastbacilli 4 结构上无鞭毛 无芽胞 5 致病物质 无外毒素 无内毒素 致病与菌体成分有关 6 致病 疾病呈慢性并伴肉芽肿 9 分类该属细菌分三类 1 结核分枝杆菌复合群 2 非结核分枝杆菌 3 麻风分枝杆菌 10 M tuberculosismajorhumandiseasehealthypeopleproblemsassociationwithAIDSmultipledrug resistance Tuberculosis 肺结核 TB consumption肺病 11 形态与染色1 细长略弯曲的杆菌 呈单个 分枝排列 或聚集成团 在陈旧的病灶和培养物中 形态常不典型 可呈颗粒状 串珠状 短棒状 长丝形等 青霉素 环丝氨酸 溶菌酶 干扰肽聚糖的合成 异烟肼 INH 影响细胞壁分枝菌酸的合成 2 某些药物可影响结核杆菌细胞壁的结构而成为L型菌 一 生物学性状 12 3 染色方法 齐 尼 Ziehl Neelsen 氏抗酸染色法 acid faststain 原理 细胞壁中含大量的脂质 尤其是其中的分枝菌酸 mycolicacid 影响染料的渗透 且一旦着色便可抵抗盐酸酒精的脱色作用 步骤 涂片 固定 石炭酸复红 弱火加温 3 5分钟 盐酸酒精 美兰复染 镜检 结核杆菌呈红色 背景为兰色 13 14 L型结核杆菌 细菌型 丝状型 颗粒型 15 4 结构 无芽孢 无鞭毛 具有荚膜 16 二 培养特性 1 营养要求较高 Lowenstein Jensen L J 即罗氏培养基 含蛋黄 甘油 马铃薯 无机盐和孔雀绿 含脂质生长因子 刺激生长 抑制杂菌生长 10 30天见菌落生长 呈颗粒 结节或花菜状 乳白色或米黄色 不透明 液体培养基上呈菌膜生长 含脂质量多 专性需氧 2 专性需氧 PH6 5 6 8 17 18 19 生化反应 结核杆菌不发酵糖类1 人型与牛型结核杆菌的区别 人型可合成烟酸及还原硝酸盐 而牛型不能2 结核杆菌与非结核杆菌的区别 热触酶试验 结核杆菌触酶试验阳性 热触酶试验阴性 非结核杆菌触酶试验 热触酶试验阳性 热触酶试验 将浓的细菌悬液置68 水浴加温20分钟 然后再加H202 观察是否产生气泡 有气泡的为阳性 20 抵抗力1 对干燥的抵抗力强 对酸碱有抵抗力 对龙胆紫 孔雀绿有抵抗力 可抑制杂菌的生长 2 对湿热及紫外线敏感 62 63 15分钟 100 立即 对乙醇敏感 70 乙醇 2min死亡 3 对链霉素 SM 异烟肼 INH 利福平 RFP 等抗痨药物敏感 故可用3 Hcl 4 NaOH 6 H2SO4处理有杂菌污染的标本和消化标本中的粘稠物质 易产生耐药 21 变异性1 细菌形态 菌落及免疫原性的变异 2 毒力的变异 卡介苗 Calmette与Guerin1908年 牛型结核杆菌 13年 230次传代减毒活菌苗株3 耐药性变异1 自发突变 原发性耐药 2 用药不当经突变选择产生 继发突变 多重耐药的主要原因 控制耐药的基因在染色体上 不同的耐药基因不相连接 故联合用药治疗有效 22 二 致病性 1 细菌在组织细胞内大量繁殖引起炎症 2 菌体成分和代谢物质的毒性 3 机体对菌体成分产生的免疫损伤 23 Virulencefactors Nospore noflagellum noexotoxin noendotoxin noinvasiveenzymeCapsule polysaccharide CR3 enzyme protectLipid LipoarabinomannanHeat shockprotein Tuberculinprotein antigenicity oldtuberculin associatewithwaxDcancausehypersensitivityandformtubercle 24 Pathogenesisoftuberculosis infectslungdistributedwithinmacrophagesfacultativeintracellularpathogeninhibitsphagosome lysosome 吞噬 溶酶体 fusionresistslysosomalenzymes 溶酶体酶 25 致病物质 荚膜 脂质 蛋白质 1 荚膜 capsule 主要成分为多糖 部分脂质和蛋白质1 与吞噬细胞表面的补体受体3 CR3 结合 助于结核分枝杆菌在宿主细胞上的粘附与入侵 2 具有多种酶 降解宿主组织中的大分子物质 提供细菌繁殖所需要的营养 3 能防止宿主有害物质进入结核分枝杆菌 4 可以抑制吞噬体与溶酶体的融合 26 2 脂质 尤其是糖脂 磷脂 促使单核细胞增生 结合结节 干酪样坏死 分枝菌酸 与抗酸性有关 脂质中的主要成分 6 6双分枝菌酸海藻糖 索状因子 cordfactor 破坏细胞线粒体膜 damagesmitochondria 影响细胞呼吸 抑制白细胞游走和引起慢性肉牙肿 蜡质D 肽糖脂与分枝菌酸的复合物 激发机体产生迟发型变态反应 并具有佐剂作用 硫酸脑苷脂 抑制吞噬体与溶酶体的结合 结核杆菌在吞噬细胞中长期存活 27 3 蛋白质 1 结核菌素为主要成分 与蜡质D共同刺激机体产生变态反应 2 结核菌素可刺激机体产生抗体 但此抗体无保护作用 28 4 分枝杆菌生长素 脂溶性的铁螯合物 与宿主机体竞争铁 5 多糖 与蜡质D结合引起局部病灶的细胞浸润 29 Transmission tuberculosis M tuberculosiscausesdiseasehealthyindividualstransmittedman manairbornedroplets 空气颗粒 30 Transmission Throughrespiratorytract alimentarytract injuredskin TBinthelungsorthroatcanbeinfectious Thismeansthatthebacteriacanbespreadtootherpeople TBinotherpartsofthebody suchasthekidneyorspine isusuallynotinfectious 31 致病机制1 可通过呼吸道 消化道或皮肤损伤侵入机体 以肺结核最常见 2 临床类型 肺部感染 肺外感染 原发感染 原发后感染 无反应性结核 根据感染菌的毒力 数量 机体的免疫状态不同 32 Pathogenesis primaryinfection1 lunginfectionsecondaryinfection2 Outlunginfection 33 Clinicalsyndromes a fatigue weakness weightlossandfeverb pulmonaryinvolvement chroniccough spitbloodc meningitisorurinarytractinvolvementd bloodstreamdissemination miliarytuberculosiswithlesionsinmanyorgansandahighmortalityrate 34 35 肠结核 36 原发综合征 原发灶 肺泡巨嗜细胞吞噬结核杆菌抵抗溶菌酶继续繁殖巨嗜细胞破坏 引起肺泡渗出性炎症 淋巴管炎 结核杆菌经淋巴管运送至肺门淋巴结 肺门淋巴结肿大 3 6周 机体产生特异性细胞免疫 同时出现变态反应 1 刺激巨噬细胞 上皮样细胞 相互融合或经核分裂 多核巨细胞 即朗罕巨细胞 2 抑制蛋白酶对组织的溶解 病灶组织溶解不完全 干酪样坏死 磷脂 结核结节 由内向外 上皮样细胞 淋巴细胞 巨噬细胞和成纤维细胞 37 原发后感染 外源性感染内源性感染 特点 病灶局限 不累计邻近的淋巴结 结局 干酪样病灶钙化痊愈 干酪样结节破溃 排入邻近支气管 形成空洞 38 特殊情况 无反应性结核 无结核结节 原因 结核菌L型细胞壁缺乏脂质成分 不能刺激结节形成而仅有淋巴结肿大和干酪样坏死 无反应性结核易被误诊为慢性淋巴结炎 39 Cell mediatedimmunity tuberculosis infiltrationmacrophages 巨噬细胞 lymphocytes 淋巴细胞 Granulomas 肉芽肿 Tubercules 结核结节 40 三 免疫性 免疫机制 以细胞免疫 Cell mediatedimmunity 为主1 肺泡中的巨噬细胞吞噬结核杆菌后并不能防止结核杆菌的生长 41 2 巨噬细胞释放炎症因子 吸引血液中的单核细胞至病灶 吞噬作用加强 T细胞 致敏 释放IL 2 IL 4 IL 6 INF TNF 呼吸爆发 活性氧中介物和活性氮中介物产生 杀死胞内菌 3 NK和CD4 CD8 T细胞可直接杀死靶细胞 激活 42 感染 传染性免疫 infectionimmunity 即带菌免疫即只有当结核杆菌或其组分在体内存在时才有免疫力 卡介苗的活性 43 免疫与变态反应郭霍现象 Kochphenomenon 说明细胞免疫与变态反应同时出现 原理 1 结核菌素蛋白 蜡质D TDTH 巨噬细胞移动抑制因子 MIF 抑制M 的移动 变态反应性炎症反应 2 结核杆菌核蛋白体RNAT TH 结核杆菌生长抑制因子 MycoIF 通过巨噬细胞特异性地抑制细胞内的结核杆菌的繁殖 获得免疫 刺激 释放 44 结核菌素试验1 定义 用结核菌素 TB菌体蛋白 进行皮肤试验 以测定机体对结核杆菌是否能引起变态反应 从而判断机体是否受过结核菌感染及机体对结核杆菌感染是否获得特异性细胞免疫力的一种试验 45 TuberculinSkinTest Tuberculinisamixtureknownaspurifiedproteinderivatives PPD fromTBbacilli Itisatestfordelayedtypehypersensitivity Positivereaction reddeningandthickening 5mm atthesiteofinjectionafter2 3days indicatescellularimmunitytotuberclebacilli 46 Laboratorydiagnosis tuberculosis skintestingdelayedhypersensitivitytuberculinproteinpurifiedderivative PPDX ray 47 2 原理完整的结核杆菌同时具有两种成分 结核菌素蛋白结核杆菌核蛋白体RNA 和能同时刺激两种因子的产生 故可通过测定机体对结核杆菌的变态反应而判断机体是否对结核杆菌有免疫力 48 3 结核菌素试剂 旧结核菌素 OT 将结核杆菌接种于甘油肉汤培养基 培养4 8周后加热浓缩过滤制成 主要成分为结核菌蛋白 纯蛋白衍化物 PPD 是OT经三氯醋酸沉淀后纯化物 1 人结核分枝杆菌制成的PPD C 2 卡介苗制成的BCG PPD 49 4 方法分别取2种PPD5单位注射于两前臂皮内 48 72小时后观察结果 测量红肿硬结直径 50 5 结果判断红肿硬结直径 5mm 阳性 15mm或局部皮肤发生水泡与坏死者 强阳性 若PPD C侧红肿大于BCG PPD侧则为结核杆菌感染 若BCG PPD侧红肿大于PPD C侧 可能系卡介苗接种所致 51 Skintest PPD CBCG PPD 5mm 15mm PPD C BCG PPDinfected 52 Mantouxmethod WhentheMantouxskintestisperformed aneedleisinjectedintotheupperskinlayerofthepatient sarm Thearmisexamined48to72hoursafterthetuberculininjectioninordertoevaluatethereactiononthepatient sskin Anyswellingthatcanbefeltaroundthesiteoftheinjection alsoknownasinduration 硬结 ismeasured ThediagnosisofTBinfectiondependsonthesizeofthemeasuredindurationandthepatient sindividualriskfactors 53 Positiveskintest tuberculosis indicatesexposuretoorganismdoesnotindicateactivedisease 54 意义阴性需考虑以下情况 感染初期 产生抗体需3 6周 老年人 免疫力弱 严重结核患者或正患其他传染病导致细胞免疫力低下 例麻疹病毒 获得性细胞免疫低下 例AIDS或免疫抑制剂的应用 55 7 应用1 选择卡介苗接种对象和免疫效果的测定 2 婴幼儿结核病诊断的参考 3 测定肿瘤患者的非特异性细胞免疫功能 细胞免疫与变态反应的一致性 4 在未接种过卡介苗的人群中调查结核病流行情况 56 四 微生物学检查结核病的诊断方法有多种 但确诊必须进行细菌学检查 1 标本根据感染部位不同 可取痰 尿 粪 脑脊液 关节液 胸腔积液 腹腔积液等 2 直接涂片镜检标本处理 抗酸染色 若找到抗酸性杆菌即可初步诊断 3 分离培养将处理材料接种于罗氏培养基 每周观察生长情况 一般3 4周长成肉眼可见的菌落 4 快速诊断PCR技术和核酸探针技术 57 Diagnosis ThestepstodiagnoseTBinfectionanddiseaseinclude Amedic